一株不具转导耐药基因能力的沙门菌噬菌体CKT1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株不具转导耐药基因能力的沙门菌噬菌体CKT1及其应用，该烈性噬菌体CKT1已于2022年1月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCCM2022110。本发明专利技术分离到的沙门菌噬菌体CKT1对不同来源的鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及肠炎沙门菌等D群沙门菌均具有裂解活性，潜伏期短，子代噬菌体爆发量高，抗噬菌体突变率低，基因组上不携带毒力基因与耐药基因，不具转导能力，不会造成耐药基因的传播，是一种安全、高效、特异性强的烈性噬菌体，不会破坏雏鸡肠道菌群。该噬菌体制剂可成为一种新型环保的净化种鸡场鸡白痢沙门菌的辅助手段，也是预防和治疗鸡群鸡白痢或鸡伤寒沙门菌感染的替代策略。或鸡伤寒沙门菌感染的替代策略。或鸡伤寒沙门菌感染的替代策略。

【技术实现步骤摘要】
一株不具转导耐药基因能力的沙门菌噬菌体CKT1及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一株不具转导耐药基因能力的沙门菌噬菌体 CKT1及其应用。

技术介绍

[0002]沙门菌属于肠杆菌科，是食源性疾病中重要的病原菌，据统计，我国大约70～80％的食源性疾病由沙门菌感染引起。在我国，主要流行的D群沙门菌包括可引起人畜共感染的肠炎沙门菌和雏鸡高死亡率的鸡白痢沙门菌，它们是养殖业特别是禽类养殖中造成损失的重要因素。已知禽类是沙门菌最主要的宿主，其中鸡白痢沙门菌不但在群体间水平传播，还能垂直传播给下一代，给雏鸡造成极高的死亡率，严重降低生长性能；成年鸡感染后虽无明显症状，但却可以在动物和环境中广泛传播，给养殖业带来巨大经济损失。目前多数发达国家已完成鸡白痢沙门菌的净化工作，而发展中国家因养殖期间隐形感染鸡的存在，而无法完全消除沙门菌。此外，蛋、蛋制品及家禽副产品可通过食物链间接对人类健康造成危害。为了保障家禽养殖健康和蛋品、肉品安全，沙门菌病被国家中长期动物疫病防治规划(2012
‑
2020)列为优先防控疫病。当前，种鸡场鸡白痢沙门菌的净化主要通过血清学检测不断剔除阳性感染的鸡只，以及加强饲养管理，但存在效果差、成本高昂等缺点。此外，细菌耐药性正在不断增强，而现阶段减抗的推进，都使得研发新型抗菌药物成为当前亟待解决的重要问题。
[0003]噬菌体(bacteriophage)是感染细菌、真菌、藻类、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。噬菌体是由核酸和蛋白质构成，蛋白质起着保护核酸的作用，并决定噬菌体的形态和表面特征。已知噬菌体必须利用宿主进行增殖并最终裂解宿主释放子代噬菌体。目前，噬菌体制剂作为一种新型抗菌药物正在不断被接纳，其在美国等多个国家已成为合法药物，其杀菌作用显著。但有些噬菌体基因组中含有耐药基因和编码毒力因子的基因；还有些噬菌体可将宿主菌的毒力基因与耐药基因通过噬菌体转导转移给其他细菌中，从而造成传播耐药基因与毒力基因的风险。当前国内噬菌体产品中的噬菌体菌株特性不一、效果不同，对噬菌体能否转导耐药基因与毒力基因进行评估的研究也很少。此外，致病菌的噬菌体制备必须通过宿主菌来增殖，因此宿主菌的毒力与安全性需要深入评估。因此，对筛选的噬菌体及噬菌体制剂进行安全性评估是噬菌体能否推广应用的关键。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术的不足，专利技术人经长期的技术与实践探索，从养殖场周边污水样品中分离得到一株不具转导耐药基因能力的烈性沙门菌噬菌体CKT1。该烈性噬菌体CKT1 对不同来源的鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及肠炎沙门菌等D群沙门菌均具有裂解活性，潜伏期短，子代噬菌体爆发量高，抗噬菌体突变率低，不携带毒力基因与耐药基因，不会转导耐药基因至其他细菌中，可保护雏鸡肠道菌群健康，是一种安全、高效、特异性强的烈性噬
菌体，具有广泛的应用前景。
[0005]具体的，本专利技术涉及以下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面，提供了一株不具转导耐药基因能力的鸡白痢沙门氏菌噬菌体 CKT1(Salmonella phage CKT1)，该噬菌体已于2022年1月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC NO：M2022110。
[0007]所述烈性噬菌体CKT1分离养殖场周边污水样品，具有如下特征：
[0008]烈性噬菌体CKT1呈正多面体头部(长径约60nm)，无收缩性尾巴(长120nm)，属于长尾噬菌体科。基因组全长41Kb(GenBank accession OK143508)，不携带耐药基因与毒力基因，不会转导耐药基因至其他细菌中，安全性高。
[0009]烈性噬菌体CKT1可对沙门菌属的肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌等D群沙门菌具有裂解能力。在pH 4
‑
11、温度4
‑
60℃条件下比较稳定，抗噬菌体突变率<10
‑6。
[0010]本专利技术的第二方面，提供上述烈性噬菌体CKT1在如下(1)或(2)中的应用：
[0011](1)制备抑制或杀灭D群沙门菌的产品；
[0012](2)制备预防和/或治疗鸡群D群沙门菌感染的药物。
[0013]优选的，所述D群沙门菌为鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌或肠炎沙门菌。
[0014]本专利技术的第三方面，提供一种噬菌体制剂，所述噬菌体制剂以上述烈性噬菌体CKT1 为活性成分。
[0015]优选的，所述噬菌体制剂中，烈性噬菌体CKT1的剂量大于或等于106PFU/mL。
[0016]上述噬菌体制剂可以以本专利技术的烈性噬菌体CKT1作为唯一活性成分；还可以含有除本专利技术的噬菌体以外的其他噬菌体，其与本专利技术的噬菌体复配使用可以得到与之相当或者更好的防治鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌和/或肠炎沙门菌的效果。
[0017]上述噬菌体制剂还可以包括载体，所述载体可以为固体载体或液体载体；其中，固体载体可以选自矿物材料、植物材料或高分子化合物；液体载体可以选自有机溶剂、植物油、矿物油和水。
[0018]上述噬菌体制剂可以被制备成各种使用形式，如液体制剂、冻干制剂或口服固体制剂等，经喷雾、注射或口服等方式用于预防或治疗沙门菌在鸡群中的感染，或用于改善鸡群养殖环境、降低蛋壳表面沙门菌含量。
[0019]本专利技术的第四方面，提供上述噬菌体制剂在如下(1)或(2)中的用途：
[0020](1)制备预防和/或治疗鸡群鸡白痢沙门菌或鸡伤寒沙门菌感染的药物；
[0021](2)制备杀灭养殖环境中D群沙门菌的环境改良剂。
[0022]本专利技术的第五方面，提供以上述烈性噬菌体CKT1作为有效成分的饲料添加剂、饮用水添加剂或杀菌剂。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]本专利技术分离到的沙门菌噬菌体CKT1对不同来源的鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及肠炎沙门菌等D群沙门菌均具有裂解活性，潜伏期短，子代噬菌体爆发量高，抗噬菌体突变率低，不携带毒力基因与耐药基因，不会转导耐药基因至其他细菌中，可保护雏鸡肠道菌群健康，是一种安全、高效、特异性强的烈性噬菌体。该噬菌体制剂可成为一种新型环保的净化种鸡场鸡白痢沙门菌的辅助手段，也是预防和治疗鸡群鸡白痢或鸡伤寒沙门菌感染的替代策略。
附图说明
[0025]图1：噬菌体CKT1纯化后在野生型鸡白痢沙门菌CVCC526上产生的噬菌斑图(A) 及电镜图(B)。
[0026]图2：噬菌体CKT1的生物学特性。(A)温度稳定性；(B)酸碱稳定性；(C)一步生长曲线；(D)体外裂解能力。
[0027]图3：噬菌体CKT1对耐药基因的转导频率。
[0028]图4：噬菌体治疗改善鸡白痢沙门菌感染的雏鸡生长性能。(A)噬菌体治疗改善沙门菌感染的雏鸡体重；(B)噬菌体治疗降低雏鸡肝、脾中沙门菌定植量。
[0029]图5：噬菌体CKT1在治疗鸡白痢沙门菌感染的成年种鸡中的应用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株不具转导耐药基因能力的的烈性沙门菌噬菌体CKT1，其保藏编号为：CCTCC M2022110。2.权利要求1所述的烈性噬菌体CKT1在如下(1)或(2)中的应用：(1)制备抑制或杀灭D群沙门菌的产品；(2)制备预防和/或治疗鸡群D群沙门菌感染的药物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述D群沙门菌为鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌或肠炎沙门菌。4.一种噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂以权利要求1所述的烈性噬菌体CKT1为活性成分。5.根据权利要求4所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述噬菌体制剂中，烈性噬菌体CKT1的剂量大于或...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙淑红，郝桂娟，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：