使用编码阿柏西普的AAV2变体治疗眼新血管疾病的方法技术

提供用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法，其包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其中所述rAAV颗粒包含：a)编码多肽且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和b)AAV2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列LGETTRP(SEQ ID NO.14)，其中所述氨基酸残基编号对应于AAV2VP1衣壳蛋白。于AAV2VP1衣壳蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用编码阿柏西普的AAV2变体治疗眼新血管疾病的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月11日提交的美国临时专利申请号62/899,070和2019年10月10日提交的美国临时专利申请号62/913,648的权益，将其各自的公开内容通过通过引用整体并入本文。
[0003]ASCII文本文件的序列表的提交
[0004]将以下提交的ASCII文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：627002001240SEQLIST.TXT，记录日期：2019年11月18日，大小：29KB)。


[0005]本公开内容涉及治疗个体中的眼新血管疾病和病症的方法，其包括向个体的眼部施用单一单位剂量的编码抗
‑
VEGF试剂(例如，阿柏西普(flibercept))重组腺相关病毒(rAAV)颗粒。

技术介绍

[0006]年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种影响黄斑的退化性眼病，黄斑是视网膜中心负责阅读和精细视力的光敏小区域。影响黄斑的病症降低中心视力，同时保持周边视力不变。在严重的情况下，该疾病可以导致中心失明。AMD是美国65岁及以上人群中视力丧失的主要原因，并且在40岁以上人群中任何AMD的估计患病率为约6.5％(Klein et al.,(2011)Arch Ophthalmol,129(1):75
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80)。新血管或渗出性或湿性AMD(nAMD、wAMD或nAMD)是AMD的晚期形式。wAMD的标志是脉络膜新生血管(CNV)，其是视网膜中来自下脉络膜层的异常血管浸润，导致视网膜细胞损伤和中心失明。这种异常的血管生成过程由生长因子，特别是血管内皮生长因子(VEGF)调节。
[0007]wAMD的标准护理是一类结合并螯合VEGF的分子，例如雷珠单抗(Lucentis)和阿柏西普(Eylea)。例如，阿柏西普是一种重组融合蛋白，其充当血管内皮生长因子亚型A和B(VEGF
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A和VEGF
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B)和胎盘生长因子(PGF)的诱饵受体。通过结合这些配体，阿柏西普能够阻止它们与血管内皮生长因子受体(VEGFR)、VEGFR
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1和VEGFR
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2结合，从而抑制新血管形成和降低血管通透性。阿柏西普由与IgG1的Fc片段融合的VEGFR
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1的结构域2和VEGFR
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2的结构域3组成。
[0008]目前标准的标准护理抗VEGF试剂需要每4至8周经由玻璃体内注射(IVT)重新施用，以实现最佳的治疗结果并保持视力。依从这样的方案对于患者、其护理者和保健系统来说是繁重的，并且大多数患者随时间推移不能依从最佳疗法，这与视力丧失相关(Khanani AM,et al.)。此外，还存在并发症，包括眼内炎、视网膜脱离、外伤性白内障和眼内压(IOP)升高；这些并发症的风险可能随着重复IVT注射而增加(Falavarjani et al.,(2013)Eye(Lond),27(7):787
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794)。
[0009]因此，本领域需要有效、降低副作用的风险并适合高长期患者依从性的眼新生血
管疾病如wAMD的疗法。
[0010]专利技术简述
[0011]在一个方面，本文提供一种用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的约6
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个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其中所述个体是人，并且其中所述rAAV颗粒包含：(a)编码多肽且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和(b)AAV2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列LGETTRP(SEQ ID NO：14)，其中所述氨基酸残基编号对应于AAV2 VP1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述方法包括减少个体的眼睛中的视网膜液体。
[0012]在另一个方面，本文提供一种用于减少患有眼新血管疾病的个体眼睛中的视网膜液体的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒，其中所述个体是人，并且其中所述rAAV颗粒包含：(a)编码多肽且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和(b)AAV2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列LGETTRP(SEQ ID NO：14)，其中所述氨基酸残基编号对应于AAV2 VP1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述个体在施用单位剂量的rAAV颗粒之前约最后12周已接受至少一种抗VEGF试剂的治疗。在一些实施方案中，所述个体的一只眼睛中的视网膜液体的量或存在对使用抗VEGF试剂的先前治疗是难治性的。在一些实施方案中，所述抗VEGF试剂是阿柏西普。在一些实施方案中，一只眼睛中的视网膜流体减少至少约60％。在一些实施方案中，与将rAAV施用至个体之前个体的一只眼睛中的视网膜液体水平相比，一只眼睛中的视网膜液体减少约80％。在一些实施方案中，视网膜流体是视网膜下流体(SRF)或视网膜内流体(IRF)。在一些实施方案中，单位剂量的rAAV颗粒为每只眼睛约6
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个载体基因组(vg/眼睛)或更少。
[0013]在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的rAAV颗粒为每只眼睛约6
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至约2
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个载体基因组(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量的rAAV颗粒为每只眼睛约2
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或约6
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个载体基因组(vg/眼)。
[0014]在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒之后至多约2周。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒包含与向个体的一只眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒相同或更少的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒之后至少约2周。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒包含比向个体的一只眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒更多的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
[0015]在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普。
[0016]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的约6
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个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其中所述个体为人类，并且其中所述rAAV颗粒包含：a)编码多肽且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和b)AAV2衣壳蛋白，其包含插入在所述衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列LGETTRP(SEQ ID NO.14)，其中所述氨基酸残基编号对应于AAV2 VP1衣壳蛋白。2.权利要求1的方法，其中所述患有眼新血管疾病的个体的眼睛中的视网膜流体减少。3.一种用于减少患有眼新血管疾病的个体的眼睛中的视网膜流体的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒，其中所述个体为人类，并且其中所述rAAV颗粒包含：a)编码多肽且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和b)AAV2衣壳蛋白，其包含插入在所述衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列LGETTRP(SEQ ID NO.14)，其中所述氨基酸残基编号对应于AAV2 VP1衣壳蛋白。4.权利要求3的方法，其中所述个体在施用单位剂量的rAAV颗粒之前约12周内已经接受至少一种抗VEGF试剂的治疗。5.权利要求3或权利要求4的方法，其中所述个体的一只眼睛中的视网膜流体的量或存在对使用抗VEGF试剂的先前治疗是难治性的。6.权利要求4或权利要求5的方法，其中所述抗VEGF试剂为阿柏西普。7.权利要求2
‑
6中任一项的方法，其中所述一只眼睛中的视网膜流体减少了至少约60％。8.权利要求2
‑
7中任一项的方法，其中与向所述个体施用rAAV之前的所述个体的一只眼睛中的视网膜流体的水平相比，所述一只眼睛中的视网膜流体减少约80％。9.权利要求2
‑
8中任一项的方法，其中所述视网膜流体为视网膜下流体(SRF)或视网膜内流体(IRF)。10.权利要求2
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9中任一项的方法，其中所述单位剂量的颗粒为约6
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个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)或更少。11.权利要求1
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10中任一项的方法，其中所述单位剂量的rAAV颗粒为约6
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至约2
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个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。12.权利要求1
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11中任一项的方法，其中所述单位剂量的rAAV颗粒为约2
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或约6
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个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。13.权利要求1
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12中任一项的方法，进一步包括向所述个体的对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒。14.权利要求13的方法，其中向所述对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒是在向所述一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒之后至多约2周。15.权利要求14的方法，其中向所述个体的对侧眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒包含与向所述个体的一只眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒相同或更少的载体基因组/眼睛/(vg/眼睛)。
16.权利要求13的方法，其中向所述对侧眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒是在向所述一只眼睛施用单位剂量的rAAV颗粒之后至少约2周。17.权利要求16的方法，其中向所述个体的对侧眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒包含与向所述个体的一只眼睛施用的单位剂量的rAAV颗粒更多的载体基因组/眼睛/(vg/眼睛)。18.权利要求1
‑
17中任一项的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列。19.权利要求1
‑
18中任一项的方法，其中所述多肽为阿柏西普。20.权利要求1
‑
19中任一项的方法，其中所述核酸进一步包含第一增强子区、启动子区、5'UTR区、第二增强子区和聚腺苷酸化位点。21.权利要求1
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20中任一项的方法，其中所述核酸以5
’
至3
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顺序包含(a)第一增强子区；(b)启动子区；(c)编码多肽的核酸，所述多肽包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；(d)5'UTR区；(e)第二增强子区；和(f)多腺苷酸化位点；并且侧接AAV2反向末端重复序列(ITR)。22.权利要求20或权利要求21的方法，其中所述第一增强子区包含CMV序列，所述CMV序列包含SEQ ID NO：22的序列或与其具有至少85％同一性的序列。23.权利要求20
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22中任一项的方法，其中所述启动子区包含CMV序列，所述CMV序列包含SEQ ID NO：23的序列或与其具有至少85％同一性的序列。24.权利要求20
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23中任一项的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。25.权利要求20
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24中任一项的方法，其中所述多肽为阿柏西普。26.权利要求20
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25中任一项的方法，其中所述5'UTR区以5'至3'顺序包含TPL序列和eMLP序列，所述TPL序列包含SEQ ID NO：24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述eMLP序列包含SEQ ID NO：25的序列或与其具有至少85％同一性的序列。27.权利要求20
‑
26中任一项的方法，其中所述第二增强子区包含含有SEQ ID NO：26的序列或与其具有至少85％同一性的序列的完整EES序列。28.权利要求20
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27中任一项的方法，其中所述聚腺苷酸化位点包含含有SEQ ID NO：27的序列或与其具有至少85％同一性的序列的HGH聚腺苷酸化位点。29.权利要求1
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19中任一项的方法，其中所述核酸进一步包含(a)第一增强子区，其包含含有SEQ ID NO：22的序列或与其具有至少85％同一性的序列的CMV序列；(b)启动子区，其包含含有SEQ ID NO：23的序列或与其具有至少85％一致性的序列的CMV序列；(c)5'UTR区，其以5'至3'顺序包含TPL序列和eMLP序列，所述TPL序列包含SEQ ID NO：24的序列或与其具有85％同一性的序列，所述eMLP序列包含SEQ ID NO：25的序列或与其具有85％同一性的序列；(d)第二增强子区，其包含完整EES序列，所述完整EES序列包含SEQ ID NO：26的序列或与其具有至少85...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：阿德夫拉姆生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：