【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析检测，具体涉及一种马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的检测方法。
技术介绍
1、聚乙二醇因为其低毒性，无免疫原性和无抗体性的特点，被广泛的应用在了生物医药、化工、材料领域，在聚乙二醇材料的应用中，端基(即聚乙二醇高分子链两端的功能化基团)起着决定性的作用，不同端基的聚乙二醇具有不同的用途。可以与特定的药物结合。如当其与小分子活性成分、多肽、蛋白质药物结合时，其能够有效地改善药物的稳定性、水溶性、存在免疫原性、肾清除速率快等问题，有利于药物的快速吸收和迅速起效，降低了药物在细胞外分解造成的毒性。
2、马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯(简称为mal-peg2-spa)通常被用于蛋白药物的修饰，其能增强药物分子的水溶性，能使其更好地分散于血液中，避免了药物簇集效应，因而有利于药物的快速吸收和迅速起效，其结构如下：
3、
4、为了保证马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的使用安全和质量，通常需要对其纯度检测，开发一种能够有效检出马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯有关物质的方法，对于马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯进一步质量控制具有十分重要的意义。
5、马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯为极性较大的化合物，其在c18色谱柱保留较弱，无法有效的分离样品与杂质。该化合物紫外吸收较弱，部分杂质可能没有紫外吸收，采用紫外检测器进行检测时，样品中存在的已知杂质和未知杂质不易检出，现有技术中公开了马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺
6、在文献(separation of polyethylene glycols and maleimide-terminatedpolyethylene lycols by reversed-phase liquid chromatography under criticalconditions)中公开了采用hplc方法分离聚乙二醇和马来酰亚胺端接聚乙二醇，其方法采用了蒸发光散射探测器(elsd)，色谱柱为c18柱，流动相为乙腈/水＝40：60，流速为0.5ml/min，其分离了聚乙二醇和马来酰亚胺取代聚乙二醇衍生物，并未公开马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的分离方法。
7、现有技术(separation and detection ofbis-maleimide-polyethylene glycoland mono-maleimide-polyethylene glycol by reversed-phase high pressure liquidchromatography)中公开了采用反相高压液相色谱法分离和检测双马来酰亚胺聚乙二醇和单马来酰亚胺聚乙二醇，其检测过程中，将mal-peg与含有紫外发色团的肽进行衍生，再将衍生后的待测物在反相色谱中进行分离，采用c18色谱柱，360nm的紫外检测，其检测过程中需要衍生才能进行检测，操作不够简便。
8、现有技术(马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚的合成研究)对马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚(mpeg-mal)进行rp-hplc分析，检测波长为215nm，梯度洗脱a:0.05％tfa/h2o、b:0.05％tfa/70％ch3cn/h2o，流速为1ml/min。马来酰亚胺-聚乙二醇单甲醚中紫外吸收弱，检测的准确度会有影响。
9、由上述可知，现有技术鲜有兼顾操作简单，结果准确，稳定性高，精密度好的检测方法，对马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯进行质量控制。
技术实现思路
1、为了解决上述
技术介绍
的问题，本专利技术的具体技术方案如下：
2、本专利技术第一方面提供一种马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯(mal-peg2-spa)的检测方法，将马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯溶解，采用液相色谱法进行检测，所述液相色谱法采用以金刚烷为键合相的色谱柱；所述液相色谱法的流动相a相为：三氟乙酸-水，三氟乙酸与水的体积比为(0.1～0.3):100；所述液相色谱法的流动相b相为：三氟乙酸-乙腈，三氟乙酸与乙腈的体积比为(0.1～0.3):100。
3、本专利技术采用特定的金刚烷键合相柱，能够更好的分离产品及杂质，马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯属于极性较大的化合物，传统色谱柱在反相模式下很难对强极性化合物进行分析，金刚烷键合相柱的官能团结构虽然与常规色谱柱(比如c18)的烷基不同，但仍然是烷基，可以作为反相色谱柱来使用，不用改变分离模式，(比如从反相模式改成hilic模式)。金刚烷键合相柱的立体笼状结构官能团——金刚烷基团，具有与常规c18色谱柱完全不同的表面特性，兼具疏水选择性和笼状结构的立体选择性，能够对强极性化合物和疏水性化合物共同分析，并且对一些具有微小差异的化合物进行有效分离，在本专利技术中，马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯具有强极性，传统方法方法不易将其与杂质分离并定量，采用本专利技术的金刚烷键合相柱配合特定的色谱条件和检测器能够有效分离马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯和其杂质。
4、进一步的，所述三氟乙酸与水的体积比包括不限于0.1:100、0.12:100、0.12:100、0.15:100、0.2:100、0.22:100、0.25:100或0.3：100；
5、和/或，所述三氟乙酸与乙腈的体积比包括不限于：0.1:100、0.12:100、0.12:100、0.15:100、0.2:100、0.22:100、0.25:100或0.3：100。
6、优选的，流动相a：采用0.1％三氟乙酸水溶液作为流动相a。
7、优选的，流动相b：采用0.1％三氟乙酸乙腈作为流动相b。
8、进一步的，所述金刚烷键合相色谱柱的规格为：4.6×250mm，5μm。
9、进一步的，所述流动相的流速为：0.2ml/min～1ml/min，
10、比如，所述流动相的流速可以为0.2ml/min、0.3ml/min、0.4ml/min、0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min和1.0ml/min；
11、优选为0.5～1.0ml/min；更优选为0.5ml/min。
12、进一步的，所述色谱柱的柱温为：35～40℃，包括不限于：35℃、36℃、37℃、38℃、39℃和40℃。
13、优选柱温为40℃。
14、进一步的，所述液相色谱法的进样量为：1～25μl，包括不限于2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、11μl、12μl、13μl、14μl、15μl、16μl、17μl、18μl、19μl、20μl、21μl、22μl、23μl、24μl或25μl。
15、优选进样量为2～10μl，更优选进样量为5μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的检测方法，其特征在于，将马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯溶解，采用液相色谱法进行检测，所述液相色谱法采用以金刚烷为键合相的色谱柱；所述液相色谱法流动相A相为：三氟乙酸-水，三氟乙酸与水的体积比为(0.1～0.3):100；所述液相色谱法流动相B相为：三氟乙酸-乙腈，三氟乙酸与乙腈的体积比为(0.1～0.3):100。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A相为：三氟乙酸-水，三氟乙酸与水的体积比为0.1:100；所述流动相B相为：三氟乙酸-乙腈，三氟乙酸与乙腈的体积比为0.1:100。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为：0.2mL/min～1mL/min，优选为0.5～1.0mL/min；更优选为0.5mL/min。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为：35～40℃，优选柱温为40℃。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，液相色谱法的进样量为：1～25μL，优选进样量为2～10μL，更优选
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法采用电化学喷雾检测器。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法采用高低浓度法计算马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的纯度。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法采用梯度洗脱；
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述溶解采用极性溶剂溶解马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，所述极性溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和水中的一种或多种的组合；优选的，所述极性溶剂为乙腈。
10.一种如权利要求1～9任一项所述的检测方法在马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的质量控制中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯的检测方法，其特征在于，将马来酰亚胺-二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯溶解，采用液相色谱法进行检测，所述液相色谱法采用以金刚烷为键合相的色谱柱；所述液相色谱法流动相a相为：三氟乙酸-水，三氟乙酸与水的体积比为(0.1～0.3):100；所述液相色谱法流动相b相为：三氟乙酸-乙腈，三氟乙酸与乙腈的体积比为(0.1～0.3):100。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a相为：三氟乙酸-水，三氟乙酸与水的体积比为0.1:100；所述流动相b相为：三氟乙酸-乙腈，三氟乙酸与乙腈的体积比为0.1:100。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为：0.2ml/min～1ml/min，优选为0.5～1.0ml/min；更优选为0.5ml/min。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为：3...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺娇，朱丹丹，何平，赵宣，
申请(专利权)人：天津键凯科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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