用于玻璃体内递送的变体AAV衣壳制造技术

提供了变体腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白和具有一个或多个变体AAV衣壳蛋白的重组AAV病毒粒子。还提供了使用重组AAV病毒粒子诸如用于治疗或预防疾病或病症的组合物和方法。治疗或预防疾病或病症的组合物和方法。治疗或预防疾病或病症的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于玻璃体内递送的变体AAV衣壳
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年04月26日提交的美国临时申请62/839,548和2019年10月21日提交的美国临时申请62/923,924的权益，所述美国临时申请的全部内容各自通过引用并入本文中。
[0003]以ASCII文本文件提交的序列表
[0004]以下以ASCII文本文件提交的全部内容通过引用并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：627002001140SEQLIST.TXT，记录日期：2020年04月21日，大小：49KB)。

技术介绍

[0005]一种有希望治疗和预防遗传以及其他疾病和病症的方法是递送具有如病毒粒子等基因治疗载体的治疗剂。适于基因治疗的病毒粒子的说明性实例包含但不限于逆转录病毒粒子、慢病毒粒子、腺病毒粒子、疱疹病毒粒子、甲病毒粒子和腺相关病毒(AAV)离子。AAV是一种4.7kb的单链DNA病毒。基于AAV的重组病毒粒子(rAAV病毒粒子)具有优良的临床安全性，因为野生型AAV是非致病性的并且与任何已知疾病都没有病因关系。另外，AAV提供了在包括眼睛、肌肉、肺和脑在内的很多组织中进行非常高效的基因递送和持续转基因表达的能力。
[0006]在设计用于基因治疗的病毒粒子方面仍然存在某些挑战，包括优化病毒细胞趋向性，尤其是在眼的基因治疗方面，优化向视网膜的递送。因此，需要优化病毒粒子以在选定的哺乳动物细胞中表达基因。本专利技术通过提供有利于将重组AAV病毒粒子递送至所需细胞和组织的修饰的AAV衣壳蛋白解决了这一需求。

技术实现思路

[0007]本文提供了重组腺相关病毒(AAV)病毒粒子，其包含：(a)包含修饰的序列的变体AAV衣壳蛋白，所述修饰的序列相对于亲本AAV衣壳蛋白在氨基酸残基570
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579内包含一个或多个氨基酸置换，其中所述修饰的序列包含HKFKSGD(SEQ ID NO:1)，并且其中所述氨基酸残基编号对应于AAV5 VP1衣壳蛋白；和(b)编码治疗性基因产物的多核苷酸序列。
[0008]在一些实施方式中，所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV5衣壳蛋白或AAV5和AAV2杂合衣壳蛋白。在一些实施方式中，所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV2.5T衣壳蛋白。在一些实施方式中，所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV2.5T VP1衣壳蛋白。
[0009]在一些实施方式中，所述修饰的序列包含LAHKFKSGDA(SEQ ID NO:3)。在一些实施方式中，所述变体AAV衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少85％同源性的衣壳序列。在一些实施方式中，所述变体AAV衣壳蛋白包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示的衣壳序列。
[0010]在一些实施方式中，所述rAAV病毒粒子是变体AAV5或变体AAV2和AAV5杂合病毒粒子。在一些实施方式中，所述rAAV病毒粒子是变体AAV2.5T病毒粒子。
[0011]在一些实施方式中，所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能
够转导视网膜的细胞。在一些实施方式中，所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能够转导以下一者或多者：光感受器、视网膜神经节细胞、M
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ller细胞、双极细胞、无长突细胞、水平细胞和视网膜色素上皮细胞。在一些实施方式中，所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能够转导视网膜色素上皮细胞。
[0012]在一些实施方式中，所述治疗性基因产物是siRNA、miRNA或蛋白。在一些实施方式中，所述治疗性基因产物是抗血管内皮生长因子(抗VEGF)基因产物。在一些实施方式中，所述治疗性基因产物是视蛋白(opsin)。
[0013]在一些实施方式中，编码所述治疗性基因产物的多核苷酸的侧翼是一个或多个AAV ITR。在一些实施方式中，所述一个或多个AAV ITR是AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、禽类AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV、灵长类AAV、非灵长类AAV、或绵羊AAV ITR或其变体。在一些实施方式中，所述一个或多个AAV ITR是AAV2 ITR或AAV5 ITR。
[0014]在一些实施方式中，所述重组AAV病毒粒子与AAV2.5T相比具有改变的细胞趋向性。
[0015]在一些实施方式中，本文公开的重组AAV病毒粒子是用于治疗有需要的受试者的视网膜疾病或病症的方法，其中所述方法包括通过玻璃体内注射向受试者施用包含重组AAV病毒粒子的药物组合物。在一些实施方式中，本文公开的重组AAV病毒粒子用于制备治疗受试者视网膜疾病或病症的药物。在一些实施方式中，所述疾病或病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)、湿性AMD、干性AMD、视网膜新生血管生成、脉络膜新生血管生成、糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、分支性视网膜静脉阻塞、糖尿病黄斑水肿、糖尿病视网膜缺血、缺血性视网膜病变或糖尿病性视网膜水肿。
[0016]本文还提供了药物组合物，其包含本文公开的重组AAV病毒粒子。
[0017]本文还提供了用于生产rAAV病毒粒子的方法，其包括：(a)在产生rAAV病毒粒子的条件下培养宿主细胞，其中所述宿主细胞包含：(i)编码包含修饰的序列的变体AAV衣壳蛋白的多核苷酸，所述修饰的序列相对于亲本AAV衣壳蛋白在氨基酸残基570
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579内包含一个或多个氨基酸置换，其中所述修饰的序列包含HKFKSGD(SEQ ID NO:1)；(ii)编码rep蛋白的多核苷酸；(iii)多核苷酸表达盒，所述多核苷酸表达盒包含侧翼为至少一个AAV ITR的编码治疗性基因产物的序列；和(iv)AAV辅助功能；和(b)回收由所述宿主细胞产生的所述rAAV病毒粒子。
[0018]本文还提供了向受试者的视网膜提供治疗性基因产物的方法，其包括通过玻璃体内注射向所述受试者施用本文公开的重组AAV病毒粒子或者本文公开的药物组合物。
[0019]在一些实施方式中，所述受试者已被诊断为或疑似具有选自以下的一种或多种病况：急性黄斑神经视网膜病变、白塞氏病、脉络膜新生血管形成、糖尿病性葡萄膜炎、组织胞浆菌病、黄斑变性、水肿、多灶性脉络膜炎、影响眼后部部位或位置的眼外伤、眼肿瘤、视网膜中央静脉阻塞、糖尿病性视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)、视网膜动脉阻塞性疾病、视网膜脱离、葡萄膜炎性视网膜病、交感神经性眼炎、Vogt Koyanagi
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Harada(VKH)综合征、葡萄膜扩散、眼部激光治疗引起或影响的后眼部病况、由光动力学疗法引起或受光动力学疗法影响的后眼部病况、光凝、放射性视网膜病变、视网膜前膜病症、视网膜分支静
脉阻塞、前部缺血性视神经病变、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病变、非视网膜病变糖尿病性视网膜功能障碍、视网膜劈裂症、视网本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组腺相关病毒(AAV)病毒粒子，其包含：(a)包含修饰的序列的变体AAV衣壳蛋白，所述修饰的序列相对于亲本AAV衣壳蛋白在氨基酸残基570
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579内包含一个或多个氨基酸置换，其中所述修饰的序列包含HKFKSGD(SEQ ID NO:1)，并且其中所述氨基酸残基编号对应于AAV5 VP1衣壳蛋白；和(b)编码治疗性基因产物的多核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的重组AAV病毒粒子，其中所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV5衣壳蛋白或AAV5和AAV2杂合衣壳蛋白。3.根据权利要求1或权利要求2所述的重组AAV病毒粒子，其中所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV2.5T衣壳蛋白。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述亲本AAV衣壳蛋白是AAV2.5T VP1衣壳蛋白。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述修饰的序列包含LAHKFKSGDA(SEQ ID NO:3)。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述变体AAV衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少85％同源性的衣壳序列。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述变体AAV衣壳蛋白包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示的衣壳序列。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述rAAV病毒粒子是变体AAV5或变体AAV2和AAV5杂合病毒粒子。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述rAAV病毒粒子是变体AAV2.5T病毒粒子。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能够转导视网膜的细胞。11.根据权利要求10所述的重组AAV病毒粒子，其中所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能够转导以下一者或多者：光感受器、视网膜神经节细胞、M
ü
ller细胞、双极细胞、无长突细胞、水平细胞和视网膜色素上皮细胞。12.根据权利要求10或权利要求11所述的重组AAV病毒粒子，其中所述重组AAV病毒粒子当以玻璃体内注射至哺乳动物中时能够转导视网膜色素上皮细胞。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述治疗性基因产物是siRNA、miRNA或蛋白。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述治疗性基因产物是抗血管内皮生长因子(抗VEGF)基因产物。15.根据权利要求1
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13中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述治疗性基因产物是视蛋白(opsin)。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中编码所述治疗性基因产物的多核苷酸的侧翼是一个或多个AAV ITR。17.根据权利要求16所述的重组AAV病毒粒子，其中所述一个或多个AAVITR是AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、禽类AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV、灵长类AAV、非灵长类AAV、或绵羊AAVITR或其变体。
18.根据权利要求16或权利要求17所述的重组AAV病毒粒子，其中所述一个或多个AAVITR是AAV2 ITR或AAV5 ITR。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的重组AAV病毒粒子，其中所述重组AAV病毒粒子与AAV2.5T相比具有改变的细胞趋向性。20.一种药物组合物，其包含权利要求1
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19中任一项所述的重组AAV病毒粒子。21.一种用于生产rAAV病毒粒子的方法，其包括：(a)在产生rAAV病毒粒子的条件下培养宿主细胞，其中所述宿主细胞包含：(i)编码包含修饰的序列的变体AAV衣壳蛋白的多核苷酸，所述修饰的序列相对于亲本AAV衣壳蛋白在氨基酸残基570
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579内包含一个或多个氨基酸置换，其中所述修饰的序列包含HKFKSGD(SEQ ID NO:1)；(ii)编码rep蛋白的多核苷酸；(iii)多核苷酸表达盒，所述多核苷酸表达盒包含侧翼为至少一个AAVITR的编码治疗性基因产物的序列；和(iv)AAV辅助功能；和(b)回收由所述宿主细胞产生的所述rAAV病毒粒子。22.一种向受试者的视网膜提供治疗性基因产物的方法，其包括通过玻璃体内注射向所述受试者施用权利要求1
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19中任一项所述的重组AAV病毒粒子或权利要求20所述的药物组合物。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述受试者已被诊断为或疑似具有选自以下的一种或多种病况：急性黄斑神经视网膜病变、白塞氏病、脉络膜新生血管形成、糖尿病性葡萄膜炎、组织胞浆菌病、黄斑变性、水肿、多灶性脉络膜炎、影响眼后部部位或位置的眼外伤、眼肿瘤、视网膜中央静脉阻塞、糖尿病性视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)、视网膜动脉阻塞性疾病、视网膜脱离、葡萄膜炎性视网膜病、交感神经性眼炎、Vogt Koyanagi
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Harada(VKH)综合征、葡萄膜扩散、眼部激光治疗引起或影响的后眼部病况、由光动力学疗法引起或受光动力学疗法影响的后眼部病况、光凝、放射性视网膜病变、视网膜前膜病症、视网膜分支静脉阻塞、前部缺血性视神经病变、糖尿病性视...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：阿德夫拉姆生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：