一种长效重组白细胞介素-18结合蛋白及其生产方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种长效重组白细胞介素

【技术实现步骤摘要】
一种长效重组白细胞介素
‑
18结合蛋白及其生产方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种长效重组白细胞介素
‑
18结合蛋白及其生产方法与应用。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
18(interleukin
‑
18,IL
‑
18)是一种由活化的单核细胞和树突状细胞产生的细胞因子，具有多种生物学功能。IL
‑
18与IL
‑
12协同作用可诱导自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)和Th1细胞产生干扰素γ(interferon gamma,IFN
‑
γ)。IL
‑
18可以增强Fas介导的Th1细胞和NK细胞的细胞毒性作用，从而发挥抗感染和抗肿瘤活性。除了介导Th1反应外，IL
‑
18还是一种巨噬细胞激活剂，可触发各种促炎细胞因子的产生，包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor
‑
α,TNF
‑
α)、IL
‑
1、趋化因子IL
‑
8和巨噬细胞炎症蛋白(macrophage
‑
inflammatory protein,MIP)
‑
1。有很多研究已经报道，IL
‑
18在一些炎症性疾病和自身免疫性疾病中表达显著增高，是疾病潜在的诊断标志物。
[0003]白细胞介素
‑
18结合蛋白(interleukin
‑
18binding protein,IL
‑
18BP)是一种组成型分泌蛋白，是天然的IL
‑
18拮抗剂，可以结合IL
‑
18并中和其活性，从而下调Th1细胞因子反应，减少IFN
‑
γ的产生，阻断IL
‑
18的生物学活性。然而，IL
‑
18BP没有完整的跨膜结构，仅有一个免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结构域。在人IL
‑
18BP的四种亚型中，IL
‑
18BPa和c具有完整的Ig结构域，因此能够结合IL
‑
18。其中IL
‑
18BPa是结合能力最高的亚型。
[0004]截止目前，重组IL
‑
18BP或IL
‑
18BP融合蛋白的制备都是采用真核细胞，如猴COS7细胞、中华仓鼠CHO细胞(Raffaella Faggioni,2001)、SF9昆虫细胞，罕有采用原核细胞表达。因为IL
‑
18BP作为一个真核分泌型蛋白，在原核系统中表达容易形成无活性包涵体结构，包涵体后期需要变性、复性，这些操作对重组蛋白的活性都产生一定程度的损害，由于复性效率的问题，还会影响后期的蛋白纯度，进而影响用药的安全性。因此，既要保证重组蛋白的生物学活性，又要满足今后规模化生产成本的考虑。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种长效重组白细胞介素
‑
18结合蛋白及其生产方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过采用原核表达系统表达重组白细胞介素
‑
18结合蛋白，增加了重组蛋白产量，生成成本也大大降低。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种重组白细胞介素
‑
18结合蛋白，所述重组白细胞介素
‑
18结合蛋白包含编码人IL
‑
18BP亚型a的序列和编码人IgG Fc的序列，所述重组白细胞介素
‑
18结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：
[0008]TPVSQTTTAATASVRSTKDPCPSQPPVFPAAKQCPALEVTWPEVEVPLNGTLSLSCVACSRFPNFSILYWLGNGSFIEHLPGRLWEGSTSRERGSTGTQLCKALVLEQLTPALHSTNFSCVLVDPEQVVQRHVVLAQLWAGLRATLPPTQEALPSSHSSPQQQGGGGGSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT
PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。
[0009]优选的是，还包括修饰蛋白Sumo，所述修饰蛋白Sumo的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示：
[0010]MHHHHHHGMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG。
[0011]进一步地，所述修饰蛋白Sumo的编码基因如SEQ ID NO：4所示：
[0012]ATGCATCATCATCATCATCACGGCATGTCGGACTCAGAAGTCAATCAAGAAGCTAAGCCAGAGGTCAAGCCAGAAGTCAAGCCTGAGACTCACATCAATTTAAAGGTGTCCGATGGATCTTCAGAGATCTTCTTCAAGATCAAAAAGACCACTCCTTTAAGAAGGCTGATGGAAGCGTTCGCTAAAAGACAGGGTAAGGAAATGGACTCCTTAAGATTCTTGTACGACGGTATTAGAATTCAAGCTGATCAGACCCCTGAAGATTTGGACATGGAGGATAACGATATCATTGAGGCTCACAGAGAACAGATTGGTGGT。
[0013]本专利技术还包括一种重组质粒，包括表达所述的重组白细胞介素
‑
18结合蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示：
[0014]ACACCTGTCTCGCAGACCACCACAGCTGCCACTGCCTCAGTTAGAAGCACAAAGGACCCCTGCCCCTCCCAGCCCCCAGTGTTCCCAGCAGCTAAGCAGTGTCCAGCATTGGAAGTGACCTGGCCAGAGGTGGAAGTGCCACTGAATGGAACGCTGAGCTTATCCTGTGTGGCCTGCAGCCGCTTCCCCAACTTCAGCATCCTCTACTGGCTGGGCAATGGTTCCTTCATTGAGCACCTCCCAGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组白细胞介素
‑
18结合蛋白，其特征在于，所述重组白细胞介素
‑
18结合蛋白包含编码人IL
‑
18BP亚型a的序列和编码人IgG Fc的序列，所述重组白细胞介素
‑
18结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的重组白细胞介素
‑
18结合蛋白，其特征在于，还包括修饰蛋白Sumo，所述修饰蛋白Sumo的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.一种重组质粒，其特征在于，包括表达权利要求1所述的重组白细胞介素
‑
18结合蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。4.一种宿主菌，其特征在于，包括权利要求3所述的重组质粒。5.制备权利要求1所述的重组白细胞介素
‑
18结合蛋白的方法，其特征在于，将表达权利要求1所述的重组白细胞介素
...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖业臣，张纪周，郭磊，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：