金银花叶指纹图谱建立的方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种金银花叶药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，涉及中药材的指纹图谱技术领域。该方法包括：(a)混合对照品溶液的制备；(b)供试品溶液制备；(c)HPLC检测条件；(d)以绿原酸为参照峰的标准指纹图谱的制定；(e)指纹图谱的质量控制；(f)聚类分析、主成分分析。该方法对供试品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，具有一定的专属性；本发明专利技术建立了金银花叶药材HPLC指纹图谱的共有模式，标定了16个共有峰，并完成指认绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷5个共有成分，能有效的表征其质量，克服了原质量控制方法的单一性，具有较高的应用价值。价值。价值。

Establishment method and fingerprint of honeysuckle leaves

【技术实现步骤摘要】
金银花叶指纹图谱建立的方法及其指纹图谱


[0001]本专利技术属于中药材的指纹图谱
，涉及一种金银花叶指纹图谱建立的方法及其指纹图谱。

技术介绍

[0002]中药材指纹图谱是指中药材经过适当处理后，采用一定的分析手段和检测仪器得到的，能够标识该中药材特性的图谱，它是现阶段可以较全面地反应中药材内在质量的最有效的手段之一。
[0003]金银花叶为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥叶，具有清热解毒，疏散风热的作用，归肺、心、胃经；多用于热毒血痢，风热感冒；主产于河南、山东、四川、贵州等地，其种类繁杂，按属性可分为：忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、毛萼忍冬Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.等。其中以忍冬应用最为广泛，为我国地方特色用药。本品含有较多的化学成分，以黄酮类、有机酸类、环烯醚萜苷类等为主；根据现代药理研究表明，金银花叶具有较强的抗菌、抗病毒、保肝等药理作用。绿原酸、木犀草苷是金银花叶的主要成分，含量较高。在金银花叶中化学成分与金银花相似的情况下，可考虑作为金银花的替代品，最大程度节约药材资源。本文通过研究金银花叶质量标准，并采取HPLC法，建立金银花叶的指纹图谱，为金银花叶的开发利用、科学鉴定和质量控制提供依据。
[0004]中国专利申请CN 105842373 A公开了一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法。该方法，以金银花配方颗粒为检测对象，建立了针对该药物制剂的指纹图谱的方法，获得了较为全面的图谱信息，确认了共有特征峰1号峰新绿原酸、2号峰绿原酸、3号峰隐绿原酸、4号峰芦丁、5号峰木犀草苷、6号峰、7号峰异绿原酸A和8号峰异绿原酸C，选择2号峰绿原酸作为内参考峰，确定了金银花配方颗粒的共有特征峰的相对保留时间，且结合该指纹图谱中多个色谱峰的信息，能够实现其质量检测和控制。文献：山东道地药材金银花HPLC指纹图谱研究[J].山东中医药大学学报,2008.中公开了一种金银花HPLC指纹图谱测定方法，建立山东金银花药材HPLC标准指纹图谱。通过对山东各产区的金银花样品进行指纹图谱相似度计算和匹配分析研究，归纳出8批样品的HPLC指纹图谱具有36个共有的特征指纹峰，其中19个共有指纹峰的总面积占总峰面积的90％以上，其中标定了绿原酸、木犀草苷、芦丁、槲皮素、咖啡酸5个已知指纹峰。然而上述两种指纹图谱均研究金银花，未对该植物的其他部位进行指纹图谱研究；且公开的指纹图谱分离的成分相对较少，指纹图谱信息不全面，质量控制也不完善。
[0005]因此，有必要探索一种重复性、稳定性、精密度高，专属性强的金银花叶指纹图谱建立的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种金银花叶药材指纹图谱建立的方法
及其指纹图谱，利用该图谱可监控金银花叶药材的质量及鉴别真伪。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]提供了一种金银花叶指纹图谱建立的方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、HPLC检测、标准指纹图谱的制定、指纹图谱的质量控制、聚类分析。
[0009]进一步地，所述对照品溶液的制备包括以下步骤：
[0010](1)将绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷混合，加入甲醇溶液溶解、摇匀，即得混合对照品溶液；
[0011](2)将绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷分别于溶剂中溶解、摇匀，制得绿原酸溶液、咖啡酸溶液、芦丁溶液、金丝桃苷溶液、木犀草苷溶液。
[0012]进一步地，步骤(1)中所述混合对照品溶液中绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷的浓度分别为：0.125
‑
0.130mg/mL，0.110
‑
0.115mg/mL，0.120
‑
0.125mg/mL，12
‑
13μg/mL，86
‑
87μg/mL。
[0013]进一步地，步骤(2)中所述绿原酸溶液的浓度为0.110
‑
0.115mg/mL，咖啡酸溶液的浓度为0.150
‑
0.160mg/mL、芦丁溶液的浓度为0.145
‑
0.150mg/mL、金丝桃苷溶液的浓度为0.100
‑
0.110mg/mL、木犀草苷溶液的浓度为0.180
‑
0.185mg/mL。
[0014]进一步地，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0015](1)在金银花叶粉末中加入甲醇溶液并进行超声处理得到溶液A；
[0016](2)将溶液A进行冷却、过滤，所得滤液挥发至干得到产物B；
[0017](3)将产物B中加入甲醇溶液过滤。
[0018]进一步地，步骤(1)、(3)中所述甲醇溶液中甲醇的体积分数为60
‑
80％。
[0019]进一步地，步骤(1)中所述超声时间为60
‑
90min。
[0020]进一步地，步骤(3)中所述过滤使用的微孔滤膜的尺寸为0.4
‑
0.5μm。
[0021]进一步地，所述HPLC检测中流动相为乙腈和甲酸溶液，所述甲酸溶液中甲酸的体积分数为0.4
‑
0.6％。
[0022]进一步地，所述流动相的洗脱程序为：0
‑
15min，乙腈体积分数为10％
→
20％；15
‑
30min，乙腈体积分数为20％
→
20％；30
‑
40min，乙腈体积分数为20％
→
30％；该程序意思是：在0min的时候乙腈占10％，甲酸溶液占90％，到15min的时候乙腈A占20％，甲酸溶液占80％，依次类推，15
‑
30min、30
‑
40min也分别如此。
[0023]进一步地，所述HPLC检测中检测波长为330
‑
370nm，柱温为30
‑
40℃，进样量8
‑
15μL。
[0024]进一步地，上述所述方法建立的金银花叶指纹图谱。
[0025]在具体的实施方式中：
[0026](1)对照品溶液的制备：
[0027]精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷，置于100mL同一棕色容量瓶中，加入80％体积分数的甲醇溶液溶解定容，摇匀，制得含绿原酸0.1286mg/mL、咖啡酸0.1140mg/mL、芦丁0.1210mg/mL、金丝桃苷12.348μg/mL、木犀草苷86.700μg/mL的混合对照品溶液。再精密称取上述5种对照品，分别置于5个100mL棕色容量瓶中，加入80％体积分数的甲醇溶液溶解定容，摇匀，分别制得本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金银花叶指纹图谱建立的方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、HPLC检测、标准指纹图谱的制定、指纹图谱的质量控制、聚类分析；所述对照品溶液的制备包括以下步骤：(1)将绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷混合，加入甲醇溶液溶解、摇匀，即得混合对照品溶液；(2)将绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷分别于溶剂中溶解、摇匀，制得绿原酸溶液、咖啡酸溶液、芦丁溶液、金丝桃苷溶液、木犀草苷溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述混合对照品溶液中绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、木犀草苷的浓度分别为：0.125
‑
0.130mg/mL，0.110
‑
0.115mg/mL，0.120
‑
0.125mg/mL，12
‑
13μg/mL，86
‑
87μg/mL。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述绿原酸溶液的浓度为0.110
‑
0.115mg/mL，咖啡酸溶液的浓度为0.150
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0.160mg/mL、芦丁溶液的浓度为0.145
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0.150mg/mL、金丝桃苷溶液的浓度为0.100
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄兴龙，王开莉，易文博，刘珏，董会平，巫露娜，熊峰，
申请(专利权)人：重庆市綦江区中医院，
类型：发明
国别省市：