一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物防治技术领域，公开了一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用。青枯病菌噬菌体MulY4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20211330。噬菌体MulY4对青枯病菌具有较强的侵染活性，稳定性强，安全性好，为青枯病的防治提供了一种有效方案。青枯病的防治提供了一种有效方案。青枯病的防治提供了一种有效方案。

【技术实现步骤摘要】
一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用


[0001]本专利技术属于生物防治领域，具体地涉及一种桑树青枯病菌噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]桑树是一种落叶乔木，属蔷薇目(Urticales)、桑科(Moraceae)、桑属(Morus)、桑种(Morus alba)，广泛分布在世界各地。在我国，桑树的自然分布和人工栽培更是遍及全国各地，我国也是世界上桑树品种资源最丰富的国家。在桑树栽培过程中，极易受到青枯病的危害，危害严重。
[0003]造成植物青枯病的是一种土传的植物病原细菌，主要分布在热带、亚热带及部分暖温带地区，感染植物涉及范围广泛。通过伤口、根尖或者次生根萌发处侵入植物，定殖在根部皮层迅速繁殖，并进入维管束继续向其它组织蔓延。同时分泌果胶酶、纤维素酶等分解植物的中胶层，导致植物枯萎直至死亡。青枯病是危害最大、分布最广、造成损失最严重的植物细菌病害之一，该病害堪称“植物癌症”，一旦发病就难以控制，造成的经济损失难以估量。
[0004]对于青枯病的防治国内外已有大量的探索，提出了多种防治措施，包括化学防治、物理防治、改进农业栽培方式以及生物防治等等。如使用化学熏蒸剂和抗生素处理土壤，种植抗病品种、作物轮作和套种，利用无致病力青枯病菌菌株、芽胞杆菌、链霉菌等生防菌等等 (Yuliar et al.,2015)。虽然这些防治措施有一定效果，但是并不稳定，而且化学农药的残留对土壤和水污染严重，危害人畜健康，细菌也极易对抗生素产生耐药性，生防菌不能在土壤中稳定定殖，并且其生产、储藏和使用都有一定难度。因此，开发新型防治技术势在必行。
[0005]近年来，利用噬菌体疗法防控细菌性病害引起了研究者的广泛关注。噬菌体是一类能够侵染细菌的病毒，做为细菌的“捕食者”，可直接被用于防控病原菌。Yen等人证实噬菌体鸡尾酒疗法可抑制霍乱弧菌在小鼠和兔子体内的定殖，有效缓解该菌引起的腹泻症状(Yen etal.,2017)。近年来，利用噬菌体防治植物病原细菌的报道也越来越多，田间试验结果显示噬菌体对丁香假单胞菌、链霉菌、苛养木杆菌、解淀粉欧文氏菌和黑胫病菌等植物病原菌都有很好的防治效果 (Buttimer et al.,2017)。也发现青枯病菌噬菌体ФRSL1和PE204等可显著降低番茄青枯病的发病率(Bae et al.,2012；Fujiwara et al., 2011)，表明噬菌体疗法在防治青枯病方面具有巨大潜力。
[0006]噬菌体疗法具有其独特的优势，专一性强，对同一种细菌的不同菌株也表现出不同的感染效果，这一特性使噬菌体不会影响周边其他微生物，对微生态环境无不利影响。但是在噬菌体的应用过程中，细菌也会逐渐产生抗性，目前研究发现使用不同类型、不同宿主谱的噬菌体，制成混合噬菌体制剂(噬菌体鸡尾酒)可减少噬菌体抗性的出现，拓宽噬菌体制剂的应用范围。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种麦根腐平脐蠕孢的LAMP检测引物组，可快速检测麦根腐平脐蠕孢，灵敏度高，特异性强。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
[0009]本专利技术的一个目的在于提供一种桑树青枯病菌噬菌体，所述噬菌体为Caudovirales phage MulY4，保藏编号为CCTCC M 20211330。
[0010]本专利技术中，所述噬菌体MulY4基因组的全长为52699bp，G+C 含量为49.4％，其末端为166bp的正向重复序列。
[0011]本专利技术所述噬菌体属于Caudovirales目噬菌体。
[0012]本专利技术的另外一个目的为提供一种药物制剂，包括上述的噬菌体，以及农药学上可接受的载体。
[0013]作为优选的，本专利技术的药物制剂还包括一种或多种与上述噬菌体不同的桑树青枯病菌噬菌体。
[0014]优选的，所述噬菌体为青枯病菌裂解液的粗提物或纯化物。
[0015]更优选的，所述裂解液粗提物或纯化物经冷冻干燥、或溶于适当溶媒中。
[0016]优选的，本专利技术所述药物制剂的pH为5～9。
[0017]优选的，本专利技术所述药物制剂的保存温度在28℃以下。
[0018]本专利技术还提供了上述噬菌体，以及上述药物制剂在拮抗青枯病病原菌中的应用。
[0019]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：
[0020]本专利技术的噬菌体MulY4可侵染青枯病菌形成清亮的噬菌斑，对青枯病菌具有较强的侵染活性。噬菌体MulY4的对青枯病菌有强的裂解活性，裂解量达到189PFU/细胞。本专利技术的噬菌体MulY4易保存，在 28℃以下的中性环境中均能稳定存在。噬菌体MulY4基因组中没有毒力相关基因，安全性好。
[0021]保藏说明
[0022]噬菌体Caudovirales phage MulY4于2021年10月27日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20211330；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学。
附图说明
[0023]图1为噬菌体MulY4侵染桑青枯病菌形成的噬菌斑。
[0024]图2为噬菌体MulY4的一步生长曲线；
[0025]图3为噬菌体MulY4在不同pH条件下的稳定性；
[0026]图4为噬菌体MulY4在不同温度条件下的稳定性；
[0027]图5为噬菌体MulY4对青枯病菌En5
‑
3的抑制效果。
具体实施方式
[0028]本专利技术以桑树青枯病菌En5
‑
3为指示菌，利用噬菌斑纯化法进行噬菌体的分离，最终分离纯化到MulY4。噬菌体MulY4可侵染En5
‑
3 形成清亮的噬菌斑(图1)，说明其具有较强的侵染活性。
[0029]目前，该噬菌体已经在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号： CCTCC M 20211330；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学；保藏日期：2021年10月27日，分类命名为Caudovirales phageMulY4。
[0030]本专利技术的噬菌体MulY4对宿主细菌具有很强的裂解活性，在 28℃以下的中性环境中均能稳定存在。
[0031]噬菌体MulY4基因组全长52699bp，G+C含量为49.4％，其末端为166bp的正向重复序列，属于Caudovirales目噬菌体。噬菌体 MulY4基因组中没有毒力相关基因，应用安全性好。
[0032]根据本专利技术的又一个方面，提供一种包含如上述的噬菌体及其农药上可接受载体的药物制剂。
[0033]本专利技术的药物制剂可以根据本领域技术人员熟知的方法生产和/ 或是可商业获得。药物制剂可以为溶液剂、分散剂、悬浮剂、颗粒剂等形式。使用方式可以为喷施、撒施、沟施或随水灌溉施用。
[0034]在一个实施方案中，本专利技术的药物制剂还包括与本专利技术上述噬菌体不同的桑树青枯病菌噬菌体，不同噬菌体之间的复配使用，扩大噬菌体的宿主谱，提高对青枯病菌的防治效果，延缓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种桑树青枯病菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为CaudoviralesphageMulY4，保藏编号为CCTCCM20211330。2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体MulY4基因组的全长为52699bp，G+C含量为49.4％，其末端为166bp的正向重复序列。3.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体属于Caudovirales目噬菌体。4.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述的噬菌体，以及可接受的载体。5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，还包括一种或多种...

【专利技术属性】
技术研发人员：董朝霞，于翠，朱志贤，莫荣利，张成，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：