适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途制造技术

本发明专利技术提供了适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途，其中包含适应vero细胞的肠道病毒D68的疫苗，在适应之前在基本上不含血清的培养基中培养所述vero细胞。本发明专利技术还公开了在受试者中诱导针对肠道病毒D68感染的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的所述疫苗。述受试者给药有效量的所述疫苗。

【技术实现步骤摘要】
适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途


[0001]本专利技术涉及肠道病毒
，具体而言，涉及适应vero细胞的肠道病毒D68、肠道病毒D68疫苗及其用途。

技术介绍

[0002]肠道病毒D68(EV
‑
D68)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属的单链正义RNA病毒。EV
‑
D68于1962年于加利福尼亚首次分离自四例肺炎及细支气管炎的住院儿科患者，并且其直到2000年代早期为止仍为罕见报导的感染(M.Vogt等人，Current Understanding of Humoral Immunity to Enterovirus D68,JPIDS 2018:7(增刊2)s49
‑
s53)。此后，EV
‑
D68已经因在全球爆发而被认为是日益重要的病原体。越来越多的证据表明，它可引起急性弛缓性脊髓炎(AFM)，一种脊髓灰质炎样神经肌肉无力综合征)的爆发，与EV
‑
D68呼吸系统疾病爆发同时发生。
[0003]EV
‑
D68的治疗主要是支持性护理，因为没有许可的疫苗或治疗药物来预防或治疗EV
‑
D68感染或AFM疾病。
[0004]Vero细胞系是监管机构(例如世界卫生组织)最广泛认可的用于生产人用病毒疫苗的连续细胞系之一。然而，W.Wei等人(ICAM
‑
5/Telencephalin Is a Functional Entry Receptor for Enterovirus D68,Cell Host Microbe.2016年11月9日；20(5):631
‑
641)和J Sun等人(Current Understanding of Human Enterovirus D68,Viruses 2019,11(6),490)进行的研究报告，vero细胞不允许EV
‑
D68感染，除非ICAM5在EV
‑
D68不允许的vero细胞中外源性表达。动物血清(诸如牛血清白蛋白)用于病毒培养和疫苗生产的用途具有许多缺点，包括暴露于不利因素，诸如内毒素、支原体、病毒污染物或FBS中的朊病毒蛋白(G.Gstranthuler等人，A plea to reduce or replace fetal bovine serum in cell culture media,cytotechnology.2013年10月；65(5):791
‑
793)并且可能引起疫苗超敏反应，尤其是对牛肉或牛乳过敏的超敏反应(R.de Silva等人，Sensitization to bovine serum albumin as a possible cause of allergic reactions to vaccines,Vaccine，2017年3月13日；35(11):1494
‑
1500)。
[0005]对EV
‑
D68感染进行安全和有效的预防远未满足需求。本专利技术提供EV
‑
D68疫苗以满足这些和其它需要。

技术实现思路

[0006]在一个实施方案中，提供了适应vero细胞的肠道病毒D68(EV
‑
D68)，其与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3具有95％
‑
100％同一性的氨基酸序列。
[0007]在另一实施方案中，提供了适应vero细胞的肠道病毒D68(EV
‑
D68)，所述EV
‑
D68具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列且具有至少一个氨基酸取代：
[0008](a)氨基酸残基730被丝氨酸取代(G730S)；
[0009](b)氨基酸残基1028被丙氨酸取代(T1028A)；
[0010](c)氨基酸残基1171被丙氨酸取代(E1171A)；
[0011](d)氨基酸残基1178被赖氨酸取代(E1178K)；
[0012](e)氨基酸残基1365被丝氨酸取代(N1365S)；
[0013](f)氨基酸残基1822被苏氨酸取代(I1822T)；以及
[0014](g)氨基酸残基2179被甘氨酸取代(S2179G)。
[0015]本专利技术还公开了包含本文公开的适应vero细胞的EV
‑
D68的疫苗和包含本文公开的疫苗的药物组合物。
[0016]本专利技术涉及生产本文所述的适应vero细胞的EV
‑
D68的方法。
[0017]本专利技术还涉及通过给药有效量的本文所述疫苗在受试者中诱导针对EV
‑
D68感染的免疫应答的方法。
[0018]在本专利中使用的术语“专利技术”、“本专利技术(this invention)”和“本专利技术(the present invention)”意图广泛地指本专利和以下专利权利要求的所有主题。包含这些术语的陈述不应被理解为限制本文所述的主题或限制以下专利权利要求的含义或范围。本专利所覆盖的本专利技术的实施方案由所附权利要求书而非本
技术实现思路
来限定。本
技术实现思路
是对本专利技术各方面的高度概括，并介绍了在以下具体实施方式部分中将进一步描述的一些概念。本
技术实现思路
并非意图在标识所要求保护的主题的关键或必要特征，也并非意图单独用于确定所要求保护的主题的范围。通过参考整个说明书的适当部分以及每个权利要求，应该理解本主题。
具体实施方式
[0019]下面对本申请实施例中的技术方案进行清楚、详尽地描述。
[0020]本申请实施例中，术语“一个”和“一种”(“a”和“an”)是指一个或多于一个(即，至少一个)该冠词的语法对象。
[0021]术语“受试者”可指怀疑患有EV
‑
D68感染或处于患EV
‑
D68感染风险中的脊椎动物。受试者包括温血动物，诸如哺乳动物，例如灵长类，更优选是人。非人灵长类动物也是受试者。术语受试者包括驯养的动物(诸如猫、狗等)、家畜(例如：牛、马、猪、绵羊、山羊等)和实验室动物(例如：小鼠、兔、大鼠、沙鼠、豚鼠等)。
[0022]本申请实施例中，“有效量”指足以引发针对EV
‑
D68感染的免疫应答或中和抗体的疫苗或药物组合物的剂量。术语“有效量”和“治疗有效量”可互换使用。
[0023]本申请实施例中，“基本上不含”是指培养基或组合物含有少于5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的特定物质，例如动物血清。在一些实施方案中，培养基或组合物不含特定物质。
[0024]本申请实施例中，所有数字可以理解为由“约”修饰。
[0025]本申请实施例中，术语“约”意指包括
±
10％的变化。
[0026]本专利技术提供了包含本文所述的适应vero细胞的EV
‑
D68的疫苗。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适应vero细胞的肠道病毒D68，其特征在于，所述肠道病毒D68与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3具有95％
‑
100％同一性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的适应vero细胞的肠道病毒D68，其特征在于，所述肠道病毒D68具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的适应vero细胞的肠道病毒D68，其特征在于，所述肠道病毒D68具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。4.一种适应vero细胞的肠道病毒D68，其特征在于，所述肠道病毒D68具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列和至少一个氨基酸取代，所述氨基酸取代选自由以下组成的组：(a)氨基酸残基730被丝氨酸取代；(b)氨基酸残基1028被丙氨酸取代；(c)氨基酸残基1171被丙氨酸取代；(d)氨基酸残基1178被赖氨酸取代；(e)氨基酸残基1365被丝氨酸取代；(f)氨基酸残基1822被苏氨酸取代；以及(g)氨基酸残基2179被甘氨酸取代。5.一种疫苗，其特征在于，包含如权利要求1
‑
4中任一项所述的适应vero细胞的肠道病毒D68。6.如权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述适应vero细胞的肠道病毒D68是无活性的。7.如权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述适应vero细胞的肠道病毒D68具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。8.如权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述适应vero细胞的肠道病毒D68具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列和至少一个氨基酸取代，所述氨基酸取代选自由以下组成的组：(a)氨基酸残基730被丝氨酸取代；(b)氨基酸残基1028被...

【专利技术属性】
技术研发人员：黃立民，廖怡珍，
申请(专利权)人：景均股份有限公司，
类型：发明
国别省市：