多特异性蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及包含经设计的锚蛋白重复结构域的多特异性蛋白质，该锚蛋白重复结构域具有针对不同靶标诸如CD40和FAR的结合特异性。此外，本发明专利技术涉及编码此类多特异性蛋白质的核酸、包含此类多特异性蛋白质或核酸的药物组合物，以及此类结合蛋白、核酸或药物组合物在用于治疗或诊断包括人在内的哺乳动物的疾病诸如癌症的方法中的用途。如癌症的方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性蛋白质
[0001]相关专利申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年5月14日向欧洲专利局提交的欧洲专利申请EP20174847和2020年6月22日向欧洲专利局提交的欧洲专利申请EP20181498的权益和优先权。欧洲专利申请EP20174847和EP20181498的内容全文以引用方式并入本文，包括所有表格、图和权利要求。


[0003]本专利技术涉及包含经设计的锚蛋白重复结构域的多特异性蛋白质，所述锚蛋白重复结构域具有针对不同靶标诸如CD40和FAP的结合特异性。此外，本专利技术涉及编码此类多特异性蛋白质的核酸、包含此类多特异性蛋白质或核酸的药物组合物，以及此类结合蛋白、核酸或药物组合物在用于治疗或诊断包括人在内的哺乳动物的疾病诸如癌症的方法中的用途。

技术介绍

[0004]肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员CD40是关键的共刺激受体，当与其配体(CD40L)或激动性抗体接合时，它参与广泛的分子和细胞过程的调节，包括细胞和体液适应性免疫的起始和进展。例如，已经证明CD40在树突状细胞表面上的接合促进它们的细胞因子产生、诱导共刺激分子在它们的表面上的表达并且促进抗原的呈递。总体而言，CD40信号传导的影响“许可”树突状细胞成熟并实现所有必要特征，以有效地触发T细胞活化和分化。B细胞中的CD40信号传导促进生发中心形成、免疫球蛋白(Ig)同种型转换、Ig的体细胞超突变以增强对抗原的亲和力以及最后长寿浆细胞和记忆B细胞的形成。此外，已经表明，CD40途径对于许多细胞类型(包括生发中心B细胞、树突状细胞和内皮细胞)在正常和炎性条件下的存活是很重要的。已经在各种自身免疫疾病中观察到CD40信号传导的失调。总之，这种广泛的功能强调了CD40受体对于生成获得性免疫反应的重要性。
[0005]CD40最初在B细胞上表征，也在树突状细胞、单核细胞、血小板和巨噬细胞以及非造血细胞(诸如肌成纤维细胞、成纤维细胞、上皮细胞和内皮细胞)上表达。CD40的配体(称为CD154或CD40L)主要由活化的T细胞以及活化的B细胞和血小板表达，并且在炎性条件下，它也在单核细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞中诱导。
[0006]因为CD40可以激活先天性和适应性免疫系统，所以它已被公认为肿瘤免疫疗法的合适靶标。一些报道已经证实，CD40刺激可以借助于树突状细胞成熟来增强抗肿瘤免疫反应。用CD40的激动剂活化树突状细胞使得它们的存活增加，IL
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1、IL
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6、IL
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8、IL
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12、TNF
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α和巨噬细胞炎性蛋白
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1α分泌。另外，CD40活化诱导共刺激分子(诸如MHC II类、LFA
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3、CD80和CD86)的上调，并且分别促进T辅助细胞(Th)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗原呈递、致敏和交叉致敏。已经证明抗CD40的激动性抗体在临床前鼠肿瘤模型中是有效的。然而，尽管它们在临床中的使用已经显示出一些抗肿瘤功效，但激动性抗CD40抗体的临床开发可能受到剂量限制性毒性和由此产生的低功效的阻碍。
[0007]因此，仍然需要新的CD40特异性结合蛋白，以及用于治疗和表征受益于CD40特异性结合和活化的疾病(包括癌症)的治疗和诊断方法。具体地，需要可有效地接合CD40同时
避免不期望的副作用的新一代激动剂。

技术实现思路

[0008]基于本文提供的公开内容，本领域技术人员将认识到或仅能够使用常规实验来确定本文所述的本专利技术的具体实施方案的许多等同物。此类等同物旨在由以下实施方案(E)涵盖。
[0009]E1.一种重组蛋白质，该重组蛋白质包含特异性结合成纤维细胞活化蛋白(FAP)的第一锚蛋白重复结构域和特异性结合CD40的第二锚蛋白重复结构域。
[0010]E2.根据E1所述的重组蛋白质，该重组蛋白质还包含特异性结合CD40的第三锚蛋白重复结构域。
[0011]E3.根据E2所述的重组蛋白质，其中所述锚蛋白重复结构域根据下式从N末端到C末端排列：(FAP结合结构域)
–
(CD40结合结构域)
–
(CD40结合结构域)。
[0012]E4根据E1至E3中任一项所述的重组蛋白质，该重组蛋白质还包含半衰期延长部分。
[0013]E5.根据E4所述的重组蛋白质，其中所述半衰期延长部分包含特异性结合血清白蛋白的第四锚蛋白重复结构域。
[0014]E6.根据E5所述的重组蛋白质，其中所述锚蛋白重复结构域根据下式从N末端到C末端排列：(血清白蛋白结合结构域)
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(FAP结合结构域)
–
(CD40结合结构域)
–
(CD40结合结构域)。
[0015]E7.根据E1至E6中任一项所述的重组蛋白质，该重组蛋白质还包含介于任何所述FAP结合结构域、所述CD40结合结构域和所述半衰期延长部分之间的接头。
[0016]E8.根据E1至E7中任一项所述的重组蛋白质，该重组蛋白质从N末端到C末端包含下式：(FAP结合结构域)
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(接头)
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(CD40结合结构域)
–
(接头)
–
(CD40结合结构域)。
[0017]E9.根据E1至E8中任一项所述的重组蛋白质，该重组蛋白质从N末端到C末端包含下式：(血清白蛋白结合结构域)
–
(接头)
–
(FAP结合结构域)
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(接头)
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(CD40结合结构域)
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(接头)
–
(CD40结合结构域)。
[0018]E10.根据E4所述的重组蛋白质，其中所述半衰期延长部分包含免疫球蛋白重链恒定结构域。
[0019]E11.根据E10所述的重组蛋白质，其中所述免疫球蛋白结构域是IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgM、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的Fc结构域。
[0020]E12.根据E11所述的重组蛋白质，其中所述Fc结构域是人IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。
[0021]E13.根据E12所述的重组蛋白质，其中所述Fc结构域被修饰以降低效应子功能。
[0022]E14.根据E1至E13中任一项所述的重组蛋白质，其中所述FAP是人FAP。
[0023]E15.根据E1至E14中任一项所述的重组蛋白质，其中所述CD40是人CD40。
[0024]E16.根据E5至E19中任一项所述的重组蛋白质，其中所述血清白蛋白是人血清白蛋白(HSA)。
[0025]E17.根据E10至E13中任一项所述的重组蛋白质，其中所述免疫球蛋白重链恒定结构域是人免疫球蛋白重链恒定结构域。
[0026]E18.根据E1至E17中任一项所述的重组蛋白质，其中所述重组蛋白质与FAP的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组蛋白质，所述重组蛋白质包含：特异性结合血清白蛋白的第一锚蛋白重复结构域、特异性结合成纤维细胞活化蛋白质(FAP)的第二锚蛋白重复结构域、特异性结合CD40的第三锚蛋白重复结构域和特异性结合CD40的第四锚蛋白重复结构域，其中所述锚蛋白重复结构域根据下式从N末端到C末端排列：(血清白蛋白结合结构域)
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(FAP结合结构域)
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(CD40结合结构域)
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(CD40结合结构域)。2.根据权利要求1所述的重组蛋白质，其中所述FAP结合结构域包含与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的氨基酸序列，优选地其中所述FAP结合结构域包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的重组蛋白质，其中所述CD40结合结构域中的每一者独立地包含与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的氨基酸序列，优选地其中所述CD40结合结构域中的每一者包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组蛋白质，其中所述CD40结合结构域中的每一者独立地包含位置8处的Q、位置15处的L、位置143处的R和位置147处的Q，其中位置编号对应于SEQ ID NO:3中的位置。5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组蛋白质，其中所述血清白蛋白结合结构域包含与SEQ ID NO:1具有至少90％同一性的氨基酸序列，优选地其中所述血清白蛋白结合结构域包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组蛋白质，所述重组蛋白质从N末端到C末端包含下式：(血清白蛋白结合结构域)
–
(接头)
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(FAP结合结构域)
–
(接头)
–
(CD40结合结构域)
–
(接头)
–
(CD40结合结构域)，其中所述接头包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。7....

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：分子合作伙伴股份公司，
类型：发明
国别省市：