脂质组合物制造技术

本文公开了含有式(I)的阳离子脂质、中性脂质、甾醇以及PEG或PEG修饰的脂质的脂质组合物，其中，式(I)为(F)。本文还公开了制备式(I)阳离子脂质的方法。制备式(I)阳离子脂质的方法。

【技术实现步骤摘要】
脂质组合物
[0001]本申请是申请日为2010年5月5日，申请号为201610127574.4，题为《脂质组合物》的中国专利申请的分案申请。
[0002]优先权要求
[0003]本申请要求2009年5月5日提交的U.S.S.N 61/175,770和2010年1月28日提交的U.S.S.N.61/299,291的优先权，所述每个申请的内容通过引用并入本文。


[0004]本专利技术涉及使用脂质颗粒(lipid particle)递送治疗剂的领域。特别地，本专利技术提供包括这些脂质的阳离子脂质和脂质颗粒，这些对于核酸的体内递送以及适合体内治疗用途的核酸
‑
脂质颗粒组合物是有利的。另外，本专利技术提供制备这些组合物的方法，以及使用这些组合物将核酸引入细胞中的方法，例如，用于治疗各种疾病的症状。
[0005]相关领域的描述
[0006]治疗性核酸包括例如小干扰RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)、反义寡核苷酸、核酶、质粒和免疫刺激核酸。这些核酸通过多种机制起作用。在siRNA或miRNA的情况下，这些核酸可通过被称作RNA干扰(RNAi)的过程下调特异性蛋白的细胞内水平。在将siRNA或miRNA引入到细胞质后，这些双链RNA构建体可结合至被称作RISC的蛋白。从RISC复合物中置换siRNA或miRNA的有义链，从而在RISC中提供可识别和结合具有与结合的siRNA或miRNA的序列互补的mRNA的模板。在结合互补mRNA后，RISC复合物切割mRNA并且释放切割的链。RNAi可通过靶向编码蛋白合成的相应mRNA的特异性破坏来提供特异性蛋白的下调。
[0007]RNAi的治疗性应用非常广泛，这是因为siRNA和miRNA的构建体可用任何一种针对靶蛋白的核苷酸序列合成。迄今为止，siRNA在体外和体内模型中都已显示出特异性下调靶蛋白的能力。另外，目前在临床研究中评估siRNA构建体。
[0008]然而，当前siRNA或miRNA构建体面临的两个问题是：首先，它们在血浆中对核酸酶酶解的敏感性以及，其次，它们有限的进入细胞内区室(当以游离siRNA或miRNA全身性施用时它们可在所述区室中结合RIST)的能力。通过在分子内引入化学修饰的核苷酸接头(例如，硫代磷酸酯基团)可稳定这些双链构建体。然而，这些化学修饰只提供有限的免受核酸酶酶解的保护作用并且可降低构建体的活性。可通过使用载体系统(如聚合物、阳离子脂质体)或者通过化学修饰构建体(例如通过共价连接胆固醇分子)来促进siRNA或miRNA的细胞内递送。然而，需要改进的递送系统来增加siRNA和miRNA分子的效力以及减少或消除对化学修饰的需求。
[0009]反义寡核苷酸和核酶还可抑制mRNA翻译成蛋白质。在反义构建体的情况下，这些单链脱氧核糖核酸具有与靶蛋白mRNA的序列互补的序列，并且可按照沃森
‑
克里克碱基配对结合至mRNA。这种结合可防止靶mRNA的翻译和/或触发mRNA转录物的RNA酶H降解。因此，反义寡核苷酸对于作用特异性(即特异性疾病相关蛋白的下调)具有巨大潜力。迄今为止，这些化合物在体内和体外模型中显示出了前景，这些模型包括炎症性疾病、癌症和HIV的模型(评论于Agrawal，Trends in Biotech.14:376
‑
387(1996))。反义链还可通过与染色体
DNA的特异性杂交影响细胞活性。目前正在进行几个反义药物的晚期人体临床评估。这些药物的靶包括bcl2和载脂蛋白B基因以及mRNA产品。
[0010]使用治疗性核酸的一个众所周知的问题涉及磷酸二酯核苷酸间键合的稳定性以及这个接头对核酸酶的敏感性。血清中核酸外切酶和核酸内切酶的存在导致含有磷酸二酯接头的核酸快速降解并且，因此，在血清的存在下或在细胞中，治疗性核酸具有非常短的半衰期(Zelphati，O.等人，Antisense.Res.Dev.3:323
‑
338(1993)；以及Thierry，A.R.等人，第l47
‑
161页，Gene Regulation:Biology of Antisense RNA and DNA(编者Erickson，RP和Izant，JG；Raven Press，NY(1992))。由于这些和其他已知的问题，目前正在开发的治疗性核酸并没有采用建立在天然核酸上的碱性磷酸二酯化学。
[0011]这种问题可通过降低血清或细胞内降解的化学修饰部分解决。对核苷酸间磷酸二酯桥(例如，使用硫代磷酸酯、甲基膦酸酯或氨基磷酸酯键合)、核苷酸碱基(例如5
‑
丙炔基
‑
嘧啶)或糖(例如，2'
‑
修饰的糖)(Uhlmann E.等人，Antisense:Chemical Modifications.Encyclopedia of Cancer，Vol.X.，pp 64
‑
81 Academic Press Inc.(1997))修饰进行测试。其他人试图使用2'
‑
5'糖键来改善稳定性(参见，例如，美国专利No.5,532,130)。还试过其他改变。然而，这些解决方案没有一个完全令人满意并且体内游离的治疗性核酸仍然只有有限的效力。
[0012]此外，如上有关siRNA和miRNA所述，问题仍然存在于治疗性核酸跨细胞膜的能力有限(参见Vlassov等人，Biochim.Biophys.Acta 1197:95
‑
1082(1994))以及与全身毒性相关的问题，例如补体介导的过敏反应、改变凝血性能和血细胞减少症(Galbraith等人，Antisense Nucl.Acid Drug Des.4:201
‑
206(1994))。
[0013]尽管最近取得了进展，但是本领域仍需要适于一般治疗用途的改进的脂质
‑
治疗性核酸组合物，这些组合物可高效地封装核酸、具有高的药物：脂质比、保护封装的核酸在血清中不被降解和清除、适于全身递送以及提供封装的核酸的细胞内递送。此外，这些脂质
‑
核酸颗粒应耐受性好并且提供足够的治疗指数，以至于采用有效剂量的核酸的患者治疗没有显著的毒性和/或对患者没有风险。本专利技术提供了此类组合物及其制备方法以及使用此类组合物将核酸引入细胞中的方法，包括用于治疗疾病的方法。
[0014]专利技术概述
[0015]本专利技术提供脂质组合物，该组合物包括式(I)的阳离子脂质、中性脂质、甾醇以及PEG或PEG修饰的脂质，其中式(I)为
[0016]其中
[0017]每个X
a
和X
b
对于每次出现各自独立地为C1‑6亚烷基；
[0018]n为0、1、2、3、4或5；
[0019]A对于每次出现为NR2或任选地被1
‑
3个R取代的环状部分；
[0020]B是NR或任选地被1
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.式(I)的脂质或其盐，其中，每个X
a
和X
b
对于每次出现各自独立地为C1‑6亚烷基；n为0、1、2、3、4或5；A对于每次出现为NR2或任选地被1
‑
3个R取代的环状部分；B是NR或任选地被1
‑
2个R取代的环状部分；每个R对于每次出现独立地为H、烷基、或条件是至少一个R为或R1对于每次出现独立地为H、R3、或R2对于每次出现独立地为烷基、链烯基、炔基、杂烷基、杂链烯基或杂炔基；R3对于每次出现独立地为烷基、链烯基、炔基、杂烷基、杂链烯基或杂炔基；Y对于每次出现独立地为O、NR4或S；R4对于每次出现独立地为H、烷基、链烯基、炔基、杂烷基、杂链烯基或杂炔基。2.如权利要求1所述的脂质，其中n为1或2。3.如权利要求1所述的脂质，其中A每次出现为NR2。4.如权利要求1所述的脂质，其中B为环状部分。5.如权利要求1所述的脂质，其中B为含氮的环状部分。6.如权利要求1所述的脂质，其中B为哌啶基或哌嗪基部分。7.如权利要求1所述的脂质，其中R...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆希亚，
申请(专利权)人：阿布特斯生物制药公司，
类型：发明
国别省市：