腺病毒生产用无血清培养基及腺病毒生产方法技术

本发明专利技术涉及一种腺病毒生产用无血清培养基及腺病毒生产方法，所述培养基包含氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、PF68、透明质酸钠和水；其中，所述维生素包含氯化胆碱、泛酸钙、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素和肌醇。本发明专利技术采用盐酸吡哆醇代替叶酸和盐酸吡哆辛，与氯化胆碱、泛酸钙、烟酰胺、核黄素、盐酸硫胺素和肌醇构成维生素源，并配合PF68和透明质酸钠，与氨基酸、无机盐和葡萄糖一起构成特定培养基配方，采用该培养基配方生产腺病毒的过程中，接入的腺病毒能高效转染宿主细胞。接入的腺病毒能高效转染宿主细胞。接入的腺病毒能高效转染宿主细胞。

Serum free medium for adenovirus production and adenovirus production method

【技术实现步骤摘要】
腺病毒生产用无血清培养基及腺病毒生产方法


[0001]本专利技术涉及腺病毒疫苗
，具体涉及在腺病毒生产用无血清培养基及腺病毒生产方法。

技术介绍

[0002]腺病毒，是一种五囊膜的双股DNA病毒，可感染鸡、火鸡、鸭、鹅等禽类，目前已经定型的腺病毒种类主要包括：I类、II类和III类。预防腺病毒的禽腺病毒灭活疫苗主要经历了组织灭活疫苗、鸡胚灭活疫苗和细胞灭活疫苗。其中：组织灭活疫苗是用感染鸡的肝脏匀浆经氯仿抽提和甲醛灭活制成的疫苗，该疫苗工艺简单粗放，不能应用于大规模生产；鸡胚灭活疫苗采用SPF鸡胚接种腺病毒，收获尿囊液，灭活后制备成成品疫苗，该疫苗由于效价较低，成本较高，且鸡胚成纤维细胞灭活疫苗存在工艺复杂、成本高和效价低的问题。
[0003]目前可行的腺病毒生产方法包括采用宿主细胞(例如贴壁LMH细胞)培养腺病毒，收获病毒液，灭活后制备成成品疫苗。该生产方法包括宿主细胞的增殖培养工序以及用宿主细胞培养腺病毒的工序，后者即为腺病毒生产工序。
[0004]传统上，采用宿主细胞培养腺病毒的培养基主要为合成培养基，例如常见的DMEM培养基等，合成培养基含有细胞生长必须的氨基酸、糖、维生素、无机盐及微量成分等，且为避免未知成分对细胞培养产品的影响，合成培养基不添加动物血清，属化学界定培养基。
[0005]然而，采用传统合成培养基生产腺病毒的过程中，腺病毒感染宿主细胞的感染效率有待提升。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的包括提供一种腺病毒生产用无血清培养基，在该培养基中向宿主细胞接毒，腺病毒对宿主细胞具有较高的感染效率。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0008]在本专利技术的第一方面，提供一种腺病毒生产用无血清培养基，所述培养基包含599.3mg/L
‑
2226mg/L氨基酸、6.5mg/L
‑
49.8mg/L维生素、5550.8mg/L
‑
13845.3mg/L无机盐、2150mg/L
‑
5670mg/L葡萄糖、500mg/L
‑
2000mg/L PF68、1.2mg/L
‑
7.5mg/L透明质酸钠和水；
[0009]其中，所述维生素包含氯化胆碱、泛酸钙、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素和肌醇。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述氯化胆碱的浓度为0.9mg/L
‑
7mg/L，所述泛酸钙的浓度为0.8mg/L
‑
8.2mg/L，所述烟酰胺的浓度为1.3mg/L
‑
7.8mg/L，所述盐酸吡哆醇的浓度为0.9mg/L
‑
8.4mg/L，所述核黄素的浓度为0.2mg/L
‑
0.7mg/L，所述盐酸硫胺素的浓度为3.7mg/L
‑
10mg/L，所述肌醇的浓度为1.7mg/L
‑
12mg/L。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述氨基酸包含甘氨酸、精氨酸、L
‑
胱氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、L
‑
酪氨酸和缬氨酸中的一种或者多种。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述甘氨酸的浓度为21mg/L
‑
48.3mg/L，所述精氨酸的浓度为28.8mg/L
‑
105.8mg/L，所述L
‑
胱氨酸的浓度为18.1mg/L
‑
79.4mg/L，所述谷氨酰胺的浓度为208.8mg/L
‑
735.8mg/L，所述组氨酸的浓度为29.4mg/L
‑
52.9mg/L、所述异亮氨酸的浓度为30.5mg/L
‑
132.3mg/L、所述亮氨酸的浓度为33.5mg/L
‑
144.9mg/L、所述赖氨酸的浓度为22.2mg/L
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184mg/L、所述甲硫氨酸的浓度为21mg/L
‑
37.8mg/L，所述苯丙氨酸的浓度为26.2mg/L
‑
83.2mg/L，所述丝氨酸的浓度为29.4mg/L
‑
52.9mg/L，所述苏氨酸的浓度为46.5mg/L
‑
119.7mg/L，所述色氨酸的浓度为11.2mg/L
‑
20.2mg/L，所述L
‑
酪氨酸的浓度为32.8mg/L
‑
131mg/L，所述缬氨酸的浓度为35.8mg/L
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118.4mg/L。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述无机盐包含氯化钙、九水硝酸铁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠和一水磷酸二氢钠中的一种或者多种。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述氯化钙的浓度为184.8mg/L
‑
332.6mg/L，所述九水硝酸铁的浓度为0.1mg/L
‑
2.1mg/L，所述硫酸镁的浓度为28.4mg/L
‑
123.1mg/L，所述氯化钾的浓度为180mg/L
‑
504mg/L，所述碳酸氢钠的浓度为2590mg/L
‑
4662mg/L，所述氯化钠的浓度为2480mg/L
‑
8064mg/L，所述一水磷酸二氢钠的浓度为87.5mg/L
‑
157.5mg/L。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述培养基包含45mg/L
‑
48.3mg/L甘氨酸、100mg/L
‑
105.8mg/L、精氨酸、78.1mg/L
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79.4mg/L L
‑
胱氨酸、600mg/L
‑
735.8mg/L谷氨酰胺、49mg/L
‑
52.9mg/L组氨酸、130mg/L
‑
132.3mg/L异亮氨酸、140mg/L
‑
144.9mg/L亮氨酸、180mg/L
‑
184mg/L赖氨酸、35mg/L
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37.8mg/L甲硫氨酸、80mg/L
‑
83.2mg/L苯丙氨酸、49mg/L
‑
52.9mg/L丝氨酸、110mg/L
‑
119.7mg/L苏氨酸、19mg/L
‑
20.2mg/L色氨酸、125mg/L
‑
131mg/LL
‑
酪氨酸、110mg/L
‑
118.4mg/L缬氨酸、6.5mg/L
‑
7mg/L氯化胆碱、6mg/L
‑
7.5mg/L泛酸钙、7.3mg/L
‑
7.8mg/L烟酰胺、7m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述培养基包含599.3mg/L
‑
2226mg/L氨基酸、6.5mg/L
‑
49.8mg/L维生素、5550.8mg/L
‑
13845.3mg/L无机盐、2150mg/L
‑
5670mg/L葡萄糖、500mg/L
‑
2000mg/L PF68、1.2mg/L
‑
7.5mg/L透明质酸钠和水；其中，所述维生素包含氯化胆碱、泛酸钙、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素和肌醇。2.根据权利要求1所述的腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述氯化胆碱的浓度为0.9mg/L
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7mg/L，所述泛酸钙的浓度为0.8mg/L
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8.2mg/L，所述烟酰胺的浓度为1.3mg/L
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7.8mg/L，所述盐酸吡哆醇的浓度为0.9mg/L
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8.4mg/L，所述核黄素的浓度为0.2mg/L
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0.7mg/L，所述盐酸硫胺素的浓度为3.7mg/L
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10mg/L，所述肌醇的浓度为1.7mg/L
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12mg/L。3.根据权利要求1或者2所述的腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述氨基酸包含甘氨酸、精氨酸、L
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胱氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、L
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酪氨酸和缬氨酸中的一种或者多种。4.根据权利要求3所述的腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述甘氨酸的浓度为21mg/L
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48.3mg/L，所述精氨酸的浓度为28.8mg/L
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105.8mg/L，所述L
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胱氨酸的浓度为18.1mg/L
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79.4mg/L，所述谷氨酰胺的浓度为208.8mg/L
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735.8mg/L，所述组氨酸的浓度为29.4mg/L
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52.9mg/L、所述异亮氨酸的浓度为30.5mg/L
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132.3mg/L、所述亮氨酸的浓度为33.5mg/L
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144.9mg/L、所述赖氨酸的浓度为22.2mg/L
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184mg/L、所述甲硫氨酸的浓度为21mg/L
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37.8mg/L，所述苯丙氨酸的浓度为26.2mg/L
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83.2mg/L，所述丝氨酸的浓度为29.4mg/L
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52.9mg/L，所述苏氨酸的浓度为46.5mg/L
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119.7mg/L，所述色氨酸的浓度为11.2mg/L
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20.2mg/L，所述L
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酪氨酸的浓度为32.8mg/L
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131mg/L，所述缬氨酸的浓度为35.8mg/L
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118.4mg/L。5.根据权利要求1或者2所述的腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述无机盐包含氯化钙、九水硝酸铁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠和一水磷酸二氢钠中的一种或者多种。6.根据权利要求5所述的腺病毒生产用无血清培养基，其特征在于，所述氯化钙的浓度为184.8mg/L
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332.6mg/L，所述九水硝酸铁的浓度为0.1mg/L
‑
2.1mg/L，所述硫酸镁的浓度为28.4mg/L
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123.1mg/L，所述氯化钾的浓度为180mg/L
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【专利技术属性】
技术研发人员：牛盛蕃，王嘉琪，李鹏杰，钱建宁，罗顺，张业炘，黄玉红，谢莉莉，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司甘肃健顺生物科技有限公司健顺生物科技南通有限公司上海澳斯康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：