一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法。本发明专利技术的病毒样颗粒含有猪轮状病毒的VP6蛋白和VP2蛋白，且所述VP6蛋白的loop区连接有猪流行性腹泻病毒的RBD。本发明专利技术所提供的二联病毒样颗粒及疫苗对猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒均具有很好的免疫原性，能诱导机体产生强效免疫应答，并形成较强的免疫保护。其不仅有利于在相关疾病的防控中节省劳力，提高工作效率，而且还解决了之前弱毒疫苗和灭活疫苗所具有的制备工艺复杂、有效性不佳、容易散毒等问题。问题。

【技术实现步骤摘要】
一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]目前市场上用于预防、控制猪流行性腹泻的疫苗基本都是传统猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)灭活疫苗和弱毒疫苗。但单价或多联灭活疫苗不能刺激动物机体产生足够量的sIgA抗体，保护效果不佳，且制苗成本也比较昂贵。同时，灭活疫苗在猪体内产生免疫力时间长达二周，需要提前接种，以保证预防效果。弱毒疫苗虽然可引起黏膜免疫，但由于存在着成本高、易返祖、有潜在毒力增强风险等缺陷，限制了其在生产中的应用。

技术实现思路

[0003]本专利技术利用猪轮状病毒(porcinerotavims，PRV)的病毒样颗粒(virus
‑
like particle，VLP)作为核心VLP骨架，挑选出骨架表面不影响VLP结构的区域进行改造，并利用基因工程的手段将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)的受体结合结构域通过蛋白质超级胶水的技术偶联到VLP表面待改造区，研制抗PEDV和PRV的二价VLP疫苗，能诱导机体产生强效的免疫应答，刺激机体产生足够量的抗猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的保护性抗体。
[0004]具体而言，本专利技术首先提供了一种病毒样颗粒，其含有猪轮状病毒的VP6蛋白，且所述VP6蛋白的loop区连接有猪流行性腹泻病毒的RBD。
[0005]作为优选，所述VP6蛋白的loop区为loop1、loop3或loop4；
[0006]其中，所述loop1为VP6蛋白的第169
‑
176位，所述loop3为VP6蛋白的第240
‑
245位，所述loop4为VP6蛋白的第296
‑
301位。
[0007]更优选为loop4时，VP6蛋白嵌合spytag后的表达量和可溶性更佳。
[0008]作为优选，所述VP6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0009]作为本专利技术的一个实施方式，所述loop1的氨基酸序列为SQPAHDNL，所述loop3的氨基酸序列为SAGGTT，所述loop4的氨基酸序列为RPPNMT。
[0010]作为本专利技术的一个实施方式，所述猪流行性腹泻病毒的RBD的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0011]作为本专利技术的一个实施方式，所述的病毒样颗粒还含有猪轮状病毒的VP2蛋白。
[0012]作为本专利技术的一个实施方式，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
[0013]作为本专利技术的一个实施方式，所述的病毒样颗粒含有VP6
‑
spytag蛋白、VP2蛋白和spycatcher
‑
RBD蛋白。
[0014]其中，所述VP6
‑
spytag蛋白通过在猪轮状病毒的VP6蛋白的loop区嵌合spytag而得到，所述spycatcher
‑
RBD蛋白通过将所述猪流行性腹泻病毒的RBD连接至spycatcher上
而得到。
[0015]在本专利技术的一种优选实施方式中，所述spycatcher的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0016]在本专利技术的一种优选实施方式中，所述spytag的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0017]作为优选方案，所述VP6
‑
spytag蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0018]作为优选方案，所述spycatcher
‑
RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0019]本领域人员可对上述方案进行组合，得到有关本专利技术病毒样颗粒的较优实施例。
[0020]作为本专利技术的一种实施方式，所述病毒样颗粒含有VP6
‑
spytag蛋白、VP2蛋白和spycatcher
‑
RBD蛋白；
[0021]其中，所述VP6
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spytag蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述spycatcher
‑
RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0022]进一步的，本专利技术还提供一种核酸，其编码所述的病毒样颗粒中所含有的蛋白。
[0023]作为本专利技术的一个实施方式，编码所述VP6
‑
spytag蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0024]作为本专利技术的一个实施方式，编码所述spycatcher
‑
RBD蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0025]本专利技术进一步提供一种生物材料，其为表达盒、载体、宿主细胞或重组菌，其包含所述的核酸。
[0026]本专利技术进一步提供一种药物组合物，其包含：(a)所述的病毒样颗粒和/或所述的核酸和/或所述的生物材料；以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0027]本专利技术进一步提供一种疫苗组合物，其包含：(a)所述的病毒样颗粒和/或所述的核酸和/或所述的生物材料；以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0028]在具体实施时，所述的疫苗组合物中还包含佐剂。
[0029]本专利技术进一步提供所述的病毒样颗粒的制备方法，其步骤包括：
[0030]将所述猪轮状病毒的VP6蛋白的loop区与猪流行性腹泻病毒的RBD连接。
[0031]作为优选，所述制备方法的步骤包括：
[0032]将所述VP6
‑
spytag蛋白与所述VP2蛋白组装成双层VLP，而后与所述spycatcher
‑
RBD蛋白偶联。
[0033]作为一种优选的实施方案，将spycatcher
‑
RBD和所述双层VLP蛋白按照1：(1～3)的摩尔比混匀后于进行孵育偶联；更优选其摩尔比为1：2。
[0034]作为本专利技术的一个实施方式，其步骤还包括：在宿主中分别表达VP6蛋白、VP2蛋白、RBD，并回收表达产物。
[0035]在具体实施时，所述的宿主包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、植物或哺乳动物细胞。
[0036]优选地，所述的VP2和VP6
‑
spytag蛋白的表达宿主为毕赤酵母。
[0037]优选地，所述的spycatcher
‑
RBD蛋白的表达宿主为ExpiCHO
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S细胞或CHO
‑
S细胞。
[0038]上述宿主在本专利技术中均能进行高效稳定持续的蛋白表达。
[0039]本专利技术还提供所述的病毒样颗粒和/或所述的核酸和/或所述的生物材料在治疗或预防以下至少一种疾病中的应用：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种病毒样颗粒，其特征在于，其含有猪轮状病毒的VP6蛋白，且所述VP6蛋白的loop区连接有猪流行性腹泻病毒的RBD。2.根据权利要求1所述的病毒样颗粒，其特征在于，所述VP6蛋白的loop区为loop1、loop3或loop4；更优选为loop4；其中，所述loop1为VP6蛋白的第169
‑
176位，所述loop3为VP6蛋白的第240
‑
245位，所述loop4为VP6蛋白的第296
‑
301位。3.根据权利要求1或2所述的病毒样颗粒，其特征在于，还含有猪轮状病毒的VP2蛋白；优选地，所述VP6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；优选地，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；优选地，所述猪流行性腹泻病毒的RBD的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。4.根据权利要求1～3中任一项所述的病毒样颗粒，其特征在于，其含有VP6
‑
spytag蛋白、VP2蛋白和spycatcher
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RBD蛋白；优选地，所述VP6
‑
spytag蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；优选地，所述spycatcher
‑
RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。5.一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1～4中任一项所述的病毒样颗粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，闫鹏先，王清华，肖升东，杜久斌，饶婷婷，潘毅平，
申请(专利权)人：天康制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：