用于治疗自身免疫性疾病的多肽制造技术

本发明专利技术涉及疾病治疗领域。具体而言，本发明专利技术提供了用于治疗自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、1型糖尿病、类风湿性关节炎)的多肽或其变体，包含此类多肽或其变体的融合蛋白，以及此类多肽或其变体和融合蛋白的医药用途。本发明专利技术还涉及可用于治疗自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、1型糖尿病、类风湿性关节炎)或减轻自身免疫性疾病的一种或多种症状的药物组合物，其包含本发明专利技术的多肽或其变体或融合蛋白。蛋白。蛋白。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗自身免疫性疾病的多肽


[0001]本专利技术涉及疾病治疗领域。具体而言，本专利技术提供了用于治疗自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、1型糖尿病、类风湿性关节炎)的多肽或其变体，包含此类多肽或其变体的融合蛋白，以及此类多肽或其变体和融合蛋白的医药用途。本专利技术还涉及可用于治疗自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、1型糖尿病、类风湿性关节炎)或减轻自身免疫性疾病的一种或多种症状的药物组合物，其包含本专利技术的多肽或其变体或融合蛋白。

技术介绍

[0002]自身免疫性疾病是由免疫系统自我耐受性受损或丧失而引起器官和组织损伤的一系列疾病。包括如系统性红斑狼疮(SLE)、1型糖尿病、类风湿性关节炎(RA)等。自身免疫疾病的患者免疫功能异常活化，攻击机体正常组织和器官，可累及全身多个系统发生疾病。
[0003]系统性红斑狼疮,英文systemic lupus erythematosus，简称SLE。系统性红斑狼疮属于自身免疫类疾病,常发生于20
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40岁女性。本病病因至今尚未明确，大量研究显示遗传、内分泌、感染、免疫异常和一些环境因素与本病的发病可能有关。在遗传因素、环境因素、雌激素水平等各种因素相互作用下，患者T淋巴细胞减少、抑制性T细胞功能降低、B细胞过度增生，产生大量的自身抗体，并与体内相应的自身抗原结合形成相应的免疫复合物，沉积在皮肤、关节、小血管、肾小球等部位，引起急慢性炎症及组织坏死(如狼疮肾炎)，或抗体直接与组织细胞抗原作用，引起细胞破坏(如红细胞、淋巴细胞及血小板壁的特异性抗原与相应的自身抗体结合，分别引起溶血性贫血、淋巴细胞减少症和血小板减少症)，从而导致机体的多系统损害。
[0004]SLE的诊断主要依靠临床表现、实验室检查、组织病理学和影像学检查。1997年美国风湿病协会(ACR)修订的SLE分类标准中，明确将血液学异常、免疫学异常和自身抗体阳性等实验室检查列入了诊断标准。由于系统性红斑狼疮患者常存在血液系统异常和肾脏损伤等，血常规检查可有贫血、白细胞计数减少、血小板降低等症状；尿液分析可显示蛋白尿、血尿、细胞和颗粒管型。目前临床开展的系统性红斑狼疮相关自身抗体常规检测项目主要有抗核抗体(ANA)、抗双链脱氧核糖核酸抗体(抗dsDNA抗体)、抗可溶性抗原抗体(抗ENA抗体)(包括抗Sm、抗U1RNP、抗SSA/Ro、抗SSB/La、抗rRNP、抗Scl
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70和抗Jo
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1等)、抗核小体抗体和抗磷脂抗体等。ACR修订的SLE分类标准中，免疫学异常和自身抗体阳性包括：抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗磷脂抗体和ANA阳性。
[0005]1型糖尿病，英文type 1 diabetes mellitus，简称T1DM。T1DM是一种自身免疫性疾病，是由胰岛中的β细胞被免疫系统破坏引起的，T1DM可以在任何年龄发生，但通常最常见于青春期，并在青春期左右开始发作。研究表明遗传因素和环境因素在T1DM发病中都起作用，但尚不清楚T1DM的确切病因。目前T1MD的主要治疗方式依然是终身注射胰岛素控制血糖。
[0006]类风湿性关节炎，英文rheumatoid arthritis，简称RA。RA的特征为导致促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF)白细胞介素1(IL
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1)的过量产生的免疫系统的不平衡和抗炎细
胞因子例如IL
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10、IL
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11的缺乏。RA通过滑膜发炎表征，滑膜炎进展为软骨破坏、骨侵蚀和随后的关节变形。RA的原发症状为是关节发炎、肿胀、移动困难和疼。在RA的后期，发炎细胞产生的酶会消化骨骼和软骨。长期的损伤导致关节的慢性疼痛、机能丧失、变形和甚至寿命变短。尽管近几年抗TNF治疗在治疗RA中已取得了不错的进展，但其只能用于部分患者，至少三分之一的RA患者不产生反应。因此成功的治疗关节炎仍然是一个未得到解决的医学需要。
[0007]自身免疫性疾病具有很强的异质性，不论采用中医还是西医治疗绝大多数患者均不可能根治，只能通过药物缓解病情，长期服药会带来明显的毒副作用，给患者和家属带来巨大的经济和精神负担，因此开发新的治疗自身免疫性疾病方案和药物具有重要的社会和经济意义。

技术实现思路

[0008]热休克蛋白(Heat shock protein，HSP)是一类在生物进化中高度保守且广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。HSP根据同源程度及分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、小分子HSP及泛素等多个亚家族。人类热休克蛋白90家族(HSP90)包括HSP90α,HSP90β,gp96(grp94)和Trap
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1四个成员。gp96(GRP94)为内质网HSP90家族的代表，与细胞质HSP90高度同源，主要生物学功能有：分子伴侣，参与新合成蛋白的折叠与组装；与细胞内的其他肽类蛋白质尤其是变性蛋白的结合，参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程；参与蛋白质水解过程；结合抗原肽，加工提呈肿瘤抗原及维持细胞内环境稳定等作用；对细胞的生长、发育、分化及死亡具有一定的调节作用。
[0009]已有研究报道，全长gp96虽然可以活化调节性T细胞(Treg)，然而其还具有强大的活化效应CD4
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T、CD8
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T细胞、B细胞等功能，不能特异性单独靶向调节性T细胞，因此全长gp96在治疗自身免疫性疾病中有可能活化免疫系统，导致治疗效果不佳，甚至有可能加重自身免疫疾病。
[0010]本申请的专利技术人经过大量的研究后出人意料地发现，全长gp96的特定多肽片段具有特异性单独靶向调节性T细胞、且不靶向效应T细胞及B细胞的活性，从而特别适用于自身免疫性疾病的治疗，具有重要临床应用价值。
[0011]分离的多肽或其变体
[0012]在一个方面，本专利技术提供了一种分离的多肽或其变体，其中，所述多肽由gp96蛋白的至少136个连续氨基酸残基组成，且包含：gp96蛋白的第578
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713位氨基酸残基；
[0013]其中，所述变体与其所源自的多肽相异仅在于1个或几个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)氨基酸残基的置换、缺失或添加，且保留了其所源自的多肽的生物学功能。
[0014]在本文中，本专利技术的多肽或其变体的生物学功能包括但不限于，诱导调节性T细胞活化，不诱导或基本不诱导效应T细胞和B细胞活化，治疗自身免疫性疾病，降低抗双链DNA抗体的水平，降低尿蛋白的水平，和/或降低血糖。
[0015]本领域技术人员已知，在mRNA的翻译过程中，由于起始密码子的作用，所产生的多肽链第一位经常为起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸(M))。因此，本专利技术的多肽或其变体不仅囊括在其N末端不包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列，也囊括在其N末端包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列。
[0016]在某些实施方案中，所述gp96蛋白为人源。在某些实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽或其变体，其中，所述多肽由gp96蛋白的至少136个连续氨基酸残基组成，且包含：gp96蛋白的第578
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713位氨基酸残基；其中，所述变体与其所源自的多肽相异仅在于1个或几个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)氨基酸残基的置换、缺失或添加，且保留了其所源自的多肽的生物学功能(例如诱导调节性T细胞活化，不诱导效应T细胞和B细胞活化，预防和/或治疗自身免疫性疾病，降低抗双链DNA抗体的水平，降低尿蛋白的水平，和/或降低血糖)。2.权利要求1所述的分离的多肽或其变体，其中，所述分离的多肽包含：gp96蛋白的第578
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713位氨基酸残基、第578
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743位氨基酸残基、第578
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773位氨基酸残基、第578
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803位氨基酸残基、第550
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713位氨基酸残基、第550
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743位氨基酸残基、第550
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773位氨基酸残基或第550
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803位氨基酸残基。3.权利要求1或2所述的分离的多肽或其变体，其中，所述gp96蛋白具有如SEQ ID NO:7所示的序列。4.权利要求1
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3任一项所述的分离的多肽或其变体，其中，所述分离的多肽包含选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NOs:30、31、32、33、37、42、43、44。5.权利要求1
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4任一项所述分离的多肽或其变体，其中，所述变体与其所源自的多肽相异仅在于1个、2个或3个氨基酸残基的置换、缺失或添加；优选地，所述置换包括将所述氨基酸残基替换为丙氨酸(A)。6.权利要求1
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5任一项所述的分离的多肽或其变体，其中，所述变体包含选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NOs:55
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62。7.一种融合蛋白，其包含权利要求1
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6任一项所述的分离的多肽或其变体和另外的多肽；优选地，所述另外的多肽任选地通过接头连接至所述多肽或其变体的N端或C端；优选地，所述另外的多肽选自蛋白标签、靶向部分或其任意组合。8.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求1
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6任一项所述的分离的多肽或其变体，或权利要求7所述的融合蛋白的核苷酸序列；优选地，所述分离的核酸分子包含选自下列的核苷酸序列：(i)SEQ ID NOs:13
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16、20、25
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27、47
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54任一项所示的序列；(ii)与(i)所述序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％的序列同一性的序列；(iii)在严格条件下与(i)或(ii)中所述的序列杂交的序列；或(iv)(i)或(ii)中所述的序列的互补序列。9.一种载体，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子。10.一种宿主细胞，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子或权利要求9所述的载体。11.一种药物组合物，其包含权利要求1
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6任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘二龙，胡柳益，胡俊，
申请(专利权)人：佛山热休生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：