一株沙门氏菌噬菌体SP8、噬菌体组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株沙门氏菌噬菌体SP8、噬菌体组合物及其应用，所述噬菌体被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2022年8月12日，保藏编号为CGMCC No.45256；该烈性宽裂解谱的噬菌体SP8可耐受胃酸，并可在肠道中长时间持续停留，可以有效防控禽类经肠道的沙门氏菌感染。SP8噬菌体可被制备成防治沙门氏菌病的药物、环境消毒剂、饲料和水添加剂以及检测试剂盒等进行应用，此外，该噬菌体耐高温、耐酸碱，易于进行工业化生产，可进行多种剂型开发，由噬菌体制备而的药物或消毒剂还具有安全绿色环保的优点。物或消毒剂还具有安全绿色环保的优点。物或消毒剂还具有安全绿色环保的优点。

【技术实现步骤摘要】
一株沙门氏菌噬菌体SP8、噬菌体组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一株沙门氏菌噬菌体SP8、噬菌体组合物及其应用。

技术介绍

[0002]沙门氏菌属中有人类致病菌、兽类致病菌以及人兽致病菌。由沙门氏菌造成的感染，机体常出现肠炎型(腹泻、呕吐等症状)、急性败血症症状、伤寒型(胃肠炎，甚至出血)以及大量炎性细胞浸润，严重可造成死亡。据报道，在我国由沙门氏菌引起食物中毒占比70％
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80％，主要原因是动物食品感染沙门氏菌引起。可见，有效的防控沙门氏菌感染对养殖业的健康发展和维护食品安全具有重要的公共卫生学意义。
[0003]沙门氏菌病发病无季节性，全年均可发病，极易感染3周龄以内的家禽，有较高的发病率和死亡率，成年家禽发病临床症状不明显，发病率低，多为隐性带菌感染者，机体不能将沙门氏菌完全清除，细菌仍能存在于特定宿主细胞内，但宿主不表现明显临床症状，但体内长期带菌。鸡白痢沙门菌的垂直传播特性还得益于其对蛋清中多种抑菌成分具有强大的耐受能力。沙门氏菌感染可造成肉鸡生长受阻，蛋鸡繁殖力降低，产蛋量和蛋壳品质下降，严重造成鸡死亡，造成经济损失，甚至影响公共卫生安全。
[0004]目前对沙门氏菌感染的防控主要是以抗菌药物为主，但因抗菌药物使用不合理或者盲目滥用导致耐药性沙门氏菌的出现，甚至出现严重的多重耐药性问题，导致治疗效果差，动物死亡，养殖成本上升，给养殖业带来严重的经济损失。因此，沙门氏菌的多重耐药问题已成为养殖业甚至人类面临的重大挑战，亟需开发一种绿色、新型的生物制剂来解决此问题。
[0005]噬菌体广泛存在于自然界中，数量庞大，在地球上噬菌体约有10
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个。噬菌体可以寄生在细菌等各种宿主体内，利用宿主细菌各种物质进行生长繁殖，合成子代噬菌体，子代噬菌体达到一定数量后导致宿主细菌裂解死亡，并释放出大量子代噬菌体。由于噬菌体具有高度特异性，因此噬菌体作为抗生素替代品，其裂解能力不受耐药性细菌的影响，且不会杀害有益菌，此外，噬菌体是从自然界中分离得到，属于一种天然生物制剂，成本低廉，筛选周期短，安全性较高。因此，目前噬菌体作为一种更为安全的抗菌生物制剂被逐渐应用于各领域。
[0006]目前虽已有沙门氏菌噬菌体被公开，但是，现有的沙门氏菌噬菌体对胃酸环境(胃部的酸性环境以及胃蛋白酶)耐受度较差，在肠胃中保留时间较短，影响其有效作用时间和效果，因此，目前技术还有待进一步改进。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本专利技术提供了一株新的沙门氏菌噬菌体SP8、包含该噬菌体的噬菌体组合物及其应用，上述噬菌体SP8耐受胃酸能力强，可持续在肠道中停留，具备安全绿色环保的优点，可被用于制备治疗或预防鸡沙门氏菌感染的疾病的药物、饲料添加剂、环境消
毒剂以及试剂盒进行应用。
[0008]为了解决上述问题，本专利技术的技术方案具体如下：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一株自山东某鸡场的羽毛中分离得到的具有广谱强裂解性的沙门氏菌噬菌体，该噬菌体被命名为SP8，被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2022年8月12日，保藏编号为CGMCC No.45256，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0010]该沙门氏菌噬菌体具有呈多面体的头部结构和无收缩性的尾部，头部宽53
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60nm，头部长60
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67nm，尾部长约113
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120nm，根据病毒分类国际委员会(ICTV)的分类方法，本申请的噬菌体形态符合长尾噬菌体科的特征，属于长尾噬菌体，将该噬菌体命名为vB
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SenS
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SP8(简称SP8)。
[0011]该噬菌体SP8具有较强的耐热性，在60℃以内作用60min后依然保持原活性；80℃作用20min，噬菌体仍含有8.5
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105PFU/mL较高效价；该噬菌体在pH 5.0～11.0范围内其活性较稳定，在pH 3.0时作用3h，效价在107PFU/mL，在pH 12时作用3h效价在104PFU/mL，这说明该噬菌体在较宽的pH范围内具有较强稳定性。
[0012]该噬菌体SP8是一株宽裂解谱、强裂解性能的噬菌体，对实验室保存的72株不同来源沙门氏菌的总裂解率为90.28％，对于不同来源的沙门氏菌，其对鸡源沙门氏菌的达到91.43％，对15株鸽源沙门氏菌的裂解率为93.33％；对食品源的沙门氏菌裂解率略低。
[0013]更为重要的是，噬菌体SP8对胃液中的耐受力较强，可用于饮水或饲料添加途径并保持经过胃肠后保持较高噬菌体活性，更有效的阻断经口途径感染沙门氏菌以及减少沙门氏菌在肠道的定植。使用SP8时模拟胃酸中的耐受实验结果证明，该噬菌体人工胃液中作用2h后，其效价还维持在6.04
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108PFU/mL，噬菌体存活率为60.40％，而其他噬菌体(SP4、SPP11、SP12、SP6、SP10)在人工胃液中作用2h后存活率基本都低至0。同时，该沙门氏菌噬菌体SP8在肠道中停留较长时间。
[0014]基于上述特点，噬菌体SP8作为一株新的具有应用前景的微生物，可作为抗生素替代品进行病原菌防治方面的应用。
[0015]本申请中，噬菌体SP8包括进行点突变或缺失突变或添加突变的同源性高于98％或99％且保持基本相同的杀菌活性的突变株。由于噬菌体在复制过程中非常容易发生突变，上述噬菌体的突变体也在本申请请求保护的范围内。噬菌体SP8的序列可根据本专利技术保藏的生物材料通过公知的方法测序得到。对于本领域技术人员来说，根据本专利技术提供的噬菌体筛选出与其性状极度相似的突变体并不需要付出创造性的劳动。
[0016]第二方面，本专利技术还提供一种噬菌体组合物，其包括前述的沙门氏菌噬菌体SP8和其他噬菌体。在实际应用中，为了进一步拓宽噬菌体制剂的裂解谱，充分发挥不同噬菌体的裂解谱的差异，进行优势互补，可将上述鸽源沙门氏菌噬菌体SP8和其他噬菌体进行组合使用。
[0017]可选地，所述噬菌体组合物包括噬菌体SP8以及噬菌体SP4(具体见公告号为CN108359644B)和噬菌体SPP11(具体见公告号为CN 111254121 B)中的一种或两种。通过噬菌体的组合使用，扩宽裂解谱，杀灭鸡场环境中不同类型的沙门氏菌，用于更好的防治沙门氏菌病。
[0018]其中，噬菌体SPP11，被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中
心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18868。具体信息见公告号为CN 111254121 B的专利。
[0019]噬菌体SP4，保藏号为CGMCC No.14332，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2017年7月27日，具体信息见公告号为CN 108359644 B的专利。
[0020]此外，也可将上述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种沙门氏菌噬菌体SP8，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No.45256。2.一种噬菌体组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SP8和其他噬菌体。3.根据权利要求2所述的噬菌体组合物，其特征在于，所述其他噬菌体包括：噬菌体SP4、噬菌体SPP11中的一种或两种；其中，噬菌体SP4的保藏编号为：CGMCC No.14332；噬菌体SPP11的保藏编号为CGMCC No.18868。4.如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SP8或如权利要求2或3所述的噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染导致的疾病的药物、饲料添加剂、环境消毒剂、食品保鲜剂和检测试剂盒中的应用。5.一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SP8或如权利要求2或3所述的噬菌体组合物；优选的，所述噬菌体药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：张召佐，孙虎芝，刘广芹，王翠，
申请(专利权)人：青岛诺安百特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：