无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法。该无血清培养基包含水以及氨基酸、维生素、盐类、脂类、微量元素和其他添加成分。采用该无血清培养基培养2BS细胞，能突破2BS细胞传代极限、增加2BS细胞传代的代次。并且，发明专利技术人还发现，所得2BS细胞形态更好、生长密度更高、活率高。同时，本发明专利技术提供的无血清培养基配方成分明确，配方简单，低成本，低蛋白，易于配制，利于2BS细胞后续生产病毒的下游纯化，提高产品品质。本发明专利技术提供的无血清培养基，适用范围广，不仅适用于细胞工厂、微载体工艺上的无血清传代、扩增和放大，还可支持传统培养基中10％血清用量的2BS细胞在低血清或无血清条件下生产疫苗。在低血清或无血清条件下生产疫苗。在低血清或无血清条件下生产疫苗。

【技术实现步骤摘要】
无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，更具体地说，尤其涉及一种无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法。

技术介绍

[0002]2BS细胞株(人胚肺细胞、二倍体细胞)是世界卫生组织推荐的可以用于人用疫苗生产的标准人二倍体细胞株，其免疫原性好，具有良好的耐受性，无异种移植致癌性，无外源因子污染，可规模化生产多种病毒性疫苗。到目前为止，使用2BS细胞制备的疫苗已被广泛使用，如人狂犬疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、甲肝病毒疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、风疹病毒疫苗等。
[0003]传统的2BS细胞株均采用贴壁培养，贴壁培养所采用的培养基为基础培养基添加高比例血清或者人血白蛋白得到的培养液。但是，血清及人血白蛋白成分不明、价格昂贵、批次稳定性差、来源困难，并且存在可能引入外源污染的风险。而无血清培养既可以降低产品成本，又可以降低人为引入的外源污染风险，保证了终产品的质量和安全性，已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势。传统的无血清培养基例如CN 106754634 A公开的无血清培养基。
[0004]然而人们逐渐意识到，2BS细胞具有一个普遍的缺陷，采用传统的无血清培养基对2BS细胞进行培养的过程中，其生命周期及使用代次是非常有限的，这也使得该细胞资源弥足珍贵。因此，如何延长2BS细胞的生命代次，是亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]基于上述技术问题，本专利技术的目的之一是提供一种无血清培养基，采用该无血清培养基培养2BS细胞，能突破2BS细胞传代极限、增加2BS细胞传代的代次。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0007]一种无血清培养基，所述无血清培养基包含水以及如下浓度的各组分：甘氨酸2mg/L～50mg/L、丙氨酸1mg/L～20mg/L、天冬氨酸3g/L～45mg/L、天冬酰胺1mg/L～25mg/L、谷氨酸2.5mg/L～40mg/L、脯氨酸3mg/L～60mg/L、精氨酸25mg/L～200mg/L、半胱氨酸3mg/L～50mg/L、谷氨酰胺20mg/L～800mg/L、组氨酸20mg/L～600mg/L、异亮氨酸5mg/L～100mg/L、亮氨酸4mg/L～80mg/L、赖氨酸6mg/L～140mg/L、甲硫氨酸1mg/L～30mg/L、苯丙氨酸0.5mg/L～15mg/L、丝氨酸3mg/L～60mg/L、苏氨酸2mg/L～50mg/L、色氨酸5mg/L～150mg/L、酪氨酸2mg/L～50mg/L、缬氨酸4mg/L～80mg/L、维生素H0.001mg/L～0.08mg/L、VB
12
0.05mg/L～1mg/L、泛酸钙0.5mg/L～50mg/L、叶酸1mg/L～25mg/L、烟酰胺2mg/L～60mg/L、核黄素0.1mg/L～5mg/L、氯化钙3mg/L～140mg/L、硫酸镁4mg/L～88mg/L、氯化钾10mg/L～250mg/L、氯化钠100mg/L～7500mg/L、磷酸氢二钠5mg/L～100mg/L、亚油酸0.02mg/L～0.6mg/L、生育酚醋酸酯0.005mg/L～0.5mg/L、硫酸亚铁0.5mg/L～10mg/L、硫酸铜0.001mg/L～0.005mg/L、硫酸锌0.03mg/L～6mg/L、硫酸锰0.0005mg/L～0.01mg/L、氯化镍0.000001mg/L
～0.00012mg/L、碳酸氢钠2000mg/L～5000mg/L、葡萄糖1000mg/L～8000mg/L、丙酮酸钠3mg/L～70mg/L、胰岛素0.1mg/L～10mg/L、氢化可的松0.001mg/L～0.5mg/L，和成纤维细胞生长因子0.003mg/L～0.1mg/L。
[0008]在其中一个实施例中，所述无血清培养基包含水以及如下浓度的各组分：甘氨酸15mg/L～25mg/L、丙氨酸3mg/L～10mg/L、天冬氨酸30mg/L～40mg/L、天冬酰胺5mg/L～10mg/L、谷氨酸5mg/L～10mg/L、脯氨酸10mg/L～20mg/L、精氨酸120mg/L～140mg/L、半胱氨酸10mg/L～25mg/L、谷氨酰胺300mg/L～400mg/L、组氨酸35mg/L～50mg/L、异亮氨酸60mg/L～80mg/L、亮氨酸50mg/L～65mg/L、赖氨酸85mg/L～100mg/L、甲硫氨酸10mg/L～20mg/L、苯丙氨酸5mg/L～10mg/L、丝氨酸30mg/L～40mg/L、苏氨酸25mg/L～40mg/L、色氨酸8mg/L～20mg/L、酪氨酸30mg/L～40mg/L、缬氨酸50mg/L～70mg/L、维生素H0.005mg/L～0.009mg/L、VB
12 0.5mg/L～0.85mg/L、泛酸钙1mg/L～5mg/L、叶酸2mg/L～6mg/L、烟酰胺3mg/L～5mg/L、核黄素0.2mg/L～1mg/L、氯化钙110mg/L～120mg/L、硫酸镁50mg/L～65mg/L、氯化钾210mg/L～230mg/L、氯化钠6800mg/L～7100mg/L、磷酸氢二钠65mg/L～80mg/L、亚油酸0.03mg/L～0.06mg/L、生育酚醋酸酯0.006mg/L～0.009mg/L、硫酸亚铁0.7mg/L～1.5mg/L、硫酸铜0.002mg/L～0.003mg/L、硫酸锌0.3mg/L～0.8mg/L、硫酸锰0.00075mg/L～0.001mg/L、氯化镍0.0000012mg/L～0.0000015mg/L、碳酸氢钠2200mg/L～2600mg/L、葡萄糖3000mg/L～4000mg/L、丙酮酸钠50mg/L～60mg/L、胰岛素4mg/L～6mg/L、氢化可的松0.003mg/L～0.005mg/L，和成纤维细胞生长因子0.03mg/L～0.07mg/L。
[0009]在其中一个实施例中，所述无血清培养基的pH值为6.5～7.5。
[0010]如上所述的无血清培养基的制备方法，所述制备方法包括混合所述水和所述组分制备混合物的步骤。
[0011]在其中一个实施例中，所述制备方法还包括对所述混合物进行除菌的步骤。
[0012]在其中一个实施例中，除菌的方式采用过滤除菌。
[0013]在其中一个实施例中，所述制备方法还包括对所述混合物的pH值进行调节然后再对其进行除菌的步骤。
[0014]一种2BS细胞的培养方法，所述培养方法包括采用所述的无血清培养基对2BS细胞进行培养的步骤。
[0015]在其中一个实施例中，培养采用的条件包括：温度为36.5℃～37.5℃，环境湿度＞60％，环境气体包含体积浓度为4.5％～5.5％的CO2。
[0016]在其中一个实施例中，所述2BS细胞在所述无血清培养基中的接种浓度为3
×
106cells/mL～7
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106cells/mL。
[0017]与传统技术相比，本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包含水以及如下浓度的各组分：甘氨酸2mg/L～50mg/L、丙氨酸1mg/L～20mg/L、天冬氨酸3g/L～45mg/L、天冬酰胺1mg/L～25mg/L、谷氨酸2.5mg/L～40mg/L、脯氨酸3mg/L～60mg/L、精氨酸25mg/L～200mg/L、半胱氨酸3mg/L～50mg/L、谷氨酰胺20mg/L～800mg/L、组氨酸20mg/L～600mg/L、异亮氨酸5mg/L～100mg/L、亮氨酸4mg/L～80mg/L、赖氨酸6mg/L～140mg/L、甲硫氨酸1mg/L～30mg/L、苯丙氨酸0.5mg/L～15mg/L、丝氨酸3mg/L～60mg/L、苏氨酸2mg/L～50mg/L、色氨酸5mg/L～150mg/L、酪氨酸2mg/L～50mg/L、缬氨酸4mg/L～80mg/L、维生素H0.001mg/L～0.08mg/L、VB
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0.05mg/L～1mg/L、泛酸钙0.5mg/L～50mg/L、叶酸1mg/L～25mg/L、烟酰胺2mg/L～60mg/L、核黄素0.1mg/L～5mg/L、氯化钙3mg/L～140mg/L、硫酸镁4mg/L～88mg/L、氯化钾10mg/L～250mg/L、氯化钠100mg/L～7500mg/L、磷酸氢二钠5mg/L～100mg/L、亚油酸0.02mg/L～0.6mg/L、生育酚醋酸酯0.005mg/L～0.5mg/L、硫酸亚铁0.5mg/L～10mg/L、硫酸铜0.001mg/L～0.005mg/L、硫酸锌0.03mg/L～6mg/L、硫酸锰0.0005mg/L～0.01mg/L、氯化镍0.000001mg/L～0.00012mg/L、碳酸氢钠2000mg/L～5000mg/L、葡萄糖1000mg/L～8000mg/L、丙酮酸钠3mg/L～70mg/L、胰岛素0.1mg/L～10mg/L、氢化可的松0.001mg/L～0.5mg/L，和成纤维细胞生长因子0.003mg/L～0.1mg/L。2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包含水以及如下浓度的各组分：甘氨酸15mg/L～25mg/L、丙氨酸3mg/L～10mg/L、天冬氨酸30mg/L～40mg/L、天冬酰胺5mg/L～10mg/L、谷氨酸5mg/L～10mg/L、脯氨酸10mg/L～20mg/L、精氨酸120mg/L～140mg/L、半胱氨酸10mg/L～25mg/L、谷氨酰胺300mg/L～400mg/L、组氨酸35mg/L～50mg/L、异亮氨酸60mg/L～80mg/L、亮氨酸50mg/L～65mg/L、赖氨酸85mg/L～100mg/L、甲硫氨酸10mg/L～20...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书一四页附图一页，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司甘肃健顺生物科技有限公司健顺生物科技南通有限公司，
类型：发明
国别省市：