重组NINJ2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物技术

本发明专利技术公开了一种重组NINI2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物，重组NINI2蛋白的氨基酸序列为：(1)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；或(2)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸，表达出具有与序列SEQ ID No：2表达的蛋白质或多肽具有同等活性或相同生物学功能的蛋白质或多肽的氨基酸序列。本发明专利技术的重组NINJ2蛋白能通过阻断肝星状细胞活化通路，减少肝脏细胞外基质和胶原纤维沉积，最终来抑制肝脏纤维化的发生发展过程。发展过程。发展过程。

【技术实现步骤摘要】
重组NINJ2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物


[0001]本专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种重组NINJ2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物。

技术介绍

[0002]肝纤维化是由多种慢性致病因素所致肝损伤或炎症后，肝组织修复过程中细胞外基质(ECM)过度沉积所致的病理过程与结果，是对导致肝损伤的肝脏产生的异常伤口愈合反应。由于产生的纤维瘢痕的存在，肝脏的结构被破坏，导致肝细胞丢失和肝脏正常功能的松弛，最终导致肝功能衰竭。肝纤维化是一个严重的健康问题。如果不治疗，会导致晚期肝硬化和肝细胞癌(HCC)。
[0003]肝纤维化是由于各种因素引起的慢性肝损伤的反应，如饮酒、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、病毒性肝炎(HBV)和丙型肝炎(HCV)、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和淤胆性肝病。往往我们认为肝脏纤维化是不可逆的。因此，如何有效控制肝脏纤维化的发生，成为了临床干预的基础。探明肝脏纤维化疾病分发病机理及寻找有效的干预方法，具有重要的临床及研究意义。
[0004]在肝纤维化的发生机制中，肝星状细胞(HSCs)活化是导致肝纤维化的中心事件。生长因子信号在肝星状细胞活化中起重要作用，主要通过血小板衍生生长因子(PDGF)信号传导。在肝纤维化时，HSC表面的PDGF受体以β受体为主，与PDGF
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BB具有较强的亲和力，认为PDGF
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BB以及PDGF
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β在肝纤维化过程中的作用尤为突出。靶向降低或消除致病细胞因子PDGF
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BB有助于治疗肝脏的纤维化。在纤维化疾病的发病过程中，血小板衍生生长因子(PDGF)在刺激肌成纤维细胞的复制、存活和迁移中起着重要作用。肝细胞通过释放多种细胞因子和生长因子，对HSC施加旁分泌刺激化合物，参与启动和维持HSC的激活。PDGFBB在这些表型反应,特别是星状细胞的增殖和趋化中起主要作用。
[0005]NINJ2基因相关研究极少，仅有的功能研究发现NINJ2可介导细胞之间的黏附，调控炎症通路。大型人群研究显示NINJ2可能还调控肥胖等相关表型。目前使用NINJ2蛋白对肝脏纤维化的治疗目前尚无报道。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了重组NINJ2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物，其目的在于重组NINJ2蛋白能通过阻断肝星状细胞活化通路，减少肝脏细胞外基质和胶原纤维沉积，最终来抑制肝脏纤维化的发生发展过程。本专利技术的重组NINJ2蛋白能制备用于预防或治疗肝脏纤维化或肝脏纤维化导致的代谢综合症的药物。
[0007]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种重组NINI2蛋白，所述重组NINI2蛋白的氨基酸序列为：
[0008](1)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；或
[0009](2)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸，表达出具有与序列SEQ ID No：2表达的蛋白质或多肽具有同等活性或相同生物学功能的蛋白质或多肽的氨基酸序列。
[0010]进一步地，所述重组NINI2蛋白的氨基酸序列包括：与序列SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列同源性在80％
‑
100％的编码具有相同生物学功能的蛋白质或多肽的氨基酸序列。
[0011]进一步地，所述重组NINI2蛋白在制备用于治疗或预防肝脏纤维化疾病或肝脏纤维化疾病导致的代谢综合症的药物中的用途；
[0012]按照本专利技术的另一方面，提供一种编码重组NINJ2蛋白的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码如权利要求1
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3任一项所述的重组NINI2蛋白；
[0013]进一步地，其特征在于，所述核苷酸序列具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；
[0014]按照本专利技术的另一方面，提供一种重组NINJ2蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组NINJ2蛋白的制备方法包括：
[0015]S100：将NINJ2基因与His标签序列连接后，插入到原核表达载体pet28a的多克隆酶切位点处，构建含有NINJ2基因的重组质粒pet28a
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NINJ2；
[0016]S200：将S100所述的重组质粒转染进入大肠杆菌BL21，并通过卡那霉素抗性筛选，得到具有抗生素抗性的阳性细胞克隆；
[0017]S300：将S200中得到的阳性细胞克隆扩增培养后，分离纯化后得到所述重组NINJ2蛋白；
[0018]进一步地，使用SEQ ID NO：3所示的正向引物和SEQ ID NO：4所示的反向引物,应用PCR方法从人的cDNA中克隆得到NINJ2基因。
[0019]进一步地，S300所述的阳性细胞克隆扩增培养包括IPTG诱导蛋白表达；
[0020]按照本专利技术的另一方面，提供一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂以及权利要求1
‑
3任一项所述的重组NINI2蛋白；
[0021]进一步地，所述药物组合物为注射液。
[0022]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，本专利技术提供一种重组NINJ2蛋白、编码该蛋白的基因、制备方法及药物组合物，重组NINJ2蛋白能通过阻断肝星状细胞活化通路，减少肝脏细胞外基质和胶原纤维沉积，最终来抑制肝脏纤维化的发生发展过程。本专利技术的重组NINJ2蛋白能制备用于预防或治疗肝脏纤维化或肝脏纤维化导致的代谢综合症的药物。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例生理盐水对照组及NINJ2治疗组肝脏纤维化小鼠的肝脏纤维化天狼星红胶原纤维染色结果图；
[0024]图2为本专利技术实施例生理盐水对照组及NINJ2治疗组肝脏纤维化小鼠的肝脏纤维化α
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SMA免疫荧光染色结果图；
[0025]图3为本专利技术实施例生理盐水对照组及NINJ2治疗组肝脏纤维化小鼠的肝功能参数的丙氨酸转氨酶(ALT)指标图；
[0026]图4为本专利技术实施例生理盐水对照组及NINJ2治疗组肝脏纤维化小鼠的肝功能参数的天冬氨酸转氨酶(AST)指标图；
[0027]图5为本专利技术实施例生理盐水对照组及NINJ2治疗组肝脏纤维化小鼠的肝脏苏木素伊红(hematoxylin and eosin，H&E)图；
[0028]图6为本专利技术实施例重组NINJ2蛋白抑制肝脏纤维化机制图。
具体实施方式
[0029]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0030]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组NINI2蛋白，其特征在于，所述重组NINI2蛋白的氨基酸序列为：(1)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；或(2)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸，表达出具有与序列SEQ ID No：2表达的蛋白质或多肽具有同等活性或相同生物学功能的蛋白质或多肽的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的重组NINI2蛋白，其特征在于，所述重组NINI2蛋白的氨基酸序列包括：与序列SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列同源性在80％
‑
100％的编码具有相同生物学功能的蛋白质或多肽的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的重组NINI2蛋白，其特征在于，所述重组NINI2蛋白用于制备治疗或预防肝脏纤维化疾病或肝脏纤维化疾病导致的代谢综合症的药物。4.一种编码重组NINJ2蛋白的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码如权利要求1
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3任一项所述的重组NINI2蛋白。5.如权利要求4所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的核苷酸序列包括：SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。6.一种重组NINJ2蛋白的制备方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐承启，王擎，王一帆，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：