293细胞的转染方法技术

本发明专利技术公开了293细胞的转染方法，包括以下步骤：将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1

【技术实现步骤摘要】
293细胞的转染方法


[0001]本专利技术涉及转染培养基
，具体涉及一种293细胞的转染方法。

技术介绍

[0002]在生物药物研发中，采用较多的是将目的基因质粒转染入宿主细胞进行培养，以期获得目标生物药物。流式电转技术是一种高效的转染技术，在较低电压下即能产生足够强度的均匀电场，可实现高转染率。转染培养基能更好的保护细胞、降低细胞死亡率的同时，显著提高细胞转染率。最初大量使用的宿主细胞是原核表达体系，真核表达体系由于技术问题导致应用受限，不及原核表达体系。近年来，由于技术的进步，加之真核表达体系具有的特有优势，在部分领域开始取代原有的原核体系。例如一些研究机构使用真核293细胞用于生产蛋白药物或其他生物药物。
[0003]293细胞(人胚肾细胞，又称为HEK细胞)比较容易转染，是一种很常用的表达研究外源基因的细胞株。而且由于293细胞对蛋白的翻译和修饰功能，使该药物的活性的效价会更好。由于真核细胞和原核细胞的结构区别，使其培养的条件适应性并不相同，所需的转染条件不同，原核细胞转染条件并不适合真核细胞。由于细胞转染过程会引发细胞膜表面的变化，对细胞造成刺激，细胞在转染后是比较脆弱的，转染后细胞的修复和转染物质的表达对于培养环境的要求较高。除了细胞的生长健康状态，不同的转染方法、条件和转染后的培养方法对于转染的效果也起着重要作用。市场上对于真核细胞转染的研究非常有限，尤其是针对真核细胞的流式电转方案的开发更是少之又少。
[0004]鉴于此，开发适用于293细胞的流式电转方案很有必要。
专利
技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供一种能够实现高效转染的流式电转方法转染293细胞。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种293细胞的转染方法，包括以下步骤：
[0007]将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1
×
105cells/mL～5
×
107cells/mL；
[0008]将转染后的293细胞接种到转染培养基进行培养，所述转染培养基中含有L
‑
酪氨酸、烟酰胺、硫酸镁和氢化可的松。
[0009]在其中一个实施例中，所述流式电转转染的电压值为160V～250V，脉冲值为1000μs～2000μs，电击次数为3～6次，间隔为200ms～400ms，转染液流速为3.5mL/min～5.5mL/min。
[0010]在其中一个实施例中，转染时的所述293细胞的细胞密度为1
×
106cells/mL～5
×
107cells/mL。
[0011]在其中一个实施例中，所述转染培养基为无血清转染培养基，所述转染培养基包
含如下浓度的组分：
[0012]L
‑
酪氨酸 0.1843g/L～0.396g/L、
[0013]天冬酰胺 0.1704g/L～0.1874g/L、
[0014]L
‑
胱氨酸 0.3361g/L～0.3697g/L、
[0015]L
‑
谷氨酸 0.1722g/L～0.1895g/L、
[0016]异亮氨酸 0.1052g/L～0.1157g/L、
[0017]亮氨酸 0.1322g/L～0.1454g/L、
[0018]甲硫氨酸 0.0903g/L～0.0993g/L、
[0019]苯丙氨酸 0.0940g/L～0.1034g/L、
[0020]脯氨酸 0.0521g/L～0.0573g/L、
[0021]丝氨酸 0.0940g/L～0.1034g/L、
[0022]苏氨酸 0.1518g/L～0.1669g/L、
[0023]色氨酸 0.4255g/L～0.4680g/L、
[0024]缬氨酸 0.1508g/L～0.1659g/L、
[0025]氯化胆碱 0.0010g/L～0.0011g/L、
[0026]葡萄糖 5.5860g/L～6.1446g/L、
[0027]烟酰胺 0.0014g/L～0.0016g/L、
[0028]核黄素 0.00015g/L～0.00025g/L、
[0029]维生素 B12 0.0009g/L～0.0010g/L、
[0030]吡哆醛 0.0112g/L～0.0123g/L、
[0031]盐酸硫胺素 0.0033g/L～0.0036g/L、
[0032]生物素 0.00025g/L～0.00035g/L、
[0033]肌醇 0.0009g/L～0.0010g/L、
[0034]氯化钾 0.2346g/L～0.2581g/L、
[0035]氯化镁 0.1080g/L～0.1188g/L、
[0036]硫酸镁 0.0200g/L～0.0369g/L、
[0037]磷酸二氢钠 0.0205g/L～0.0225g/L、
[0038]磷酸氢二钠 0.0326g/L～0.0358g/L、
[0039]碳酸氢钠 1.8732g/L～2.0605g/L、
[0040]七水硫酸锌 0.00055g/L～0.00065g/L、
[0041]亚油酸 0.00015g/L～0.00025g/L、
[0042]亚硒酸钠 0.00025g/L～0.00035g/L、
[0043]氢化可的松 0.0001g/L～0.0002g/L、
[0044]硫辛酸 0.0003g/L～0.0004g/L、
[0045]丙酮酸钠 0.0633g/L～0.0696g/L。
[0046]本专利技术提供一种293细胞的转染方法，采用流式电转转染，通过设置合适的电转染条件，电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1
×
105cells/mL～5
×
107cells/mL，并在流式电转后在合适的转染培养基中进行培养，流式电
转条件和转染培养基条件相互配合，能够缓解流式电转的刺激，转染后实现较高的基因表达强度、细胞密度和细胞存活率。
附图说明
[0047]图1为本专利技术实施例1的使用不同无血清转染培养基培养的HEK293细胞表达蛋白的荧光强度图；
[0048]图2A为本专利技术实施例1的使用不同无血清转染培养基培养的HEK293细胞的细胞密度；
[0049]图2B为本专利技术实施例1的使用不同无血清转染培养基培养的HEK293细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.293细胞的转染方法，其特征在于，包括以下步骤：将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1
×
105cells/mL～5
×
107cells/mL；将转染后的293细胞接种到转染培养基进行培养，所述转染培养基中含有L
‑
酪氨酸、烟酰胺、硫酸镁和氢化可的松。2.根据权利要求1所述的293细胞的转染方法，其特征在于，所述流式电转转染的电压值为160V～250V，脉冲值为1000μs～2000μs，电击次数为3～6次，间隔为200ms～400ms，转染液流速为3.5mL/min～5.5mL/min。3.根据权利要求1所述的293细胞的转染方法，其特征在于，转染时的所述293细胞的细胞密度为1
×
106cells/mL～5
×
107cells/mL。4.根据权利要求1所述的293细胞的转染方法，其特征在于，所述转染培养基为无血清转染培养基，所述转染培养基包含如下浓度的组分：L
‑
酪氨酸0.1843g/L～0.396g/L、天冬酰胺0.1704g/L～0.1874g/L、L
‑
胱氨酸0.3361g/L～0.3697g/L、L
‑
谷氨酸0.1722g/L～0.1895g/L、异亮氨酸0.1052g/L～0.1157g/L、亮氨酸0.1322g/L～0.1454g/L、甲硫氨酸0.0903g/L～0.0993g/L、苯丙氨酸0.0940g/L～0.1034g/L、脯氨酸0.0521g/L～0.0573g/L、丝氨酸0.0940g/L～0.1034g/L、苏氨酸0.1518g/L～0.1669g/L、色氨酸0.4255g/L～0.4680g/L、缬氨酸0.1508g/L～0.1659g/L、氯化胆碱0.0010g/L～0.0011g/L、葡萄糖5.5860g/L～6.1446g/L、烟酰胺0.0014g/L～0.0016g/L、核黄素0.00015g/L～0.00025g/L、维生素B12 0.0009g/L～0.0010g/L、吡哆醛0.0112g/L～0.0123g/L、盐酸硫胺素0.0033g/L～0.0036g/L、生物素0.00025g/L～0.00035g/L、肌醇0.0009g/L～0.0010g/L、氯化钾0.2346g/L～0.2581g/L、氯化镁0.1080g/L～0.1188g/L、硫酸镁0.0200g/L～0.0369g/L、
磷酸二氢钠0.0205g/L～0.0225g/L、磷酸氢二钠0.0326g/L～0.0358g/L、碳酸氢钠1.8732g/L～2.0605g/L、七水硫酸锌0.00055g/L～0.00065g/L、亚油酸0.00015g/L～0.00025g/L、亚硒酸钠0.000...

【专利技术属性】
技术研发人员：王嘉琪，牛盛蕃，钱建宁，李鹏杰，张业炘，谢莉莉，黄玉红，阚子义，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司甘肃健顺生物科技有限公司健顺生物科技南通有限公司，
类型：发明
国别省市：