一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法技术

本发明专利技术公开了一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法，使用高效液相色谱法检测复方氨基酸注射液（20AA）中11种成份，包括：8种氨基酸主成份即缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、乙酰半胱氨酸、苯丙氨酸、乙酰酪氨酸、色氨酸，两种主要降解产物即乙酰胱氨酸和焦谷氨酸和一种附加成分即醋酸盐。本发明专利技术色谱条件温和，利于推广和使用；且未采用衍生化试剂，延长色谱柱的使用寿命，并提高检测结果的准确性；同时避免使用昂贵的仪器设备和分析柱，极大降低了检测成本，可应用于复方氨基酸注射液成份的检测。的检测。的检测。

A detection method of 11 components in compound amino acid injection

【技术实现步骤摘要】
一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法


[0001]本专利技术涉及复方氨基酸注射液(20AA)中含量和有关物质检测方法，属于药物质量测定方法


技术介绍

[0002]复方氨基酸注射液(20AA)是由20种氨基酸原料药组合配制成的无菌水，主要用于严重肝功能不全和即将或者已经发展为肝性脑病患者的肠外氨基酸营养液；临床上也会与维生素B6和葡萄糖等注射液联合使用，以增加其作用与疗效。由于复方氨基酸注射液(20AA)主成份多，制备工艺存在诸多因素影响其质量，中国药典仍未收载该品种进行控制。
[0003]复方氨基酸注射液是多种氨基酸的混合物，现已广泛地应用于医药行业，氨基酸分析技术对复方氨基酸药品具有重要意义。由于氨基酸具有高极性、低挥发性、发色基团弱等特性，检测方法困难，为其分离和检测带来不小的难度。专利CN105588900A公开了一种复方氨基酸注射液18AA
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II含量测定方法，方法使用的氨基酸分析仪价格昂贵，离子交换树脂柱费用高，使用了配制繁琐的5种流动相，梯度洗脱时间需要54分钟，且部分氨基酸无法达到基线分离。
[0004]李莉发表的“复方氨基酸注射液(18AA)中焦谷氨酸的限量检查方法研究”一文，方法在26分钟内只检测了复方氨基酸注射液(18AA)中焦谷氨酸中一种成份。该现有技术因使用乙腈体作为流动相，导致洗脱能力太强，注射液中多种成份聚集在空白溶剂峰中未被分离开；存在不设置柱温控制易使方法在不同室温条件下运行出峰时间波动大等诸多问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法，以克服现有技术存在的缺陷，从而提供一种操作简便，准确度更高，通用性更好的测定复方氨基酸注射液(20AA)中8种氨基酸主成份(缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、乙酰半胱氨酸、苯丙氨酸、乙酰酪氨酸、色氨酸)，2种主要降解产物(乙酰胱氨酸和焦谷氨酸)和1种附加成分(醋酸盐)的检测方法。
[0006]为了解决以上技术问题，本专利技术采用缓冲盐
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甲醇体系的两种流动相，配制简单，从而将复方氨基酸注射液(20AA)中包括含量、有关物质和附加物等多种成份进行分离，可实现在25分钟内检测11份成份之多，大大提高了检测效率，同时未使用成本高的仪器和色谱柱，更利于普及和推广。本专利技术方法具有操作简单，结果准确，适用性强等特点。本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法检测8种氨基酸、2种降解产物和1种附加成份，具体包括以下步骤：
[0008]步骤一，配制缬氨酸、醋酸盐、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、乙酰酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、乙酰半胱氨酸、乙酰胱氨酸和焦谷氨酸对照品溶液；浓度分别为：0.64mg/ml，0.18mg/ml，72μg/ml，0.52mg/ml，0.82mg/ml，52μg/ml，96μg/ml，90μg/ml，48μg/ml，2.4μg/
ml和17μg/ml；其中醋酸盐对照品配制采用醋酸钠配制；
[0009]步骤二，以超纯水将复方氨基酸注射液20AA稀释17倍得供试品溶液；
[0010]步骤三，确定高效液相色谱条件，高效液相色谱法具体采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
[0011]流动相A为磷酸盐缓冲液(pH2.5)，流动相B为甲醇；流动相洗脱程序如下表所示：
[0012]时间05152020.125A％1001008080100100B％00202000
[0013]流速1.2ml/min；紫外检测器检测波长205nm；进样器温度设定为4℃；进样量为20μL；柱温为40℃；
[0014]步骤四，采用步骤三的高效液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液分别进行检测，记录色谱图；
[0015]步骤五，根据对照品溶液中目标峰峰面积，按外标法计算供试品中各组分含量；其中，醋酸盐需根据处方醋酸赖氨酸中醋酸占比进行折算，处方中醋酸赖氨酸浓度为10.6mg/ml，其中醋酸和赖氨酸分子量分子量为60.05和146.19，醋酸占比为29.11％，因此醋酸浓度为3.08mg/ml。
[0016]所述色谱柱为C18柱，规格为250mm
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4.6mm，5μm。
[0017]所述磷酸盐流动相采用磷酸二氢铵，浓度为20mM，用磷酸调pH至2.5。
[0018]用水稀释对照品和样品至指定浓度，采用外标法计算样品溶液中目标成分的含量。
[0019]本专利技术具有有益效果。
[0020]相比于现有技术，本专利技术方法具有操作简单，结果准确，适用性强等优点。
[0021]本专利技术通过采用常规液相色谱法，无需使用衍生化试剂和昂贵的仪器、检测器或分析柱，从而避免了各种不稳定因素对样品检测结果的干扰，使得本专利技术的检测方法简便可行；本专利技术采用缓冲盐
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甲醇体系的两种流动相，配制简单，从而将复方氨基酸注射液(20AA)中包括含量、有关物质和附加物等多种成份进行分离，从而具有分析时间短，专属性强，准确性高，可以在25分钟内同时检测复方氨基酸注射液(20AA)中缬氨酸、醋酸盐、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、乙酰酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、乙酰半胱氨酸、乙酰胱氨酸和焦谷氨酸等11种成份含量，大大提高了检测效率，方法条件温和，成本经济；本专利技术无需使用成本高的仪器和色谱柱，更利于普及利于推广和使用。
附图说明
[0022]图1为本专利技术空白溶液分离色谱图；
[0023]图2为本专利技术复方氨基酸注射液(20AA)待测液分离色谱图。
具体实施方式
[0024]下面结合附图和具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术的权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围内。
[0025]本专利技术空白溶液分离色谱图如图1所示；复方氨基酸注射液(20AA)待测液分离色谱图如图2所示。
[0026]仪器设备：安捷伦高效液相色谱分析仪；十万分之一精密电子分析天平；METTLER TOLEDO酸度计。
[0027]药品信息：乙酰半胱氨酸(SIGMA，98.7％)、乙酰酪氨酸(SIGMA，99.7％)、苯丙氨酸(SIGMA，99.9％)、色氨酸(SIGMA，99.93％)、异亮氨酸(SIGMA，98.9％)、亮氨酸(SIGMA，99.0％)、缬氨酸(SIGMA，98.9％)、甲硫氨酸(SIGMA，99.8％)、焦谷氨酸(中国食品药品检定研究所，99.8％)、醋酸钠(USP，99.8％)、20AA复方氨基酸注射液(自制样品，194828063、194838064、194838065、184838062、A220109 01)
[0028]试剂信息：甲醇(默克，色谱纯)、磷酸二氢铵(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)、磷酸(上海麦克林生化科技有限公司，分析纯)
[0029]步骤如下
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复方氨基酸注射液中11种成份检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法检测8种氨基酸、2种降解产物和1种附加成份，具体包括以下步骤：步骤一，配制缬氨酸、醋酸盐、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、乙酰酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、乙酰半胱氨酸、乙酰胱氨酸和焦谷氨酸对照品溶液；浓度分别为：0.64mg/ml，0.18mg/ml，72μg/ml，0.52mg/ml，0.82mg/ml，52μg/ml，96μg/ml，90μg/ml，48μg/ml，2.4μg/ml和17μg/ml；其中醋酸盐对照品配制采用醋酸钠配制；步骤二，以超纯水将复方氨基酸注射液20AA稀释17倍得供试品溶液；步骤三，确定高效液相色谱条件，高效液相色谱法具体如下采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A为磷酸盐缓冲液(pH2.5)，流动相B为甲醇；流动相洗脱程序如下表所示：时间05152020.125A％1001008080100100B％00202000流速1.2ml/min；紫...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢晓，李杰，戚雪勇，王刚，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：