【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疾病治疗领域。具体而言，本专利技术提供了gp96蛋白和由gp96蛋白构建的融合蛋白用于治疗肌萎缩侧索硬化的用途。此外，本专利技术还涉及可用于治疗肌萎缩侧索硬化的一种或多种症状的药物组合物，其包含本专利技术的gp96蛋白或由其构建的融合蛋白。
技术介绍
1、肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,als)，俗称“渐冻症”，该病是由于运动神经细胞进行性退化，主要影响皮层、脑干和脊髓中的运动神经元，导致四肢、躯干、胸部腹部的肌肉逐渐无力和萎缩，以及言语、吞咽和呼吸功能减退，直至呼吸衰竭死亡。肌萎缩侧索硬化的病因至今不明。20％的病例可能与遗传及基因缺陷有关。另外有部分环境因素，如重金属中毒等，都可能造成运动神经元损害，但是具体致病机制尚不清楚。肌萎缩侧索硬化症发病率很低，但是对病人的生活质量及生命构成很大威胁。目前治疗肌萎缩侧索硬化症的药物有依达拉奉edaravone(商品名radicava)和利鲁唑(riluzole)。据als协会称，每年约有5000人被确诊，平均预期寿命为两到五年，所以患者迫切需要变革性的治疗选择。
2、有研究显示特定遗传背景、活性氧和氧化应激、神经炎症和自身免疫反应、treg功能失调和水平降低、运动神经细胞线粒体的功能异常、运动神经细胞代谢与功能失调、蛋白变性等介导的运动神经损伤和轴突病变可能是als进展和神经退行性疾病过程中的关键驱动因素。
技术实现思路
1、热休克蛋白(heat shock prot
2、本申请的专利技术人经过大量的研究后发现，gp96蛋白可有效用于肌萎缩侧索硬化的治疗，在治疗系肌萎缩侧索硬化或缓解肌萎缩侧索硬化的症状方面具有重要的应用价值。
3、此外，本申请专利技术人通过研究获得了由gp96蛋白构建的融合蛋白，其相对于gp96蛋白，具有提高的针对肌萎缩侧索硬化的治疗活性。
4、治疗用途
5、因此，在一方面，本申请提供了gp96蛋白或其变体或融合蛋白在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化；
6、其中，所述变体与所述gp96蛋白相比，具有至少90％，例如至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的序列同一性；或者，具有一个或几个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个)氨基酸的置换(优选保守置换)、添加或缺失，且保留了所述gp96蛋白的功能；
7、所述融合蛋白包含所述gp96蛋白或其变体，以及，与所述gp96蛋白或其变体连接的另外的肽。
8、在某些实施方案中，所述另外的肽任选地通过接头(例如，肽接头)连接于所述gp96蛋白或其变体的n端和/或c端。
9、在某些实施方案中，所述另外的肽连接于所述gp96蛋白或其变体的n端。
10、在某些实施方案中，所述另外的肽为柔性肽。
11、在某些实施方案中，所述另外的肽包含一个或多个甘氨酸(g)。
12、在某些实施方案中，所述另外的肽具有如(ggggs)n1c(ggggs)n2所示的结构，其中，所述n1和n2各自独立地选自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。在某些实施方案中，所述n1和n2不同时为0。
13、在某些实施方案中，所述另外的肽具有如seq id no:6所示的氨基酸序列。
14、本领域技术人员已知，在mrna的翻译过程中，由于起始密码子的作用，所产生的多肽链第一位经常为起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸(m))。因此，本专利技术的gp96蛋白或其变体或融合蛋白不仅囊括在其n末端不包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列，也囊括在其n末端包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列。
15、在某些实施方案中，所述gp96蛋白包含如seq id no:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述gp96蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。
16、在某些实施方案中，所述gp96蛋白通过基因工程方法(重组技术)产生。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自天然生物样品。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自动物离体胎盘组织。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自人离体胎盘组织。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自小鼠离体胎盘组织。
17、在某些实施方案中，所述融合蛋白包含如seq id no:4所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述融合蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。
18、在某些实施方案中，所述gp96蛋白或其变体或融合蛋白还可包含另外的蛋白标签、靶向部分或其任意组合。
19、在本文中，蛋白标签是本领域熟知的，其实例包括但不限于his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp或生物素，并且本领域技术人员已知如何根据期望目的(例如，纯化、检测或示踪)选择合适的蛋白标签。
20、在本文中，术语“靶向部分”是指，能够将本专利技术的gp96蛋白或其变体或融合蛋白引导至所期望的位置的结构域，所述期望的位置可以为特定的组织、特定的细胞、甚至特定的细胞内位置(例如细胞核、核糖体、内质网、溶酶体或过氧化物酶体)。本领域技术人员已知如何通过期望位置的特性设计相应的靶向结构域。在某些实施方案中，所述靶向部分包括配体、受体或抗体或其结合结构域。
21、在某些实施方案中，所述药物用于以下的一项或多项：
22、(1)诱导调节性t细胞的产生；
23、(2)抑制th17细胞的产生；
24、(3)诱导th2细胞的数量；
25、(4)抑制th1细胞的产生；
26、(5)降低运动神经细胞活性氧和氧化应激；
27、(6)降低sod1的表达；
28、(7)恢复运动神经细胞线粒体的功能异常；
29、(8)减少细胞中变性的蛋白；
30、(9)降低肌酸激酶含量和/或抑制肌酸激酶活性，上调肌酸水平；
31、(10)促进神经生长因子的产生；
32、(11)促进病变的运动神经轴突的生长；
33、(12)提高轴突运输能力。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.gp96蛋白或其变体或融合蛋白在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化；
2.权利要求1的用途，其中，所述另外的肽任选地通过接头(例如，肽接头)连接于所述gp96蛋白或其变体的N端和/或C端；
3.权利要求1或2的用途，其中，所述另外的肽为柔性肽；
4.权利要求1-3任一项的用途，其中，所述gp96蛋白包含如SEQ ID NO:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成；
5.权利要求1-4任一项的用途，其中，所述药物用于以下的一项或多项：
6.融合蛋白，其包含gp96蛋白或其变体，以及，与所述gp96蛋白或其变体连接的另外的肽；
7.权利要求6的融合蛋白，其中，所述gp96蛋白包含如SEQ ID NO:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成；
8.分离的核酸分子，其编码权利要求6或7所述的融合蛋白。
9.载体，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。
10.宿主细胞，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子或权利要求9
11.制备权利要求6或7所述的融合蛋白的方法，其包括，在允许蛋白表达的条件下，培养权利要求10所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述融合蛋白。
12.药物组合物，其包含权利要求6或7所述的融合蛋白、权利要求8所述的分离的核酸分子、权利要求9所述的载体或权利要求10所述的宿主细胞，以及，药学上可接受的载体和/或赋形剂；
13.权利要求6或7所述的融合蛋白，权利要求8所述的分离的核酸分子，权利要求9所述的载体，权利要求10所述的宿主细胞或权利要求12所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化；
...【技术特征摘要】
1.gp96蛋白或其变体或融合蛋白在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化；
2.权利要求1的用途，其中，所述另外的肽任选地通过接头(例如，肽接头)连接于所述gp96蛋白或其变体的n端和/或c端；
3.权利要求1或2的用途，其中，所述另外的肽为柔性肽；
4.权利要求1-3任一项的用途，其中，所述gp96蛋白包含如seq id no:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成；
5.权利要求1-4任一项的用途，其中，所述药物用于以下的一项或多项：
6.融合蛋白，其包含gp96蛋白或其变体，以及，与所述gp96蛋白或其变体连接的另外的肽；
7.权利要求6的融合蛋白，其中，所述gp96蛋白包含如seq id no:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成；
8.分离的核酸分子，其编码权利要求6或...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟颂东，鞠莹，李鑫，徐玉秀，程放，王子豪，
申请(专利权)人：佛山热休生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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