LGALS3的表位肽及所述表位肽与热休克蛋白的复合物制造技术

本发明专利技术涉及免疫学及肿瘤治疗领域。具体而言，本发明专利技术涉及蛋白LGALS3的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。本发明专利技术还涉及所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。

【技术实现步骤摘要】
LGALS3的表位肽及所述表位肽与热休克蛋白的复合物


[0001]本专利技术涉及免疫学及肿瘤治疗领域。具体而言，本专利技术涉及蛋白LGALS3的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。本专利技术还涉及所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。

技术介绍

[0002]肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，其中原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一。在世界范围内男性癌症患者中，肝癌比例排第六，死亡率排在第二；在女性癌症患者中，肝癌比例排第七，死亡率排第六。2008年，全世界共有748,300个新增肝癌病例，有695,900例肝癌患者死亡。而这些新增肝癌病例和死亡病例中有一半在中国。肝癌发生率最高的区域主要在东亚，东南亚，中非和西非国家。亚洲部分地区和非洲撒哈拉以南地区之所以肝癌发生率较高，可能是因为这些地区HBV盛行，这些地区8％的居民慢性感染HBV，在发展中国家60％的肝癌患者感染过HBV。
[0003]胰腺癌是恶性程度极高的消化道肿瘤之一，其在全球的发病率和死亡率均在逐年升高。目前临床上治疗胰腺癌的方式主要包括手术切除、放化疗。由于胰腺癌发病隐匿、病情进展快、恶性程度高等特点，患者一经发现多处于癌症的中晚期，丧失手术机会，导致患者5年生存率不足6％。
[0004]半乳糖凝集素3(Galectin
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3,LGASL3)属凝集素家族，该家族成员对半乳糖呈较强亲和力。该蛋白N端具有富脯氨酸串联重复结构域和一个C端碳水化合物识别结构域。该蛋白可以通过N端结构域自结合，从而与多价糖配体结合。这种蛋白质定位于细胞外基质、细胞质和细胞核。该蛋白在许多细胞功能中发挥作用，包括凋亡，先天免疫，细胞粘附和T细胞调控。同时，越来越多的研究表明LGALS3在肿瘤的发生及发展中起到关键作用，并促进肿瘤转移。在肝癌、脑胶质瘤和胰腺癌等高发癌症中，LGALS3蛋白的表达均显著提升，同时LGALS3的表达水平也与癌症患者的生存率直接相关。
[0005]热休克蛋白(Heat Shock Protein，HSP)是一类在生物进化中高度保守且广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。HSP根据同源程度和分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、小分子HSP和泛素等多个亚家族。热休克蛋白(Heat shock protein，HSP)gp96属于HSP90亚家族的成员，该蛋白是细胞内质网上含量最丰富的热休克蛋白。热休克蛋白gp96蛋白具有多肽结合特性，在内质网内其能接受来自TAP复合体的多肽片段，协助将其组装至MHC I类分子，递呈于细胞膜上。不同组织来源的热休克蛋白gp96能携带有其来源组织内特异性表达的多肽片段。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了蛋白LGALS3的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞。本专利技术还进一步提供了所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细
胞。
[0007]因此，在一个方面，本专利技术提供了一种分离的多肽，所述分离的多肽具有如SEQ ID NO：1或2所示的氨基酸序列。
[0008]在另一个方面，本专利技术提供了一种多肽组合物，所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：SEQ ID NO：1、2和3任一项所示的多肽。
[0009]在某些实施方案中，所述多肽组合物含有的多肽的比例相同或不同。
[0010]在某些实施方案中，所述多肽组合物包含SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽。
[0011]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1至20:1:1，或1:1:1至1:20:1，或1:1:1至1:1:20。
[0012]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1至5:1:1，或1:1:1至1:5:1，或1:1:1至1:1:5。
[0013]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1,或5:1:1，或1:5:1，或1:1:5。
[0014]在某些实施方案中，所述多肽组合物含有的SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的比例为1:1:1。
[0015]在另一个方面，本专利技术提供了一种复合物，其由如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白形成。
[0016]在某些实施方案中，所述复合物是由如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成。
[0017]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物和热休克蛋白在体外混合而制备的。在某些实施方案中，所述混合在40
‑
80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行。在某些实施方案中，所述混合在55℃下进行。
[0018]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min而制备的。
[0019]在某些实施方案中，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白。
[0020]在某些实施方案中，所述热休克蛋白是gp96。在某些实施方案中，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。
[0021]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白按照下述质量比例在体外混合而制备：0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至10:1，1:1至5:1)，优选1:1、10:1或100:1。
[0022]在某些实施方案中，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达LGALS3的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或肝癌细胞)的特异性免疫应答。
[0023]在另一个方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包含至少2种(例如，2种，3
种，4种，5种，或更多种)如前所述的复合物。
[0024]在某些实施方案中，所述组合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有如SEQ ID NO：1或2所示的氨基酸序列。2.一种多肽组合物，所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：SEQ ID NO：1、2和3任一项所示的多肽；优选地，所述多肽组合物含有的多肽的比例相同或不同；优选地，所述多肽组合物包含SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽。3.一种复合物，其由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白形成；优选地，所述复合物是由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白在体外混合而制备的；优选地，所述混合在40
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80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min而制备的；优选地，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例在体外混合而制备；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达LGALS3的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或肝癌细胞)的特异性免疫应答。4.一种组合物，所述组合物包含至少2种(例如，2种，3种，4种，5种，或更多种)权利要求3所述的复合物；优选地，所述组合物中的热休克蛋白相同或不同；优选地，所述组合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达LGALS3的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或肝癌细胞)的特异性免疫应答。5.一种制备权利要求3所述的复合物的方法，其包括将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白混合；优选地，权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成复合物；优选地，所述混合在40
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80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min；
优选地，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例混合；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对...

【专利技术属性】
技术研发人员：张含，鞠莹，王力，杨博，陈立钊，
申请(专利权)人：佛山热休生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：