一种二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法，通所述检测方法包括以下步骤：溶解二硬脂酰磷脂酰胆碱，采用高效液相色谱法进行检测，采用以丁基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；本发明专利技术的流动相的有机相为甲醇

【技术实现步骤摘要】
一种二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法


[0001]本专利技术涉及化学品分析
，具体是一种二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法。

技术介绍

[0002]磷脂酰胆碱(PC)，又称卵磷脂或胆碱磷脂，是生命活动的基础物质。它与其它磷脂成分如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)与肌醇磷脂(PI)等，以混合物形式广泛存在于动植物和人的细胞膜与卵细胞中。脂质体(liposome)是一种人工膜，在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体。脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。脂质体对机体毒副作用小，其脂质双分子层与生物膜有较大的相似性与组织相溶性，易于被组织吸收。二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)是制备脂质体的重要辅料之一，脂质体研究方面有着广泛的应用，因此亟需一种能够快速准确检测二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)的方法，为DSPC的进一步研究、在医疗、化工、食品、药品、保健品等领域的应用提供技术支持。
[0003]现有技术中，检测磷脂的方法较多，主要检测方法有化学法、酶法、色谱法、核磁共振波谱法等方法。化学成本法相对较低，但是这种方法准确度不高，容易受到干扰；薄层色谱法精密度不高；专利文献CN 106404683A公开了一种酶法检测磷脂的技术，但是存在着结果精密度不高，操作繁琐、对实验操作人员要求高等缺点。现有技术公开了(arcia C,LutzN W,Confort
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Gouny S,et al.Phospholipid fingerprints ofmilk from different mammalians determinedby 31PNMR:towards specific interest in human health[J].Food Chemistry,2012,135(3):1777
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1783.)用核磁共振分析牛奶中卵磷脂中各组分的含量。然而，核磁共振波谱法对仪器和实验条件要求均高，不适宜大面积推广。专利文献CN101387587公开了一种比色法检测卵磷脂含量的方法，但是其前处理繁琐，效率较低。专利文献CN110007032A公开了一种磷脂检测方法及应用，采用高效液相色谱蒸发光检测法检测磷脂，但是该方法其特异性不强，不能很好的将二硬脂酰磷脂酰胆碱于杂质分离，从而不能很好的满足检测二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测要求。
[0004]因此，亟需建立一种兼顾灵敏度高、特异性强、方法稳定和分析效率的二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供一种兼顾灵敏度高，特异性强，方法稳定，分析效率高的二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法，包括如下技术方案：
[0006]本专利技术溶解二硬脂酰磷脂酰胆碱，采用高效液相色谱法进行检测；
[0007]进一步的，所述高效液相色谱法采用以丁基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；
[0008]进一步的，所述高效液相色谱法的流动相的有机相为甲醇
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乙腈，所述水相为三氟乙酸水溶液，所述为三氟乙酸与水的体积之比为(0.1～0.3)：100；比如，所述三氟乙酸与水
InertSustain C18，4.6
×
250mm,5μm)的色谱柱的检测样品溶液液相色谱图；
[0031]附图4为采用本专利技术实施例1中采用丁基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Xbridge Protein BEH C44.6
×
150mm,3.5μm，300A)的色谱柱的检测样品溶液液相色谱图；
[0032]附图5为采用本专利技术实施例2所述流动相采用甲醇时的方法检测样品溶液液相色谱图；
[0033]附图6为采用本专利技术方法检测样品的定量限色谱图；
[0034]附图7为采用本专利技术方法的线性关系。
具体实施方式
[0035]除非另有定义，本专利技术中所使用的所有科学和技术术语具有与本专利技术涉及
的技术人员通常理解的相同的含义。
[0036]本专利技术中，术语“固定相”是将在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。
[0037]本专利技术中，术语“流动相”是指色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。
[0038]本专利技术中，术语“流动相改性剂”是指添加在流动相中可以调节pH的试剂，向流动相加入改性剂调节pH值可以抑制溶质离子化和调节离子强度，能够使色谱峰的峰型更加对称，能够抑制峰形拖尾并改善分离效果。
[0039]本专利技术中，术语“电喷雾检测器”是一款通用型检测器，可检测任何非挥发性和部分半挥发性物质，并能兼容梯度，适用于无紫外吸收的化合物的液相色谱定量，定性等，其原理是利用样品中分析物质量与信号电流成正比，能够检测所有非挥发物，不论被测分子结构如何。
[0040]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0041]实施例1色谱柱的优化
[0042]1.1采用丁基硅烷键合硅胶为填充剂(DAISOPAKSP
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300
‑5‑
C4
‑
BIO 4.6
×
250mm,5μm，300A)色谱柱
[0043]所述HPLC检测方法具体包括如下步骤：
[0044](1)色谱条件：
[0045]仪器：岛津LC
‑
16高效液相色谱仪
[0046]检测器：Thermo Veo RS CAD检测器
[0047]色谱柱：丁基硅烷键合硅胶为填充剂(DAISOPAKSP
‑
300
‑5‑
C4
‑
BIO 4.6
×
250mm,5μm，300A)
[0048]水相(流动相A)：0.1％三氟乙酸水溶液。
[0049]有机相(流动相B)：甲醇与乙腈体积比为4：1溶液。
[0050]流速：1.0mL/min。
[0051]柱温：40℃。
[0052]进样量：10μL。
[0053]工作站：Labsolution
[0054]按如下表进行梯度洗脱：
[0055]表1.1、洗脱程序
[0056][0057]色谱图见图2，从图2中可以看出，本专利技术实施例1的方法峰型良好。
[0058]1.2采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(GL Science InertSustain C18，4.6
×
250mm,5μm)的色谱柱
[0059]所述HPLC检测方法具体包括如下步骤：
[0060](1)色谱条件：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二硬脂酰磷脂酰胆碱纯度的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：溶解二硬脂酰磷脂酰胆碱，采用高效液相色谱法进行检测；所述高效液相色谱法采用以丁基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；所述高效液相色谱法的流动相的有机相为甲醇
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乙腈，所述水相为三氟乙酸水溶液，所述为三氟乙酸与水的体积之比为(0.1～0.3)：100。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述有机相中甲醇与乙腈的体积之比为3～5：1。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水相为三氟乙酸的水溶液，所述三氟乙酸与水的体积之比0.1：100。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述丁基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱的参数为：4.6
×
250mm，5μm，300A。5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱温度为38～42℃；所述流动相的流速为0.2～1.5mL/min，优选为0.8～1.0mL/min；更优选为1.0mL/min。6.如权利要求1所述的检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱丹丹，李洋，何平，赵宣，
申请(专利权)人：天津键凯科技有限公司，
类型：发明
国别省市：