一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂、培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂、培养基及培养方法，添加剂包括以下终浓度的组分：APX

【技术实现步骤摘要】
一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂、培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及类器官培养
，具体涉及一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂、培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]恶性腹水是指发生在全身或腹腔的恶性肿瘤或癌性病变引起腹腔脏壁层腹膜发生弥漫性病变而导致体腔液体异常增多的现象。恶性腹水是肺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌及卵巢癌等癌症病患因肿瘤腹腔转移而出现的常见临床病征。
[0003]肿瘤类器官又称为“癌症替身”、“类肿瘤”等，主要是利用患者的肿瘤组织进行体外的三维培养用于模拟体内肿瘤组织的生物学特征。肿瘤类器官能在较高程度上模拟肿瘤细胞生长的微环境，保存了肿瘤细胞的异质性、组织特异性及基因突变信息，可以在体外模拟癌症的发生、发展过程，用于肿瘤发病机制研究及肿瘤药物研发。目前，对于从恶性腹水中培养肿瘤类器官的报道较少，并且参照以往肿瘤类器官培养条件，腹水来源的肿瘤类器官生长速度缓慢，产量较低。因此，研究用于培养腹水来源肿瘤类器官的培养基添加剂、培养基及培养方法具有重要意义。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂、培养基及培养方法，以解决现有腹水来源的肿瘤类器官生长速度缓慢，产量较低的问题。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂，包括以下终浓度的组分：APX
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115，0.5
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10μM；透明质酸，0.1
‑
2.5mg/mL；R
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spondin，200
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800ng/mL；Noggin，5
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200ng/mL；A83
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01，300
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800nM；Y
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27632，5
‑
15μM；HEPES，5
‑
20mM；Penicillin
‑
Streptomycin Solution，1X。
[0006]进一步地，添加剂包括以下终浓度的组分：APX
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115，5μM；透明质酸，0.5mg/mL；R
‑
spondin，500ng/mL；Noggin，150ng/mL；A83
‑
01，500nM；Y
‑
27632，10μM；HEPES，10mM；Penicillin
‑
Streptomycin Solution，1X。
[0007]一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的培养基，包括基础培养基和上述添加剂；添加剂重量占基础培养基重量的8
‑
15％；优选10％。
[0008]进一步地，基础培养基为DMEM/F12(1:1)。
[0009]采用上述培养基培养腹水来源肿瘤类器官的方法，包括以下步骤：
[0010](1)将恶性腹水离心，重悬清洗；
[0011](2)清洗完成后，收集沉淀，向沉淀中加入红细胞裂解液进行裂解，待裂解完成后，终止裂解反应并去除上清；
[0012](3)对步骤(2)所得物进行重悬，将细胞悬液与Matrigel混合，凝固后，加入上述含
有添加剂的培养基对其覆盖，然后培养，制得腹水来源的肿瘤类器官。
[0013]进一步，步骤(1)中将恶性腹水在400
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600xg条件下离心2
‑
5min，优选在500xg条件下离心3min。
[0014]进一步地，步骤(1)中采用DPBS进行重悬清洗2
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5次。
[0015]进一步地，步骤(2)中加入DPBS终止裂解反应。
[0016]进一步地，步骤(3)中于37℃，5％CO2浓度下培养。
[0017]进一步地，肿瘤类器官包括肺癌类器官、乳腺癌类器官、胰腺癌类器官、胃癌类器官、结直肠癌类器官。
[0018]本专利技术具有以下有益效果：
[0019]恶性腹水中含有大量的成纤维细胞和肿瘤细胞，在构建肿瘤细胞类器官的过程中，成纤维细胞和肿瘤细胞同时混杂生长，并且成纤维细胞通常比肿瘤细胞生长的更快，并且能抑制肿瘤细胞的生长，进而培养的肿瘤细胞类器官生长速度较慢，产量较低。
[0020]现有技术通常借助胶原酶或胰蛋白酶对成纤维细胞进行消化，但这往往会影响肿瘤细胞的增殖，并且容易使其分化成其他细胞形态。另外，通过细胞自然沉降的方式来去除成纤维细胞，往往造成肿瘤细胞的损失，影响类器官的产率和构建效率。
[0021]本专利技术提出一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂，该添加剂适配于各类肿瘤类器官培养基。NADPH氧化酶(NOX)是细胞内一种具有氧化活性的蛋白，受到刺激后会迅速磷酸化，与细胞膜上GP91等形成酶复合体，并将NADPH两个电子传递给氧分子形成超氧化物。在肿瘤中NOX是高表达的，NOX的表达水平与肿瘤的表型变化以及肿瘤的迁徙有关。APX
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115作为一种NOX抑制剂，可在NOX过表达的细胞中抑制过氧化氢的产生，从而在调节肿瘤微环境中起着比较重要的作用。另外，透明质酸钠具有良好的生物相容性和抑制成纤维细胞作用，且水溶性强，有助于腹水来源肿瘤类器官的建立。本专利技术提供的添加剂中各组分之间相互协调作用，能有效抑制成纤维细胞，刺激肿瘤类器官的生长，提高肿瘤细胞占比，进而有效的提高腹水来源肿瘤类器官的构建效率和成功率。此外，本专利技术在培养腹水来源的肿瘤类器官应用广泛，适用于多种癌种，包括肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌及结直肠癌等。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0023]图2为本专利技术实施例2中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0024]图3为本专利技术实施例3中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0025]图4为本专利技术实施例4中腹水来源构建的乳腺癌类器官形态图。
[0026]图5为本专利技术实施例5中腹水来源构建的胰腺癌类器官形态图。
[0027]图6为本专利技术对比例1中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0028]图7为本专利技术对比例2中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0029]图8为本专利技术对比例3中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0030]图9为本专利技术对比例4中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0031]图10为本专利技术对比例5中腹水来源构建的肺癌类器官形态图。
[0032]图11为实施例1和对比例1
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5中制得的类器官数量比较。
具体实施方式
[0033]以下所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0034]实施例1：<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂，其特征在于，包括以下终浓度的组分：APX
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115，0.5
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10μM；透明质酸，0.1
‑
2.5mg/mL；R
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spondin，200
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800ng/mL；Noggin，5
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200ng/mL；A83
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01，300
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800nM；Y
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27632，5
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15μM；HEPES，5
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20mM；Penicillin
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Streptomycin Solution，1X。2.根据权利要求1所述的用于培养腹水来源肿瘤类器官的添加剂，其特征在于，包括以下终浓度的组分：APX
‑
115，5μM；透明质酸，0.5mg/mL；R
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spondin，500ng/mL；Noggin，150ng/mL；A83
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01，500nM；Y
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27632，10μM；HEPES，10mM；Penicillin
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Streptomycin Solution，1X。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：游明亮，邢华杨，杨杰，蔡超杰，
申请(专利权)人：杭州艾名医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：