本发明专利技术公开了一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用，该噬菌体被命名为PRE03，已于2022年01月07日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.45074。本发明专利技术还提供一种噬菌体组合物，包括如上所述的杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03。该噬菌体不仅具有强的感染能力和裂解能力，而且热稳定性和酸碱稳定性高，是一种可高效杀灭杀鱼爱德华氏菌的噬菌体，其使用安全，应用范围广；所述噬菌体及其噬菌体组合物可有效用于防治因杀鱼爱德华氏菌造成的感染，可广泛用于水产养殖过程中的容易因感染杀鱼爱德华氏菌造成损失的各个环节、养殖环境的日常消毒、以及水产生鲜食品的抑菌等方面。以及水产生鲜食品的抑菌等方面。以及水产生鲜食品的抑菌等方面。
【技术实现步骤摘要】
一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用
[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用。
技术介绍
[0002]杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、爱德华氏菌属(Edwardsiella)，为革兰氏阴性菌，短杆状，具有运动性。杀鱼爱德华氏菌宿主范围多为海水和淡水鱼类，包括尖吻鲈、欧洲鳗鲡、真鲷、大菱鲆、大口黑鲈和黑斑刺魟等。杀鱼爱德华氏菌可引起爱德华氏菌病，该病分布广泛，鱼类感染后可引起大范围的皮肤病变、腹部坏死性肿胀、内脏囊肿和出血性败血症等。爱德华氏菌病病原菌的爆发已经给美国、欧洲、亚洲(包括日本、中国等)国家带来了严重的社会和经济损失。
[0003]目前，现有方法主要是采用传统的抗生素类药物来防治水产品中由杀鱼爱德华氏菌感染引发的各类疾病，而抗生素的过度使用不仅容易导致耐药病原菌的产生，并且也会对水体及水产品造成污染，因此，需要寻找更安全有效的抗生素替代物。
[0004]而噬菌体(Bacteriophage或Phage)是感染细菌、真菌的病毒，在自然界中分布十分广泛，凡是细菌存在之处几乎都有相应的噬菌体。噬菌体具有专一性强、无残留、无毒害的特点，具有宿主依赖性，会随宿主的清除而消亡，不会残留在动物体内。因此，噬菌体在解决细菌感染药物研究上具备巨大的潜力和优势。
[0005]但是，目前还未发现特异裂解杀鱼爱德华氏菌的噬菌体资源，现有技术还有待进一步发展。
[0006]因此，现有技术有待进一步改进。
技术实现思路
[0007]针对上述问题，本专利技术提供了一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用。该杀鱼爱德华氏菌噬菌体可高效且特异地裂解裂解杀鱼爱德华氏菌，且裂解谱宽，稳定性高，不仅可利用该噬菌体制备预防和治疗杀鱼爱德华氏菌感染的疾病的药物，还可用于用于制备水产饲料添加剂、消毒剂及试剂盒、水产品抑菌剂等；其还具有使用安全、无副作用的优点，是一种很有前景的抗生素替代物，可用于解决因杀鱼爱德华氏菌造成的感染、以及与水体中杀鱼爱德华氏菌大量增殖引起的水体问题。
[0008]为解决上述问题，本专利技术提供的具体方案如下：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03，该噬菌体是分离自山东省青岛市某海鲜市场采的污水。该噬菌体已于2022年01月07日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.45074。
[0010]电镜下观测到，该噬菌体具有如下特征：其头部长为58nm，头宽为63nm，尾长为
8nm，根据国际病毒分类委员会(The International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)第九次报告的分类标准鉴定，可确定该噬菌体属于短尾噬菌体科，将其命名为PRE03。
[0011]噬菌体在固体培养基上可以形成较大空斑，边缘清晰规则，直径为0.5～1mm。液体培养噬菌体时，菌液接入噬菌体7～9h后混合液变澄清，出现细胞碎片沉淀，即可判定为该噬菌体增殖完成。
[0012]该噬菌体对杀鱼爱德华氏菌具有优异的裂解性能，经过实验证明，其对杀鱼爱德华氏菌的裂解率达到84.71％，说明该噬菌体的裂解谱宽，应用范围广，这说明其在杀灭环境中杀鱼爱德华氏菌以及防治杀鱼爱德华氏菌方面具有很好的应用前景。
[0013]该噬菌体在30℃～60℃温度范围内1h处理能保证效价不变，具有较好的温度稳定性。同时，该噬菌体在pH＝4～12条件下处理3h后仍能够保持自身稳定性，耐酸碱性能好，能适应较为苛刻的酸碱环境，基于其上述优异的生物学特性，其适应范围广。
[0014]本申请中，噬菌体PRE03包括进行点突变或缺失突变或添加突变的同源性高于98％或99％且保持基本相同的杀菌活性的突变株。由于噬菌体在复制过程中非常容易发生突变，上述噬菌体的突变体也在本申请请求保护的范围内。噬菌体PRE03的序列可根据本专利技术保藏的生物材料通过公知的方法测序得到。对于本领域技术人员来说，根据本专利技术提供的噬菌体筛选出与其性状相似的突变体并不需要付出创造性的劳动。
[0015]第二方面，本专利技术还提供一种噬菌体组合物，包括如上所述的杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03。
[0016]优选地，在实际应用中，为进一步拓宽噬菌体制剂的裂解谱，充分发挥不同噬菌体的裂解谱差异，进行优势互补，可将上述杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03与其他噬菌体进行组合使用，如与其他杀鱼爱德华氏菌噬菌体组合用于扩大对杀鱼爱德华氏菌的裂解谱；此外，也可将噬菌体PRE03与其他不同种类的噬菌体(抑制引发同类疾病的不同病原菌)配合，提高对同一类疾病的防治效果。
[0017]第三方面，本专利技术提供一种噬菌体制剂，其有效成分包括上述杀鱼爱德华氏菌噬菌体或上述噬菌体组合物。
[0018]优选地，所述噬菌体制剂中，杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03的剂量不低于104PFU/mL。
[0019]上述噬菌体制剂可以以本专利技术的杀鱼爱德华氏菌噬菌体PRE03作为唯一活性成分，或以该噬菌体与其他杀鱼爱德华氏菌噬菌体进行复配后的噬菌体组合物作为活性成分。
[0020]可选地，上述噬菌体制剂的剂型可以被制备为各种使用形式，其剂型为溶液剂、乳剂、混悬剂、粉剂、凝胶剂、颗粒剂或冻干剂，通过浸浴、注射或口服等方式用于防治杀鱼爱德华氏菌。
[0021]优选地，上述噬菌体制剂的剂型为溶液剂。溶液剂通过浸浴给药是将噬菌体制剂直接投放于水产养殖水体中进行给药的方式，操作简单且效果好。
[0022]可选地，所述噬菌体制剂中还包含药学上可接受的载体。本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指不对生物体造成显著刺激且不消除所给予的活性组分的生物活性和特性的载体或稀释剂。为了将所述药物组合物配制成液体制剂，药学上可接受的载体必须适
于无菌和生物相容性。实例包括盐水、无菌水、Ringer
’
s溶液、缓冲生理盐水、白蛋白输注液、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。它们可以单独使用或以其任意组合使用。如果需要，可以加入其它常规添加剂，例如，抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂等。当与稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂组合时，还可以将本专利技术的组合物制备成注射剂(例如，水性溶液、悬浮液和乳液)、丸剂、胶囊、粒剂或片剂。
[0023]第四方面，本申请还提供了上述杀鱼爱德华氏菌噬菌体、上述噬菌体组合物在制备以下至少一项产品中的应用：
[0024](1)杀灭或抑制杀鱼爱德华氏菌的产品(如杀菌剂、抑菌剂、消毒剂这类产品)；
[0025](2)预防和/或治疗杀鱼爱德华氏菌所引发水产疾病的产品；
[0026](3)预防和/或治疗杀鱼爱德华氏菌引起的炎症反应的产品。
[0027]其中，术语“预防”是指包括通过给予所本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株杀鱼爱德华氏菌噬菌体(Edwardsiella piscicida phage)，其特征在于，被命名为PRE03，其保藏编号为CGMCC No.45074。2.一种噬菌体组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的杀鱼爱德华氏菌噬菌体。3.一种噬菌体药物制剂，其特征在于，其有效成分包括如权利要求1所述的杀鱼爱德华氏菌噬菌体或如权利要求2所述的噬菌体组合物。4.如权利要求1所述的杀鱼爱德华氏菌噬菌体、如权利要求2所述的噬菌体组合物在制备以下至少一项产品中的应用：(1)杀灭或抑制杀鱼爱德华氏菌的产品；(2)预防和/或治疗杀鱼爱德华氏菌所引发水产疾病的产品；(3)预防和/或治疗杀鱼爱德华氏菌引起的炎症反应的产品。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述杀鱼爱德华氏菌所引发水产疾病包括水产的消化道类疾病；优选地，所述消化道...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘强，任慧英，孙虎芝，谢金红，侯文秋，马雪妮，徐帆，
申请(专利权)人：青岛诺安百特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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