一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其发酵方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基，包括以下组分：胰蛋白胨，大豆蛋白胨，氯化钠，酵母浸粉，葡萄糖，甘油和磷酸缓冲液。还涉及一种表皮葡萄球菌的高密度发酵方法和应用。应用。应用。

【技术实现步骤摘要】
一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其发酵方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程菌发酵
，尤其是涉及一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其发酵方法和应用。

技术介绍

[0002]表皮葡萄球菌是一种工程菌，可以用于目标蛋白的表达载体，具有蛋白表达量高，表达蛋白为天然构象，无毒无害等优点。
[0003]国内现在基本没有以表皮葡萄球菌为表达载体的表达体系，因此对于该菌的培养、诱导等方面的研究较少，而表皮葡萄球菌与常用的工程菌如大肠杆菌、酵母菌等生长差别较大，不能直接套用其他工程菌的高密度发酵工艺。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有技术的不足提供了一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其发酵方法和应用。
[0005]为此，本专利技术第一方面提供了一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基，包括以下组分：胰蛋白胨，大豆蛋白胨，氯化钠，酵母浸粉，葡萄糖，甘油和磷酸缓冲液。
[0006]根据本专利技术，所述胰蛋白胨的浓度为8
‑
20g/L，所述大豆蛋白胨的浓度为3
‑
7g/L，所述氯化钠的浓度为4
‑
6g/L，所述酵母浸粉的浓度为6
‑
10g/L，所述葡萄糖的浓度为3
‑
7g/L，所述磷酸缓冲液的终浓度为60
‑
140mmol/L，所述甘油的用量为160
‑
240ml/L。
[0007]本专利技术的一些实施例中，所述胰蛋白胨的浓度为12
‑r/>15g/L，所述大豆蛋白胨的浓度为4
‑
5g/L，所述氯化钠的浓度为4.5
‑
5g/L，所述酵母浸粉的浓度为7
‑
8g/L，所述葡萄糖的浓度为4
‑
5g/L，所述磷酸缓冲液的终浓度为80
‑
100mmol/L，所述甘油的用量为180
‑
220ml/L。
[0008]根据本专利技术，所述胰蛋白胨的浓度为15g/L，所述大豆蛋白胨的浓度为5g/L，所述氯化钠的浓度为5g/L，所述酵母浸粉的浓度为8g/L，所述葡萄糖的浓度为5g/L，所述磷酸缓冲液的终浓度为100mmol/L，所述甘油的用量为200ml/L。
[0009]根据本专利技术，所述表皮葡萄球菌高密度发酵培养基的pH值为7.2
‑
7.6。
[0010]本专利技术的一些实施例中，所述表皮葡萄球菌高密度发酵培养基的制备方法具体包括：于1000mL注射水中按比例加入胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉和磷酸缓冲液，调节pH值为7.2
‑
7.6，121℃灭菌20min，再按比例加入葡萄糖和甘油，115℃灭菌15min，即制得表皮葡萄球菌高密度发酵培养基。
[0011]本专利技术第二方面提供了一种表皮葡萄球菌的高密度发酵方法，包括：将表皮葡萄球菌种液通过间歇递增转速和压缩空气进气量进行发酵培养。
[0012]本专利技术的一些实施例中，所述方法具体包括：将表皮葡萄球菌种液随诱导剂同时接入表皮葡萄球菌高密度发酵培养基中，间歇递增转速和压缩空气进气量，停止压缩空气进气后通入氧气，培养至发酵液不再消耗氨水或pH上升时终止发酵。
[0013]根据本专利技术，所述转速的提升频率为每隔20min提升转速35
‑
65r，优选为每隔20min提升转速40
‑
60r，更优选为每隔20min提升转速50r。
[0014]根据本专利技术，所述压缩空气进气量的提升频率为每隔20min提升进气量0.35
‑
0.65VVM，优选为每隔20min提升进气量0.4
‑
0.6VVM，更优选为每隔20min提升进气量0.5VVM。
[0015]本专利技术的一些实施例中，所述诱导剂包括盐酸脱水四环素。
[0016]根据本专利技术，所述诱导剂的终浓度为300
‑
800ng/mL，优选为400
‑
600ng/mL，更优选为500ng/mL。
[0017]本专利技术的一些实施例中，所述表皮葡萄球菌高密度发酵培养基中随表皮葡萄球菌种液和诱导剂同时加入抗生素。
[0018]根据本专利技术，所述抗生素包括红霉素。
[0019]根据本专利技术，所述抗生素的终浓度为2
‑
10μg/mL，优选为3
‑
7μg/mL，更优选为5μg/mL。
[0020]本专利技术的一些实施例中，所述表皮葡萄球菌的高密度发酵方法采用所述表皮葡萄球菌高密度发酵培养基发酵培养表皮葡萄球菌。
[0021]本专利技术的一些实施例中，所述表皮葡萄球菌的高密度发酵方法包括以下具体步骤：
[0022]S1：将表皮葡萄球菌菌种接种于基础发酵培养基中进行发酵培养，得到表皮葡萄球菌种液；
[0023]S2：将表皮葡萄球菌种液随诱导剂和抗生素同时接入表皮葡萄球菌高密度发酵培养基中进行发酵培养；培养6
‑
8h后流加葡萄糖；培养12
‑
14h后，间歇递增转速和压缩空气进气量，待转速提升至1000r/min，压缩空气进气量提升至6VVM时停止压缩空气进气，再通入氧气，培养至发酵液不再消耗氨水或发酵液的pH上升时终止发酵。
[0024]根据本专利技术，所述步骤S2中按照1
‑5‰
体积百分比接种表皮葡萄球菌种液，优选为2
‑4‰
。
[0025]本专利技术的一些实施例中，所述步骤S2中葡萄糖的流加速率为0.5
‑
2g/L/h，优选为0.8
‑
1.5g/L/h，更优选为1g/L/h。
[0026]本专利技术的一些实施例中，所述步骤S2中发酵培养的温度为36～38℃；发酵培养的pH值为6.8
‑
7.8，优选为7.0
‑
7.6，更优选为7.4。
[0027]本专利技术的一些实施例中，所述步骤S2中发酵培养的初始转速为300～400r/min；初始压缩空气进气量为2VVM。
[0028]根据本专利技术，所述步骤S2中转速提升至600r/min后，再在间歇递增转速的同时间歇递增压缩空气进气量。
[0029]根据本专利技术，所述压缩空气进气方式为长通进气。
[0030]根据本专利技术，所述步骤S2中氧气进气量为1
‑
4VVM，优选为2VVM，且随DO值的30％进行自动控制保持。
[0031]根据本专利技术，所述发酵培养的pH值由体积百分比为30％的氨水进行调节。
[0032]根据本专利技术，所述基础发酵培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)和胰酪大豆胨液体培养基(TSB)。
[0033]本专利技术的一些实施例中，所述步骤S1包括以下具体步骤：将表皮葡萄球菌甘油菌接种于TSA培养基中活化后，挑取单菌落接种于TSB培养基中，于36
‑
38℃，200
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基，其特征在于，包括以下组分：胰蛋白胨，大豆蛋白胨，氯化钠，酵母浸粉，葡萄糖，甘油和磷酸缓冲液。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述胰蛋白胨的浓度为8
‑
20g/L，优选为15g/L；所述大豆蛋白胨的浓度为3
‑
7g/L，优选为5g/L；所述氯化钠的浓度为4
‑
6g/L，优选为5g/L；所述酵母浸粉的浓度为6
‑
10g/L，优选为8g/L；所述葡萄糖的浓度为3
‑
7g/L，优选为5g/L；所述磷酸缓冲液的终浓度为60
‑
140mmol/L，优选为100mmol/L；所述甘油的用量为160
‑
240ml/L，优选为200ml/L。3.一种表皮葡萄球菌的高密度发酵方法，其特征在于，包括：将表皮葡萄球菌种液通过间歇递增转速和压缩空气进气量进行发酵培养。4.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述方法具体包括：将表皮葡萄球菌种液随诱导剂同时接入表皮葡萄球菌高密度发酵培养基中，间歇递增转速和压缩空气进气量，停止压缩空气进气后通入氧气，培养至发酵液不再消耗氨水或pH上升时终止发酵；优选地，所述转速的提升频率为每隔20min提升转速35
‑
65r，优选为每隔20min提升转速40
‑
60r，更优选为每隔20min提升转速50r；和/或，所述压缩空气进气量的提升频率为每隔20min提升进气量0.35
‑
0.65VVM，优选为每隔20min提升进气量0.4
‑
0.6VVM，更优选为每隔20min提升进气量0.5VVM。5.根据权利要求3或4所述的发酵方法，其特征在于，所述诱导剂包括盐酸脱水四环素；优选地，所述诱导剂的终浓度为300
‑
800ng/mL，优选为400
‑
600ng/mL，更优选为500ng/mL。6.根据权利要求3
‑
5中任意一项所述的发酵方法，其特征在于，所述表皮葡萄球菌高密度...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，何海，候风，王钢，张飞，王雨朦，
申请(专利权)人：天康制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：