一种乳腺癌类器官培养液及制备方法和培养方法技术

本发明专利技术公开了一种乳腺癌类器官培养液及制备方法和培养方法，培养液包括以下组分：基础培养基、L

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺癌类器官培养液及制备方法和培养方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种乳腺癌类器官培养液及制备方法和培养方法。

技术介绍

[0002]类器官(Organoid)是把不同种类的细胞在体外3D条件下培养，产生的“类似”微型器官样的结构体。类器官具有广泛的用途，其中通过肿瘤患者的肿瘤组织分离得到的细胞团块，通过体外构建出肿瘤类器官后可以进行肿瘤药敏试验，用肿瘤类器官来代替患者试药，进而指导临床用药，实现肿瘤患者的个性化精准治疗。
[0003]首先，乳腺癌由几种不同分子亚型构成：Luminal A亚型(ER+/PR+,HER2
‑
)、Luminal B亚型(ER+/PR+,HER2+)、HER2阳性(ER
‑
/PR
‑
/HER2+)和三阴型(ER
‑
/PR
‑
/HER2
‑
)乳腺癌。各种亚型之间在基因组变异方面有着明显的差别，乳腺癌分型是决定患者治疗方案和预后较主要的因素。雌/孕激素受体阳性乳腺癌是最常见的一类，它占乳腺癌中大概60％～70％，患者预后要好一些，主要治疗方式是手术、化疗联合内分泌治疗。根据乳腺癌病人的分子分型制定个体化治疗方案，可以最大限度地提高治疗的安全性和有效性。因此将乳腺癌类器官应用于乳腺癌治疗药物敏感性预测，应该大限度地保持乳腺癌组织的病理分子分型特征，即雌激素受体、孕激素受体和HER2受体表达水平，才能更加准确的反映患者肿瘤组织的原始状态。
[0004]因此，如何维持乳腺癌组织的病理分子分型特征是现在急需解决的问题，即维持雌/孕激素受体和HER2受体表达水平，才能更好地反映患者真实的肿瘤耐药情况，进而更好地指导临床化疗用药。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种乳腺癌类器官培养液及制备方法和培养方法，以解决现有乳腺癌类器官培养液无法有效维持乳腺癌组织的病理分子分型特征的问题。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种乳腺癌类器官培养液，包括以下组分：基础培养基、L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺1
‑
5mM、青链双抗90
‑
110U/mL、N2添加剂0.5
‑
1％(vol/vol)、B27添加剂1
‑
2％(vol/vol)、非必需氨基酸0.06
‑
0.1mM、SB 203580 0.1
‑
0.5μM、烟酰胺3
‑
8mM、生长因子和体系稳定因子；其中生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3中的至少一种；体系稳定因子为戊酸雌二醇、Sovesudil、HEPES和A83
‑
01(AlK抑制剂)中的至少一种；各成分浓度均为终浓度。
[0007]本专利技术的有益效果为：本专利技术的培养液能使乳腺癌组织细胞在培养的过程中不但能够保持非常高的细胞和组织活性，而且通过模拟患者体内紊乱的激素环境，保存体外培养乳腺癌类器官样本时雌激素受体PR、孕激素受体ER的表达水平更好地表现其固有的病理特征。具体为：L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺，N2添加剂，B27添加剂，非必需氨基酸和烟酰胺主要是
替代血清为细胞生长提供基础的氨基酸和能量来源，以及抗氧化作用。SB 203580是P38基因抑制剂，A83
‑
01是TGF
‑
beta通路抑制剂，抑制细胞增值，人重组蛋白R
‑
Spondin 1可以持续激活WNT通路，头蛋白可以抑制BMP活性，进而维持细胞活性，表皮细胞生长因子rhEGF作为有丝分裂原进一步提高细胞活性，以上成分可以维持乳腺癌培养的基本需求。
[0008]此外，戊酸雌二醇，是一种长效雌激素制剂，用于模拟患者体内激素紊乱的环境，保存体外培养乳腺癌类器官样本时雌激素受体PR、孕激素受体ER的表达水平，由于其在培养液中具有14天以上的稳定性，因此在整个类器官培养过程中不需要额外补充。而将戊酸雌二醇替换为雌二醇后，其在培养液中仅具有2天的稳定性，因此在整个类器官培养过程中还需要额外补充雌二醇。
[0009]Sovesudil，是一种细胞耐受性良好、低毒的Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂，用以提高类器官的构建效率，抑制类器官构建过程中肿瘤干细胞的凋亡水平。
[0010]Neuregulin 3，是受体酪氨酸激酶ERBB4的特异性配体，可以调控腺体细胞的分化和增值活性，在本专利技术中，Neuregulin 3与戊酸雌二醇具有协同作用，共同维持乳腺癌类器官的分子表型的稳定性，提高乳腺癌类器官培养的成功率。
[0011]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
[0012]进一步地，乳腺癌类器官培养液，包括以下组分：基础培养基、L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺2mM、青链双抗100U/mL、N2添加剂0.5％(vol/vol)、B27添加剂1％(vol/vol)、非必需氨基酸0.09mM、SB 203580 0.3μM、烟酰胺5mM、生长因子和体系稳定因子。
[0013]进一步地，生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3或生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白和表皮细胞生长因子rhEGF。
[0014]进一步地，生长因子中人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3的终浓度分别为20
‑
40ng/mL、80
‑
120ng/mL、5
‑
10ng/mL和3
‑
6nM。
[0015]进一步地，生长因子中人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3的终浓度分别为30ng/mL、100ng/mL、8ng/mL和5nM。
[0016]进一步地，体系稳定因子为戊酸雌二醇、Sovesudil、HEPES和A83
‑
01，或体系稳定因子为戊酸雌二醇、HEPES和A83
‑
01，或体系稳定因子为Sovesudil、HEPES和A83
‑
01。
[0017]进一步地，体系稳定因子中戊酸雌二醇、Sovesudil、HEPES和A83
‑
01的终浓度分别为8
‑
12nM、8
‑
12nM、8
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌类器官培养液，其特征在于，包括以下组分：基础培养基、L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺1
‑
5mM、青链双抗90
‑
110U/mL、N2添加剂0.5
‑
1％(vol/vol)、B27添加剂1
‑
2％(vol/vol)、非必需氨基酸0.06
‑
0.1mM、SB203580 0.1
‑
0.5μM、烟酰胺3
‑
8mM、生长因子和体系稳定因子；其中生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3中的至少一种；体系稳定因子为戊酸雌二醇、Sovesudil、HEPES和A83
‑
01中的至少一种；各成分浓度均为终浓度。2.根据权利要求1所述的乳腺癌类器官培养液，其特征在于，包括以下组分：基础培养基、L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺2mM、青链双抗100U/mL、N2添加剂0.5％(vol/vol)、B27添加剂1％(vol/vol)、非必需氨基酸0.09mM、SB203580 0.3μM、烟酰胺5mM、生长因子和体系稳定因子。3.根据权利要求1或2所述的乳腺癌类器官培养液，其特征在于，生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin 3或生长因子为人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白和表皮细胞生长因子rhEGF。4.根据权利要求3所述的乳腺癌类器官培养液，其特征在于，生长因子中人重组蛋白R
‑
Spondin 1、头蛋白、表皮细胞生长因子rhEGF和Neuregulin3的终浓度分别为20
‑
40ng/mL、80
‑
120ng/mL、5
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【专利技术属性】
技术研发人员：邢华杨，游明辉，
申请(专利权)人：杭州艾名医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：