降解PD-L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及降解PD

【技术实现步骤摘要】
降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及生物医学基础研究、药理研究、药物筛选和评价以及再生医学研究及临床应用领域，具体涉及降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是我国发病率和死亡率均居前列的第一类疾病，近年来临床诊断、手术、放化疗的发展使得一部分恶性肿瘤的患者得到早期发现和有效治疗，但是这些治疗手段存在一定的缺点和副作用，对晚期患者的治疗效果并不明显。因此，在全世界范围内寻找新的治疗方法和药物长期以来一直是肿瘤领域研究的热点。不同于传统的治疗方法，肿瘤免疫疗法改变了癌症治疗的格局，通过免疫疗法可以激活或诱导人体建立起对肿瘤抗原的特异性免疫应答，清除原发或转移的肿瘤细胞，并建立免疫记忆，以更好地攻击恶性肿瘤细胞。程序性细胞死亡配体(PD
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L1)是免疫检查点蛋白之一，其在限制T细胞活性中起主要作用，当肿瘤细胞上高表达的PD
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L1与T细胞上的受体结合PD
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1后，抑制了T细胞的杀伤功能，导致T细胞耗竭、肿瘤浸润淋巴细胞失去杀伤能力，使肿瘤细胞生长不受抑制。PD
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L1在肿瘤上的表达与鳞癌、肺癌、食管癌、腺癌等肿瘤的生存率下降有关，表明了抑制PD
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L1的过表达可作为新的有前途的肿瘤免疫治疗靶点。
[0003]尽管目前靶向PD
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L1的抗体已经研发出来并在不同的肿瘤类型中显示出临床活性。PD
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L1抗体通过在细胞表面与PD
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L1结合，阻断PD
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L1与PD
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1结合激活T细胞的免疫应答，增强T细胞的抗肿瘤活性。但是，目前基于这种PD
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L1抗体的免疫检查点阻断的疗法仍存在挑战和不足，例如，有部分肿瘤患者对PD
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L1抗体治疗反应疗效不佳，治疗效果可能随着用药时间的延长而有所降低。因此研究靶向PD
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L1抑制的新抑制剂或方法，进一步改善肿瘤患者的治疗效果仍是非常重要的。
[0004]现靶向蛋白水解嵌合体(PROTAC)是利用细胞内的泛素
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蛋白酶体系统对靶蛋白进行降解的技术。PROTAC是一种异双功能小分子，结构上，小分子的一端是E3泛素连接酶的配体、另一端是结合靶蛋白的配体、中间通过一段合适的linker相连接。在细胞内，PROTAC结合靶蛋白与E3泛素连接酶，形成三元复合物，为靶蛋白连接上泛素，泛素化的靶蛋白被细胞内的蛋白酶体识别并降解。区别于传统的占据驱动的药理学原理，事件驱动的PROTAC技术具有高活性、高选择性，催化降解作用模式、靶向不可成药靶点等诸多优势，成为近年兴起的药物研发方向。然而，研发小分子PROTAC时，找到靶蛋白的高亲和力配体、鉴定出有效招募E3连接酶的部件并不容易。

技术实现思路

[0005]根据现有技术上存在的缺陷，结合目前的研究前沿，本专利技术提供了降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC，该生物大分子靶向蛋白水解嵌合体(BioPROTAC)
具有靶向降解PD
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L1蛋白的功能，能够通过蛋白酶体途径降解PD
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L1，从而降低肿瘤细胞结合T细胞表面PD
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1蛋白的能力、激活T细胞对肿瘤细胞的杀伤力，进而抑制肿瘤细胞的生长。本专利技术还提供了BioPROTAC的应用方法，属于核酸翻译表达多肽或蛋白以水解靶向蛋白的方法，能够将PD
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L1降解，彻底清除肿瘤细胞的PD
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L1，是更有效的治疗策略，为以PD
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L1为靶点的免疫检查点疗法提供了新的思路。
[0006]本专利技术是采用以下的技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供了一种降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC，具体包括以下三部分：靶向PD
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L1蛋白的配体、连接体和E3泛素连接酶SPOP，连接体包括连接靶向PD
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L1蛋白的配体和E3泛素连接酶SPOP的多肽。
[0008]其中，E3泛素连接酶SPOP为SPOP的第167
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374位氨基酸。
[0009]具体的，所述三部分的核酸表达载体组成如下：
[0010](1)翻译成靶向PD
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L1蛋白的配体的核酸序列：SEQ ID NO:1所示的核酸序列，或SEQ ID NO:1删除或增加一个或几个核苷酸，得到与其具有相同功能的核酸序列；
[0011](2)翻译成连接体的核酸序列：(GAAGCGGCGGCGAAA)4；
[0012](3)翻译成E3泛素连接酶SPOP的第167
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374位氨基酸的核酸序列：SEQ ID NO:2，或翻译成E3泛素连接酶SPOP的核酸序列：SEQ ID NO:3，或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3删除或增加一个或几个核苷酸，得到与其具有相同功能的核酸序列。
[0013]本专利技术提供了一种重组核酸表达载体，包括上述的核酸序列对应的核糖核酸和脱氧核糖核酸。
[0014]本专利技术提供了一种多肽，为如下(1)
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(3)中任一种：
[0015](1)上述的核酸表达载体翻译获得的多肽；
[0016](2)包括利用其他方式合成的与(1)所述的氨基酸序列同一性90％以上的多肽；
[0017](3)对(1)所述的氨基酸进行取代或修饰的多肽。
[0018]本专利技术提供了一种抗肿瘤药物，包括如下(1)
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(3)中任一种：
[0019](1)上述的BioPROTAC；
[0020](2)上述的重组核酸表达载体；
[0021](3)上述的多肽。
[0022]本专利技术还提供一种上述的降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC的应用，用于降低肿瘤细胞结合PD
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1的能力，增加T细胞对肿瘤的杀伤力，抑制肿瘤细胞在体内的生长。
[0023]本专利技术还提供一种上述的应用中的BioPROTAC的制备方法，具体过程包括如下步骤：
[0024](1)构建含有上述的三部分的核酸表达载体的重组质粒；
[0025](2)将步骤(1)获得的重组质粒通过体外转录或重头合成的方法核酸；
[0026](3)将步骤(2)获得的核酸通过电转导、病毒载体系统、非病毒载体系统或基因枪注射中的任意一种，导入宿主细胞，获得的宿主细胞长效表达的降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC。
[0027]具体的，所述步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC，其特征在于，具体包括以下三部分：靶向PD
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L1蛋白的配体、连接体和E3泛素连接酶SPOP，连接体包括连接靶向PD
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L1蛋白的配体和E3泛素连接酶SPOP的多肽。2.根据权利要求1所述的降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC，其特征在于，所述E3泛素连接酶SPOP为SPOP的第167
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374位氨基酸。3.根据权利要求2所述的降解PD
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L1的生物大分子靶向蛋白水解嵌合体BioPROTAC，其特征在于，所述三部分的核酸表达载体组成如下：(1)翻译成靶向PD
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L1蛋白的配体的核酸序列：SEQ ID NO:1所示的核酸序列，或SEQ ID NO:1删除或增加一个或几个核苷酸，得到与其具有相同功能的核酸序列；(2)翻译成连接体的核酸序列：(GAAGCGGCGGCGAAA)4；(3)翻译成E3泛素连接酶SPOP的第167
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374位氨基酸的核酸序列：SEQ ID NO:2，或翻译成E3泛素连接酶SPOP的核酸序列：SEQ ID NO:3，或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3删除或增加一个或几个核苷酸，得到与其具有相同功能的核酸序列。4.一种重组核酸表达载体，其特征在于，包括权利要求3所述的核酸序列对应的核糖核酸和脱氧核糖核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕志民，马蕾娜，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：