一种LEAP-2重组蛋白和一种重组乳酸乳球菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种LEAP

【技术实现步骤摘要】
一种LEAP
‑
2重组蛋白和一种重组乳酸乳球菌及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种LEAP
‑
2重组蛋白和一种重组乳酸乳球菌及其应用。

技术介绍

[0002]肥胖以成为全球范围内普遍存在的一种疾病，降低人们生活质量，威胁人们生命健康。中度或严重肥胖症患者服用治疗药物主要包括二甲双胍、GLP
‑
1相关的药物及氯卡色林等，副作用风险较大，选择手术治疗，其长远效果的反弹率、对人体有无潜在危害目前还不清楚。
[0003]Ⅱ型肝脏表达抗菌肽(Liver
‑
expressed antimicrobial peptide
‑
2，LEAP
‑
2)是在肝脏中特异性高表达的第二类抗菌肽，最初从人血超滤液中分离获得，对特定的细菌和真菌具有抑制效果。有研究发现，LEAP
‑
2可作为胃饥饿素受体(Growth hormone secretagogue receptor 1a，GHS
‑
R1a)的反向激动剂和拮抗剂。当机体肥胖时，会激活LEAP
‑
2的高表达，LEAP
‑
2与胃饥饿素竞争性结合受体上的位点，抑制“刺鼠相关蛋白/神经肽Y”(Agouti
‑
related protein/NeuropeptideY，AgRP/NPY)神经元的激活，实现降低食欲，控制体重增长。但是由于LEAP
‑
2的半衰期短以及无法耐受消化道蛋白酶的作用，目前的研究都是在动物模型体内通过注射的方式探索LEAP
‑
2对食物摄入量的影响，如何将其制备为口服产品并没有相关报道。
[0004]NICE系统是基于L.lactis自动调节nisin生物合成机制的一种基因表达系统，也是乳酸菌中唯一的商业表达系统。常利用NICE系统调节各种蛋白质，但是采用NICE系统表达重组蛋白可能会出现菌株生长速度慢、达到最大蛋白质产量所需的时间较长、表达水平较低等问题，这使得该表达系统不能很好地对外源蛋白进行分泌；L.lactis拥有一种独特的的胞外管家蛋白酶htrA，它参与菌株的代谢过程，包括原肽的加工、天然蛋白的成熟和重组蛋白的降解等，容易造成L.lactis表达系统分泌的外源蛋白的降解。因此，NICE系统如何正确且高效表达LEAP
‑
2，尚未见到相关研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种LEAP
‑
2重组蛋白和一种重组乳酸乳球菌及其应用，以克服现有技术中肥胖治疗效果较差的问题。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种LEAP
‑
2重组蛋白，所述LEAP
‑
2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了编码上述LEAP
‑
2重组蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]本专利技术还提供了一种LEAP
‑
2的重组表达载体，所述重组表达载体包括初始载体和上述的编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因。
[0010]优选的，所述初始载体为pNZ8149载体，所述编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因克隆至所述重组载体的NcoI与XbaI酶切位点之间。
[0011]本专利技术还提供了一种表达上述LEAP
‑
2重组蛋白的重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌中转化有上述LEAP
‑
2重组表达载体。
[0012]优选的，所述重组乳酸乳球菌通过Nisin进行诱导表达。
[0013]优选的，所述Nisin的浓度为0.5～1.5ng/mL。
[0014]本专利技术还提供了重组乳酸乳球菌在制备改善肥胖的产品中的应用。
[0015]优选的，所述改善肥胖的产品中重组乳酸乳球菌的浓度为3
×
10
13
～8
×
10
13
CFU/ml。
[0016]本专利技术的技术效果和优点：本专利技术成功构建了LEAP
‑
2的乳酸乳球菌表达体系，通过特定浓度的Nisin诱导成功表达了LEAP
‑
2；并且得到的重组菌液通过在肠道中的定植，可源源不断诱导表达LEAP
‑
2，结果显示其能够对高糖高脂饲喂小鼠摄食量及体重起到调节作用。
附图说明
[0017]图1为PCR鉴定电泳结果；
[0018]图2为Western blotting检测表达结果；
[0019]图3为小鼠体重增长率结果。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种LEAP
‑
2重组蛋白，所述LEAP
‑
2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0021]本专利技术还提供了编码上述LEAP
‑
2重组蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0022]本专利技术还提供了一种LEAP
‑
2的重组表达载体，所述重组表达载体包括初始载体和上述的编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因，所述初始载体优选为pNZ8149载体，所述编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因优选克隆至所述重组载体的NcoI与XbaI酶切位点之间。
[0023]本专利技术还提供了一种表达上述LEAP
‑
2重组蛋白的重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌中转化有上述LEAP
‑
2重组表达载体，所述重组乳酸乳球菌优选通过Nisin进行诱导表达，所述Nisin的浓度优选为0.5～1.5ng/mL，进一步优选为0.8～1.2ng/mL。
[0024]本专利技术还提供了重组乳酸乳球菌在制备改善肥胖的产品中的应用，本专利技术对所述改善肥胖的产品的种类和剂型并无特殊要求，能够保留重组乳酸乳球菌活性即可；所述改善肥胖的产品中重组乳酸乳球菌的浓度优选为3
×
10
13
～8
×
10
13
CFU/ml，进一步优选为4
×
10
13
～6
×
10
13
CFU/ml。
[0025]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0026]实施例1设计LEAP
‑
2编码基因
[0027]选择人LEAP
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2成熟肽基因序列进行截取，得到LEAP
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2基因目的片段，(核苷酸序列：GTCATCATCATCATCACCATA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种LEAP
‑
2重组蛋白，其特征在于，所述LEAP
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2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述LEAP
‑
2重组蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种LEAP
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2的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括初始载体和权利要求2所述的编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因。4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述初始载体为pNZ8149载体，权利要求2所述的编码LEAP
‑
2重组蛋白的基因克隆至所述重组载体的NcoI与XbaI酶切位点之间。5.一种表达权利要求1所述LE...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，王珊珊，高琪，王令，路宏朝，
申请(专利权)人：陕西理工大学，
类型：发明
国别省市：