GPNMB的表位肽及所述表位肽与热休克蛋白的复合物制造技术

本发明专利技术涉及免疫学及肿瘤治疗领域。具体而言，本发明专利技术涉及蛋白GPNMB的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。本发明专利技术还涉及所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。

【技术实现步骤摘要】
GPNMB的表位肽及所述表位肽与热休克蛋白的复合物


[0001]本专利技术涉及免疫学及肿瘤治疗领域。具体而言，本专利技术涉及蛋白GPNMB的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。本专利技术还涉及所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。

技术介绍

[0002]脑胶质瘤是女性最常见的恶性肿瘤之一。据资料统计，脑胶质瘤发病率占全身各种恶性肿瘤的7
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10％，在很多地区已经超过子宫癌，成为严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的肿瘤之一。脑胶质瘤的发病与患者的遗传基因、生活习惯、常用食物、生育状况等紧密相关，不同人种、地域的脑胶质瘤发病率有着明显的区别。脑胶质瘤的高发地区主要集中在北美、北欧和大洋洲，尤其白种女性居多。脑胶质瘤的中发地区集中在南美、南欧和以色列。亚洲则是脑胶质瘤的低发地区。举例来说，美国白种女性一生脑胶质瘤发病率为13.1％，即平均每8
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9人就有1人可能会患上脑胶质瘤，而亚洲女性的脑胶质瘤发病率为4
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7％。WHO统计，全球每年新发脑胶质瘤达130万人左右，死亡50万人左右。在我国北京、上海、天津等大城市的脑胶质瘤发病已跃居女性各种癌瘤首位，而且有明显上升的趋势。
[0003]胰腺癌是恶性程度极高的消化道肿瘤之一，其在全球的发病率和死亡率均在逐年升高。目前临床上治疗胰腺癌的方式主要包括手术切除、放化疗，但是由于胰腺癌发病隐匿、病情进展快、恶性程度高等特点，患者一经发现多处于癌症的中晚期，丧失手术机会，导致患者5年生存率不足6％。为延长患者生存时间，积极探索有效的治疗方法是目前胰腺癌治疗领域亟待解决的问题。
[0004]基膜聚糖蛋白(GPNMBican,GPNMB)是一种富含亮氨酸的II类小型蛋白聚糖(small leucine
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rich proteoglycans，SLRPs)，其作为构成肿瘤微环境的重要组分，对肿瘤微环境中调控癌细胞增殖有重要作用。研究表明GPNMBican是乳腺肿瘤中特异性定位于间质内成纤维细胞样细胞中最丰富的SLRPs，与相邻正常间质相比，其在肿瘤中的表达显著增加。利用对乳腺浸润性导管癌的高通量蛋白质组学分析显示，与正常乳腺组织相比，脑胶质瘤样本中GPNMBican的明显增加，此外，GPNMBican在胰腺癌中也呈高表达模式，GPNMB的表达水平与癌症患者的生存率直接相关。
[0005]热休克蛋白(Heat shock protein，HSP)是一类在生物进化中高度保守且广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。HSP根据同源程度和分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、小分子HSP和泛素等多个亚家族。热休克蛋白(Heat shock protein，HSP)gp96属于HSP90亚家族的成员，该蛋白是细胞内质网上含量最丰富的热休克蛋白。热休克蛋白gp96蛋白具有多肽结合特性，在内质网内其能接受来自TAP复合体的多肽片段，协助将其组装至MHC I类分子，递呈于细胞膜上。不同组织来源的热休克蛋白gp96能携带有其来源组织内特异性表达的多肽片段。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了蛋白GPNMB的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞。本专利技术还进一步提供了所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞。
[0007]因此，在一个方面，本专利技术提供了一种分离的多肽，所述分离的多肽具有如SEQ ID NO：1或3所示的氨基酸序列。
[0008]在另一个方面，本专利技术提供了一种多肽组合物，所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：SEQ ID NO：1、2和3任一项所示的多肽。
[0009]在某些实施方案中，所述多肽组合物含有的多肽的比例相同或不同。
[0010]在某些实施方案中，所述多肽组合物包含SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽。
[0011]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1至20:1:1，或1:1:1至1:20:1，或1:1:1至1:1:20。
[0012]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1至5:1:1，或1:1:1至1:5:1，或1:1:1至1:1:5。
[0013]在某些实施方案中，所述多肽组合物中SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的质量比例为1:1:1,或5:1:1，或1:5:1，或1:1:5。
[0014]在某些实施方案中，所述多肽组合物含有的SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽的比例为1:1:1。
[0015]在另一个方面，本专利技术提供了一种复合物，其由如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白形成。
[0016]在某些实施方案中，所述复合物是由如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成。
[0017]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物和热休克蛋白在体外混合而制备的。在某些实施方案中，所述混合在40
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80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行。在某些实施方案中，所述混合在55℃下进行。
[0018]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min而制备的。
[0019]在某些实施方案中，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白。
[0020]在某些实施方案中，所述热休克蛋白是gp96。在某些实施方案中，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。
[0021]在某些实施方案中，所述复合物是通过将如前所述分离的多肽或者如前所述的多肽组合物与热休克蛋白按照下述质量比例在体外混合而制备：0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至10:1，1:1至5:1)，优选1:1、10:1或100:1。
[0022]在某本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有如SEQ ID NO：1或3任一项所示的氨基酸序列。2.一种多肽组合物，所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：SEQ ID NO：1、2和3任一项所示的多肽；优选地，所述多肽组合物含有的多肽的比例相同或不同；优选地，所述多肽组合物包含SEQ ID NO：1所示的多肽、SEQ ID NO：2所示的多肽和SEQ ID NO：3所示的多肽。3.一种复合物，其由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白形成；优选地，所述复合物是由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白在体外混合而制备的；优选地，所述混合在40
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80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min而制备的；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例在体外混合而制备；优选地，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达GPNMB的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或胶质瘤细胞(例如脑胶质瘤细胞))的特异性免疫应答。4.一种组合物，所述组合物包含至少2种(例如，2种，3种，4种，5种，或更多种)权利要求3所述的复合物；优选地，所述组合物中的热休克蛋白相同或不同；优选地，所述组合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达GPNMB的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或胶质瘤细胞(例如脑胶质瘤))的特异性免疫应答。5.一种制备权利要求3所述的复合物的方法，其包括将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白混合；优选地，权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成复合物；优选地，所述混合在40
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80℃(例如40
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70℃，40
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60℃，或50
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60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合
物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min；优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例混合；优选地，所述热休克蛋白选自HSP70、HSP90、gp96、HSP110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱...

【专利技术属性】
技术研发人员：张含，鞠莹，王力，杨博，陈立钊，
申请(专利权)人：佛山热休生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：