一种二价禽腺病毒特异性抗原融合蛋白制造技术

本发明专利技术提供一种二价禽腺病毒特异性抗原融合蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1，本发明专利技术所提供的抗原融合蛋白可用于制备二价禽腺病毒亚单位疫苗。本发明专利技术将Ⅰ群禽腺病毒特异性中和抗原表位蛋白串联融合表达，所选抗原决定簇能够特异性识别宿主细胞表面特异性受体，通过序列优化改造，将两种血清型抗原通过linker连接肽串联，不但保证其空间免疫构象互不干扰，能获得抵御多种禽腺病毒的多功能蛋白质，还可以简化纯化流程，降低生产成本，具备发展为二价疫苗的潜力。价疫苗的潜力。价疫苗的潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种二价禽腺病毒特异性抗原融合蛋白


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种二价禽腺病毒特异性抗原融合蛋白。

技术介绍

[0002]禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科、禽腺病毒属，根据抗原性分为3个群:Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群。根据血清中和试验，Ⅰ群禽腺病毒可分为12个血清型(1～7，8a，8b，9～11)。目前，我国鸡群感染流行病毒株主要有FAdV
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4、FAdV
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8a、FAdV
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8b、FAdV
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10及FAdV
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11等血清型，其中血清4型(FAdV
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4)和血清8b型(FAdV
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8b)，分别引起心包积液综合征(Hydropericardium syndrome，HPS)和鸡包涵体肝炎(Inclusion body hepatitis，IBH)等疾病，给养禽业造成严重的经济损失。其中FAdV
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4可通过接触水平传播及垂直传播，对雏鸡的致病力最强，致死率高。从最开始爆发至今已造成不可估量的损失；而动物及动物产品的全球化贸易更加速了FAdV的传播。
[0003]禽腺病毒FAdV是一种双链DNA病毒，该病毒的衣壳蛋白主要由六邻体(Hexon)、五邻体(Penton)和纤突蛋白(Fiber)组成。纤突蛋白Fiber和五邻体Penton在病毒感染周期中分别负责病毒吸附和侵入两个过程，血清4型Fiber蛋白具有两个独立的Fiber编码基因FiberⅠ和FiberⅡ。Penton和FiberⅡ具有抗原性，能诱导产生病毒中和抗体。
[0004]目前国内对禽腺病毒防控主要是依靠接种疫苗和定点捕杀，通过国内兽药临床注册数据发现商业化的疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗。传统灭活疫苗、减毒疫苗存在疫苗质量良莠不齐、免疫保护期短、需要的接种量大、且会引发不良反应、疫苗存储时间短、需要低温设备运输，或者存在活病毒逃逸等诸多问题。因而开发新型疫苗来弥补这些不足显得极为迫切。
[0005]新型疫苗的研发主要是集中于基因工程疫苗，包括亚单位疫苗、病毒活载体疫苗以及DNA疫苗，目前国内王增幅等人报道的“一种Ⅰ群血清4型
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血清8型禽腺病毒二价亚单位疫苗及其制备方法”公开的疫苗中4型禽腺病毒纤维蛋白和8型禽腺病毒纤维蛋白分别于大肠杆菌PET系列宿主实现了高表达量与可溶性，但还需要将以4型禽腺病毒纤维蛋白和8型禽腺病毒纤维蛋白分别纯化后摸索其混匀质量比，增加了后续的工作量，且不适合用于多种疾病共同防治所需联苗的开发。另外新型疫苗往往所选抗原决定簇缺乏对当下流行株的针对性，导致其有限的免疫保护性，以及较高的生产成本限制了新型疫苗的发展。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种二价禽腺病毒特异性抗原融合蛋白，是将禽腺病毒毒株ZZ株和CH/GDLZ/201801毒株的特异性抗原表位通过linker进行串联获得的，所提供的抗原融合蛋白具有良好的免疫原性，琼脂扩散试验发现所提供的抗原融合蛋白保存有天然活性，通过动物性保护实验发现机体能够产生有效的禽腺病毒特异性免疫应答。
[0007]本专利技术首先提供一种特异性抗原融合蛋白，包含有：
[0008]1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的融合蛋白：
[0009]2)在1)中经过取代、缺失、添加一个或几个氨基酸，具有1)中抗原活性的蛋白：
[0010]编码上述抗原融合蛋白的基因，其一种具体的核苷酸序列为SEQ ID NO:2；
[0011]本专利技术还提供一种重组表达载体，其中包含有上述的编码基因；
[0012]本专利技术还提供一种重组工程菌株，所述的重组工程菌株中携带有编码上述抗原融合蛋白的重组表达载体；
[0013]作为实施例的一种具体记载，所述的重组工程菌株为枯草芽孢杆菌工程菌；
[0014]本专利技术所提供的抗原融合蛋白可用于制备二价禽腺病毒亚单位疫苗。
[0015]本专利技术还提供一种亚单位疫苗，其中抗原中包含有上述的融合蛋白。
[0016]本专利技术的抗原融合蛋白的优点在于：
[0017]1、将Ⅰ群禽腺病毒特异性中和抗原表位蛋白串联融合表达，所选抗原决定簇能够特异性识别宿主细胞表面特异性受体。
[0018]2、所选目的基因序列来源于毒株ZZ和毒株CH/GDLZ/201801等不同血清型的当下流行株，其致病性与危害性更大，其所编码的蛋白对疾病防控有更强的针对性。
[0019]3、通过序列优化改造，将两种血清型抗原通过linker连接肽串联，不但保证其空间免疫构象互不干扰，能获得抵御多种禽腺病毒的多功能蛋白质，还可以简化纯化流程，降低生产成本，具备发展为二价疫苗的潜力。
[0020]4、选择的特异性中和抗原表位可通过免疫诱导家禽产生高水平的特异性抗体体，琼扩效价可达到26以上，显著提高其抗原天然免疫活性，满足疫苗制备需求；保护家禽免受相关禽腺病毒的感染。
[0021]5、本专利技术通过一步串联表达法获得二价亚单位疫苗，免疫剂量小，更方便于后期多联疫苗的开发。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中毒株ZZ和毒株CH/GDLZ/201801系统进化树分析结果图；
[0023]图2为本专利技术实施例2中pHT304
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F2C4F8(WB800)菌落PCR鉴定琼脂糖凝胶电泳图；
[0024]图3为本专利技术实施例2中pHT304
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F2C4F8质粒双酶切鉴定结果图；
[0025]图4为本专利技术实施例1中Western
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blot验证pHT304
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FADV8B2018F(L2)与pHT304
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FADV4CZZF(L3)及实施例2中pHT304
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F2C4F8(L1)表达产物的电泳图；
[0026]图5为实施例2pHT304
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F2C4F8(A)及实施例1pHT304
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FADV8B2018(B)与pHT304
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FADV4CZZF(C)中抗原琼扩效价检测图；
[0027]图6为本专利技术实施例3中禽腺病毒亚单位疫苗的免疫效力检验图。
[0028]具体实施方
[0029]本专利技术将流行株血清4型毒株ZZ
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fiberⅡ的第229
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479位之间氨基酸特异序列和血清4型毒株CH/GDLZ/201801
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fiber的第272
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522位之间氨基酸特异序列进行拼接，形成的融合蛋白抗原能够特异性识别相应中和抗体，并能够诱导机体产生有效的禽腺病毒特异性免疫应答，保护家禽免受禽腺病毒的感染。
[0030]所提供的抗原融合蛋白能特异性识别禽腺病毒中和抗体，具有良好免疫原性，通过动物性保护实验发现机体能够产生有效的禽腺病毒特本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗原融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白包含有：1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的融合蛋白：2)在1)中经过取代、缺失、添加一个或几个氨基酸，具有1)中抗原活性的蛋白。2.一种基因，其特征在于，所述的基因编码权利要求1所述的抗原融合蛋白。3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。4.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体中插入有权利要求2所述的基因。5.一种重组工程菌株，其特征在于，所述的重组工程菌株中携带有权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，李明义，马凤龙，陈宴霞，杨洁，
申请(专利权)人：青岛海华生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：