纳米抗体的纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种纳米抗体的纯化方法，包括如下步骤：将纳米抗体收获液依次进行阳离子层析和阴离子层析，收集阴离子层析洗脱液；其中，所述阴离子层析采用的洗脱液的pH为7

【技术实现步骤摘要】
纳米抗体的纯化方法


[0001]本专利技术涉及抗体纯化
，特别是涉及一种纳米抗体的纯化方法。

技术介绍

[0002]动物源性病毒感染人类的风险性极高，潜在的医源性感染性问题变得日益突出。因此，由人的、动物的组织或者体液提取的制品、动物源性单克隆抗体及真核表达的重组制品，生产工艺中一定要包含能有效地去除/灭活这些潜在病毒的工艺步骤，以确保制品的生物安全性。目前抗体的纯化工艺中，去除这些潜在病毒的主要方法之一为采用20nm孔径的纳滤膜对制品进行纳滤，如此能够有效去除制品中潜在的细小病毒。
[0003]纳米抗体(nanobodies，Nbs)因具有较小的相对分子质量，相比较传统的单克隆抗体具有独特的优势，包括免疫原性相对较弱、组织渗透性增强等，其独特的分子结构也使其适用于疾病诊断治疗等诸多领域。
[0004]但是，纳米抗体在进行纳滤的过程中可滤过载量低，如此增加了纳滤膜的需求量，同时目前商业化纳滤膜成本较高，导致纳米抗体的纯化成本较高，限制了其推广应用。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供一种能够有效提高纳滤过程中的纳滤膜可滤过载量的纳米抗体的纯化方法。
[0006]具体技术方案如下：
[0007]本专利技术提供一种纳米抗体的纯化方法，包括如下步骤：
[0008]将纳米抗体收获液依次进行阳离子层析和阴离子层析，收集阴离子层析洗脱液；其中，所述阴离子层析采用的第一洗脱液的pH为7
±
0.5，所述第一洗脱液包含：10
±/>2mM的Na2HPO4、10
±
2mM的NaH2PO4、0.01M～0.03M的精氨酸以及2mM～8mM的(NH4)2SO4。
[0009]在其中一个实施例中，所述第一洗脱液的用量为≥3倍柱体积，洗脱的保留时间≥5分钟。
[0010]在其中一个实施例中，所述阴离子层析采用的上样载量范围为＜200g/L，保留时间≥5分钟。
[0011]在其中一个实施例中，所述阴离子层析采用的色谱柱的填料为表面键合有官能团
‑
N
+
(CH3)3的亲水性聚甲基丙烯酸酯，粒径为60μm。
[0012]在其中一个实施例中，所述阴离子层析采用的色谱柱为Monomix HC60 Q。
[0013]在其中一个实施例中，所述阳离子层析包括如下步骤：
[0014](1)将所述纳米抗体收获液上样至阳离子层析柱；
[0015](2)采用淋洗液进行淋洗，所述淋洗液的pH为5
±
0.5，所述淋洗液包含：10
±
2mM的醋酸钠
‑
醋酸缓冲液以及0.1
±
0.02M的NaCl，所述淋洗液的用量≥3倍柱体积，保留时间≥5分钟；
[0016](3)采用第二洗脱液进行洗脱，所述第二洗脱液的pH为5.5
±
0.5，所述第二洗脱液
包含：10
±
2mM的醋酸钠
‑
醋酸缓冲液以及0.3
±
0.05M的NaCl，所述第二洗脱液的用量≥3倍柱体积，保留时间≥5分钟。
[0017]在其中一个实施例中，所述阳离子层析采用的上样载量范围为＜200g/L，保留时间≥5分钟。
[0018]在其中一个实施例中，所述纳米抗体的分子大小为70KD～80KD。
[0019]在其中一个实施例中，所述阴离子层析洗脱液中纳米抗体的粒径≤10nm。
[0020]在其中一个实施例中，所述阴离子层析洗脱液的纳滤膜可滤过载量为350L/m2以上。
[0021]在其中一个实施例中，所述阴离子层析结束后，还包括对所述阴离子层析洗脱液进行纳滤的步骤。
[0022]在其中一个实施例中，所述纳滤采用的纳滤膜为再生纤维素中空纤维膜。
[0023]本专利技术在研究中偶然发现，通过在阴离子层析的洗脱液中配合采用一定量的精氨酸以及(NH4)2SO4，能够使获得的洗脱液中纳米抗体的粒度维持在较小的尺寸范围，且不易聚集，进而可以有效提高后续纯化过程中的纳滤膜可滤过载量，降低纳滤的用量，节约纯化成本，便于纳米抗体制品的推广应用。
[0024]另外，上述纳米抗体的纯化方法还能够有效去除纳米抗体制品中的宿主细胞蛋白(HCP)，并在层析过程中维持纳米抗体的稳定性，减少聚集体的形成。
附图说明
[0025]图1为实施例1制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果；
[0026]图2为对比例1制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果；
[0027]图3为对比例2制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果；
[0028]图4为对比例3制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果；
[0029]图5为对比例4制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果；
[0030]图6为对比例5制备得到的阴离子层析液的纳滤膜可滤过载量测试结果。
具体实施方式
[0031]以下结合具体实施例对本专利技术的纳米抗体的纯化方法作进一步详细的说明。本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本专利技术公开内容理解更加透彻全面。
[0032]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0033]本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0034]本专利技术中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解
为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
[0035]本专利技术中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相
‑
固相混合均指质量百分比，对于液相
‑
液相混合指体积百分比。
[0036]本专利技术中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
[0037]本专利技术中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。
[0038]本专利技术中，“纳滤膜可滤过载量”是指持续过滤一定料液体积，通量衰减至初始通量的90％以下。
[0039]若无特别说明，本专利技术中涉及的溶液的溶剂均为注射用水。
[0040]本专利技术中涉及的缩写的含义如下：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米抗体的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：将纳米抗体收获液依次进行阳离子层析和阴离子层析，收集阴离子层析洗脱液；其中，所述阴离子层析采用的第一洗脱液的pH为7
±
0.5，所述第一洗脱液包含：10
±
2mM的Na2HPO4、10
±
2mM的NaH2PO4、0.01M～0.03M的精氨酸以及2mM～8mM的(NH4)2SO4。2.根据权利要求1所述的纳米抗体的纯化方法，其特征在于，所述第一洗脱液的用量为≥3倍柱体积，洗脱的保留时间≥5分钟。3.根据权利要求1所述的纳米抗体的纯化方法，其特征在于，所述阴离子层析采用的上样载量范围为＜200g/L，保留时间≥5分钟。4.根据权利要求1所述的纳米抗体的纯化方法，其特征在于，所述阴离子层析采用的色谱柱的填料为表面键合有官能团
‑
N
+
(CH3)3的亲水性聚甲基丙烯酸酯，粒径为60μm。5.根据权利要求4所述的纳米抗体的纯化方法，其特征在于，所述阴离子层析采用的色谱柱为Monomix HC60 Q。6.根据权利要求1～5任一项所述的纳米抗体的纯化方法，其特征在于，所述阳离子层析包括如下步骤：(1)将所述纳米抗体收获液上样至阳离子层析柱；(2)采用淋洗液进行淋洗，所述淋洗液的pH为5
±
0.5，所述淋洗液包含：10
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙超，仇金树，罗顺，阚子义，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司甘肃健顺生物科技有限公司健顺生物科技南通有限公司，
类型：发明
国别省市：