同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法及应用技术

本发明专利技术公开一种同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法及应用，属于阿比特龙药物定量检测技术领域。本方法通过LC

Method and application of simultaneous quantitative determination of abiraterone and its five metabolites

【技术实现步骤摘要】
Biomedical and Life Sciences 1104(2019)249
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255)定量检测了ABI及其活性I期代谢物D4A和5αA以及它们相应的非活性葡萄糖醛酸代谢物。然而，上述这些方法并未针对II期硫酸化代谢物进行研究。更重要的是，上述现有的文献报道中，色谱和质谱方法的分析时间超过10min，影响分析通量与效率。最近，T.L.Dillenburg Weiss等人(T.L.Dillenburg Weiss,G.M.Venzon Antunes,G.Schwartsmann,R.Linden,S.Gasparin Verza,Evaluation of dried blood spots as an alternative matrix for therapeutic drug monitoring of abiraterone and delta(4)
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abiraterone in prostate cancer patients,Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 195(2021)113861)在对前列腺癌患者的ABI和D4A的治疗药物监测期间，采用一种干血斑的方法以克服ABI的稳定性问题。
[0005]中国专利申请CN112198244A提供了一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法，该方法以阿比特龙
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d4的甲醇水溶液为内标；液相色谱分析使用Waters XTERRA MS C18作为填充柱材料，流动相A为10mM乙酸铵
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0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸甲醇溶液；质谱条件采用ESI源，离子化方式为电喷雾离子化正离子，MRM监测方式，极性为正离子，碎裂电压240V，碰撞能65V，阿比特龙母离子m/z为350.2，子离子m/z为155.9；阿比特龙
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d4(IS)的母离子m/z为354.2，子离子的m/z为159.9。然而，该方法仅能用于阿比特龙单一化合物的分析检测，且该方法分析时间较长(6min)，不适用于高通量的阿比特龙及其多种代谢物的同时检测。
[0006]上述这些现有的方法都不能用于同时检测痕量水平的Ⅰ期代谢物和高浓度的Ⅱ期代谢物。目前，国内外均没有公开的采用液相色谱和质谱串联技术同时检测阿比特龙及其五种Ⅰ期、Ⅱ期代谢物的专利或文献报道。

技术实现思路

[0007]针对以上现有技术的不足，本专利技术提供了一种同时定量测定阿比特龙及五种代谢物的方法及其应用。本专利技术提供的方法能够同时检测人血浆中的阿比特龙(ABI)、d4
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阿比特龙(D4A)、3
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酮基
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5α
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阿比特龙(5αA)、阿比特龙N
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氧化物(A
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NO)、硫酸阿比特龙(A
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Sul)和硫酸阿比特龙N
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氧化物(A
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NO
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Sul)，利用这种方法可以应用于健康受试者临床药代动力学等研究与患者血药浓度监测，以及醋酸阿比特龙制剂研发及其相关前药开发，同时还能够用于研发同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的质谱检测试剂盒。具体通过以下技术实现。
[0008]同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法，包括以下步骤：
[0009]S1、分别制备阿比特龙及其五种代谢物的校正标样工作液和质控样品工作液，取校正标样工作液和质控样品工作液用空白血浆1:24稀释制成校正标样和质控样品；阿比特龙的五种代谢物分别为d4
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阿比特龙、3
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酮基
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5α
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阿比特龙、阿比特龙N
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氧化物、硫酸阿比特龙和硫酸阿比特龙N
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氧化物；
[0010]S2、取校正标样、质控样品或待测样品分别加入内标工作液；然后加入乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋、离心，取上清，氮气吹干、复溶后备用；
[0011]S3、将步骤S2所得溶液分别进样LC
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MS/MS系统得到色谱图；根据色谱图中分析物和内标色谱峰面积的比值，获得相应的标准曲线回归方程，计算待测样品的血浆中阿比特
龙及其五种代谢物的浓度；
[0012]其中，步骤S1的阿比特龙及其五种代谢物的所述校正标样工作液是取阿比特龙及其五种代谢物的储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液按梯度稀释配制而成；
[0013]所述质控样品工作液是取阿比特龙及其五种代谢物的储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液按梯度稀释，分别配制成相应的LLOQ、LQC、MQC、MQC2、HQC质控样品工作液；
[0014]步骤S2的所述内标工作液是将ABI
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d4(阿比特龙
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d4)储备液用甲醇水溶液稀释制备而成；
[0015]所述阿比特龙及其五种代谢物的储备液和待测样品工作液在4℃保存；所述标准品工作液在检测时新制备。
[0016]优选地，步骤S1中，阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为12.5
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5000ng/mL，d4
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为0.25
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100ng/mL，5α
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为1.25
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500ng/mL，阿比特龙N
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氧化物的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为2.5
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125ng/mL，硫酸阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为250
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100000ng/mL，硫酸阿比特龙N
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氧化物的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为625
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125000ng/mL；
[0017]阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为12.5
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3750ng/mL，d4
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阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为0.25
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75ng/mL，5α
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阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为1.25
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375ng/mL，阿比特龙N
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氧化物的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为2.5
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93.75ng/mL，硫酸阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为250
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75000ng/mL，硫酸阿比特龙N
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氧化物的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为625
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93750ng/mL，即分别配制成相应的LLOQ、LQC、MQC、MQC2、HQC质控样品工作液。
[0018]优选地，步骤S1中，阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度分别为12.5、25、50、125、500、2500、4500、5000ng/mL，d4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、分别制备阿比特龙及其五种代谢物的校正标样工作液和质控样品工作液，取校正标样工作液和质控样品工作液用空白血浆1:24稀释制成校正标样和质控样品；阿比特龙的五种代谢物分别为d4
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阿比特龙、3
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酮基
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5α
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阿比特龙、阿比特龙N
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氧化物、硫酸阿比特龙和硫酸阿比特龙N
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氧化物；S2、取校正标样、质控样品或待测样品分别加入内标工作液；然后加入乙腈沉淀血浆蛋白，涡旋、离心，取上清，氮气吹干、复溶后备用；S3、将步骤S2所得溶液分别进样LC
‑
MS/MS系统得到色谱图；根据色谱图中分析物和内标色谱峰面积的比值，获得相应的标准曲线回归方程，计算待测样品的血浆中阿比特龙及其五种代谢物的浓度；其中，步骤S1的阿比特龙及其五种代谢物的所述校正标样工作液是取阿比特龙及其五种代谢物的储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液按梯度稀释配制而成；所述质控样品工作液是取阿比特龙及其五种代谢物的储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液按梯度稀释，分别配制成相应的LLOQ、LQC、MQC、MQC2、HQC质控样品工作液；步骤S2的所述内标工作液是将ABI
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d4(阿比特龙
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d4)储备液用甲醇水溶液稀释制备而成；所述阿比特龙及其五种代谢物的储备液和待测样品工作液在4℃保存；所述标准品工作液在检测时新制备。2.根据权利要求1所述的同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法，其特征在于，步骤S1中，阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为12.5
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5000ng/mL，d4
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为0.25
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100ng/mL，5α
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为1.25
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500ng/mL，阿比特龙N
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氧化物的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为2.5
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125ng/mL，硫酸阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为250
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100000ng/mL，硫酸阿比特龙N
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氧化物的所述校正标样工作液的浓度梯度范围为625
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125000ng/mL；阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为12.5
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3750ng/mL，d4
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阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为0.25
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75ng/mL，5α
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阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为1.25
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375ng/mL，阿比特龙N
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氧化物的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为2.5
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93.75ng/mL，硫酸阿比特龙的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为250
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75000ng/mL，硫酸阿比特龙N
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氧化物的所述质控样品工作液的浓度梯度范围为625
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93750ng/mL，即分别配制成相应的LLOQ、LQC、MQC、MQC2、HQC质控样品工作液。3.根据权利要求1所述的同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法，其特征在于，步骤S1中，阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度分别为12.5、25、50、125、500、2500、4500、5000ng/mL，d4
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度分别为0.25、0.5、1、2.5、10、5、90、100ng/mL，5α
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阿比特龙的所述校正标样工作液的浓度分别为1.25、2.5、5、12.5、50、250、450、500ng/mL，阿比特龙N
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氧化物的所述校正标样工作液的浓度分别为2.5、5、12.5、25、50、100、120、125n...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜宏梁，张杨，黄建耿，胡亦欣，陈桂英，
申请(专利权)人：武汉宏韧生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：