293细胞补料培养基及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种293细胞补料培养基及其制备和应用，所述293细胞补料培养基包含氨基酸、维生素无机盐、葡萄糖、丙酮酸钠、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷和水。相对于传统技术，本发明专利技术具备如下有益效果：本发明专利技术通过氨基酸、维生素和无机盐种类的选择，并搭配葡萄糖、丙酮酸钠、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷，形成特定配方的培养基配方，在采用生长培养基培养293细胞的过程中补加该培养基配方，能够很好地维持细胞密度增长并保持较高的细胞活率，同时维持细胞蛋白抗体浓度持续升高，同时该补料对于病毒的表达滴度亦有帮助作用。亦有帮助作用。亦有帮助作用。

【技术实现步骤摘要】
293细胞补料培养基及其制备和应用


[0001]本专利技术涉及疫苗制备
，特别涉及293细胞补料培养基及其制备和应用。

技术介绍

[0002]293细胞是腺病毒和慢病毒及载体复制和包装的重要细胞系，是用5型腺病毒75株系转化、含有Ad5 E1区的人胚肾细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，为人亚三倍体细胞系。同时，293细胞也是重组蛋白及抗体表达的重要平台。
[0003]随着悬浮培养技术愈加成熟，悬浮细胞在无血清培养基中得以放大培养，加之293细胞来源于人，且在蛋白的翻译和修饰功能方面具有独特的优势，也比较容易转染，常用于外源基因的表达，这使得293细胞在生物制药领域的用途愈加广泛。
[0004]分批补料式培养是细胞放大培养的有效方式，主要是指先将一定量的培养液装入反应器，在适宜的条件下接种细胞，进行培养，使细胞不断生长，产物不断形成，而在此过程中随着营养物质的不断消耗，不断地向系统中补充新的营养成分，使细胞进一步生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。分批补料式培养不仅避免在某种营养成分的初始浓度过高时影响细胞的生长代谢以及产物的形成，还能防止某些限制性营养成分在培养过程中被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成，是确保细胞维持增殖的有效手段。
[0005]鉴于293细胞在腺病毒和慢病毒制备等中的广泛应用，对293细胞进行放大培养是必要的，然而目前分批补料式培养还未成功应用于293细胞，适用于293细胞的补料培养基还未曾被报道。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的包括提供一种293细胞补料培养基，在采用生长培养基培养293细胞的过程中补加该培养基，能够很好地维持细胞密度增长并保持较高的细胞活率，同时维持细胞蛋白抗体浓度持续升高。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供一种293细胞补料培养基，所述293细胞补料培养基包含1312.2mg/L
‑
16780mg/L氨基酸、23.9mg/L
‑
562.6mg/L维生素、681.875mg/L
‑
11328.1mg/L无机盐、2250mg/L
‑
12000mg/L葡萄糖、100mg/L
‑
1650mg/L丙酮酸钠、4mg/L
‑
70mg/L次黄嘌呤、0.7mg/L
‑
10.89mg/L胸腺嘧啶核苷和水；其中，
[0008]所述氨基酸包含L
‑
谷氨酸、L
‑
脯氨酸、甘氨酸、L
‑
精氨酸盐酸盐、胱氨酸二盐酸盐、谷氨酰胺、L
‑
组氨酸、L
‑
异亮氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
赖氨酸盐酸盐、L
‑
甲硫氨酸、L
‑
苯丙氨酸、L
‑
丝氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸、L
‑
酪氨酸和L
‑
缬氨酸；
[0009]所述维生素包含氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、肌醇和维生素B12；
[0010]所述无机盐包含九水硝酸铁、七水氯化镁、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸铜、硫酸锌和亚硒酸钠。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述L
‑
谷氨酸的浓度为28.2mg/L
‑
200mg/L，所述L
‑
脯氨酸的浓度为80mg/L
‑
379mg/L，所述甘氨酸的浓度为60mg/L
‑
450mg/L，所述L
‑
精氨酸盐酸盐的浓度为86mg/L
‑
327mg/L，所述胱氨酸二盐酸盐的浓度为45mg/L
‑
645mg/L，所述谷氨酰胺的浓度为292mg/L
‑
3504mg/L，所述L
‑
组氨酸的浓度为84mg/L
‑
630mg/L，所述L
‑
异亮氨酸的浓度为65mg/L
‑
475mg/L，所述L
‑
亮氨酸的浓度为65mg/L
‑
1575mg/L，所述L
‑
赖氨酸盐酸盐的浓度为46mg/L
‑
2190mg/L，所述L
‑
甲硫氨酸的浓度为60mg/L
‑
450mg/L，所述L
‑
苯丙氨酸的浓度为52mg/L
‑
990mg/L，所述L
‑
丝氨酸的浓度为84mg/L
‑
330mg/L，所述L
‑
苏氨酸的浓度为67mg/L
‑
425mg/L，所述L
‑
色氨酸的浓度为32mg/L
‑
1240mg/L，所述L
‑
酪氨酸的浓度为78mg/L
‑
1560mg/L，所述L
‑
缬氨酸的浓度为88mg/L
‑
1410mg/L。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述氯化胆碱的浓度为4mg/L
‑
124.6mg/L，所述泛酸钙的浓度为1.6mg/L
‑
50mg/L，所述叶酸的浓度为2.3mg/L
‑
60mg/L，所述烟酰胺的浓度为2.8mg/L
‑
50mg/L，所述盐酸吡哆醇的浓度为1.4mg/L
‑
50mg/L，所述核黄素的浓度为0.8mg/L
‑
40mg/L，所述盐酸硫胺素的浓度为4mg/L
‑
60mg/L，所述肌醇的浓度为4.2mg/L
‑
108mg/L，所述维生素B12的浓度为2.8mg/L
‑
20mg/L。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述九水硝酸铁的浓度为0.01mg/L
‑
10mg/L，所述七水氯化镁的浓度为100mg/L
‑
3005mg/L，所述氯化钾的浓度为400mg/L
‑
6000mg/L，所述磷酸二氢钠的浓度为141mg/L
‑
1700mg/L，所述硫酸铜的浓度为0.005mg/L
‑
0.1mg/L，所述硫酸锌的浓度为0.86mg/L
‑
13mg/L，所述亚硒酸钠的浓度为40mg/L
‑
600mg/L。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述293细胞补料培养基包含120mg/L
‑
160mg/L L
‑
谷氨酸、180mg/L
‑
220mg/L L
‑
脯氨酸、135mg/L
‑
160mg/L甘氨酸、110mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种293细胞补料培养基，其特征在于，所述293细胞补料培养基包含1312.2mg/L
‑
16780mg/L氨基酸、23.9mg/L
‑
562.6mg/L维生素、681.875mg/L
‑
11328.1mg/L无机盐、2250mg/L
‑
12000mg/L葡萄糖、100mg/L
‑
1650mg/L丙酮酸钠、4mg/L
‑
70mg/L次黄嘌呤、0.7mg/L
‑
10.89mg/L胸腺嘧啶核苷和水；其中，所述氨基酸包含L
‑
谷氨酸、L
‑
脯氨酸、甘氨酸、L
‑
精氨酸盐酸盐、胱氨酸二盐酸盐、谷氨酰胺、L
‑
组氨酸、L
‑
异亮氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
赖氨酸盐酸盐、L
‑
甲硫氨酸、L
‑
苯丙氨酸、L
‑
丝氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸、L
‑
酪氨酸和L
‑
缬氨酸；所述维生素包含氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、肌醇和维生素B12；所述无机盐包含九水硝酸铁、七水氯化镁、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸铜、硫酸锌和亚硒酸钠。2.根据权利要求1所述的293细胞补料培养基，其特征在于，所述293细胞补料培养基具有如下技术特征中的一个或者多个：(1)所述L
‑
谷氨酸的浓度为28.2mg/L
‑
200mg/L，所述L
‑
脯氨酸的浓度为80mg/L
‑
379mg/L，所述甘氨酸的浓度为60mg/L
‑
450mg/L，所述L
‑
精氨酸盐酸盐的浓度为86mg/L
‑
327mg/L，所述胱氨酸二盐酸盐的浓度为45mg/L
‑
645mg/L，所述谷氨酰胺的浓度为292mg/L
‑
3504mg/L，所述L
‑
组氨酸的浓度为84mg/L
‑
630mg/L，所述L
‑
异亮氨酸的浓度为65mg/L
‑
475mg/L，所述L
‑
亮氨酸的浓度为65mg/L
‑
1575mg/L，所述L
‑
赖氨酸盐酸盐的浓度为46mg/L
‑
2190mg/L，所述L
‑
甲硫氨酸的浓度为60mg/L
‑
450mg/L，所述L
‑
苯丙氨酸的浓度为52mg/L
‑
990mg/L，所述L
‑
丝氨酸的浓度为84mg/L
‑
330mg/L，所述L
‑
苏氨酸的浓度为67mg/L
‑
425mg/L，所述L
‑
色氨酸的浓度为32mg/L
‑
1240mg/L，所述L
‑
酪氨酸的浓度为78mg/L
‑
1560mg/L，所述L
‑
缬氨酸的浓度为88mg/L
‑
1410mg/L；(2)所述氯化胆碱的浓度为4mg/L
‑
124.6mg/L，所述泛酸钙的浓度为1.6mg/L
‑
50mg/L，所述叶酸的浓度为2.3mg/L
‑
60mg/L，所述烟酰胺的浓度为2.8mg/L
‑
50mg/L，所述盐酸吡哆醇的浓度为1.4mg/L
‑
50mg/L，所述核黄素的浓度为0.8mg/L
‑
40mg/L，所述盐酸硫胺素的浓度为4mg/L
‑
60mg/L，所述肌醇的浓度为4.2mg/L
‑
108mg/L，所述维生素B12的浓度为2.8mg/L
‑
20mg/L；(3)所述九水硝酸铁的浓度为0.01mg/L
‑
10mg/L，所述七水氯化镁的浓度为100mg/L
‑
3005mg/L，所述氯化钾的浓度为400mg/L
‑
6000mg/L，所述磷酸二氢钠的浓度为141mg/L
‑
1700mg/L，所述硫酸铜的浓度为0.005mg/L
‑
0.1mg/L，所述硫酸锌的浓度为0.86mg/L
‑
13mg/L，所述亚硒酸钠的浓度为40mg/L
‑
600mg/L。3.根据权利要求1或者2所述的293细胞补料培养基，其特征在于，所述293细胞补料培养基具有如下技术特征中的一个或者多个：(1)所述293细胞补料培养基包含120mg/L

【专利技术属性】
技术研发人员：钱建宁，王嘉琪，李鹏杰，牛盛蕃，罗顺，张业炘，苏泽山，董浩然，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司上海澳斯康生物制药有限公司健顺生物科技南通有限公司甘肃健顺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：