本发明专利技术“4株可高效合成人参皂苷Ro合成途径中间产物或终产物的工程酵母菌及方法”属于合成生物学及代谢工程领域。4株工程酵母菌分别是：保藏号为CGMCC No.23731的一株可高效合成金盏花苷E的工程酵母菌CE
【技术实现步骤摘要】
天优选5天；优选地，所述接种指将OD
600
为2
‑
5的工程酵母菌IVA
‑
P1的种子液按体积比5％
‑
15％优选10％接种至YPD培养基中；优选地，培养条件为28
‑
30℃。
[0010]一株可高效合成姜状三七苷R1的工程酵母菌R1
‑
P1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.23733。
[0011]一种可高效合成姜状三七苷R1的方法，其特征在于，培养保藏号为CGMCC No.23733的工程酵母菌R1
‑
P1；优选地，所述培养指将工程酵母菌R1
‑
P1和底物同时加入YPD培养基培养3
‑
7天优选5天；优选地，培养条件为28
‑
30℃，工程酵母菌R1
‑
P1在YPD培养基中的接种量为体积比5％
‑
15％优选10％；所述接种指将OD
600
为2
‑
5的工程酵母菌种子液按体积比接种至液体培养基中。
[0012]一株可高效合成人参皂苷Ro的工程酵母菌Ro
‑
P1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.23734。
[0013]一种高效合成人参皂苷Ro的方法，其特征在于，培养保藏号为CGMCC No.23734的工程酵母菌Ro
‑
P1；优选地，所述培养指将工程酵母菌Ro
‑
P1接种YPD培养基培养3
‑
7天优选5天；优选地，所述接种指将OD
600
为2
‑
5的工程酵母菌Ro
‑
P1的种子液按体积比5％
‑
15％优选10％接种至液体培养基中；优选地，培养条件为28
‑
30℃。
[0014]SEQ ID NO.1所示的酶在高效合成金盏花苷E方面的用途。
[0015]一种高效合成金盏花苷E的酶的基因，其特征在于，具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0016]SEQ ID NO.3所示的酶在高效合成姜状三七苷R1和/或人参皂Ro方面的用途。
[0017]一种高效合成姜状三七苷R1和/或人参皂Ro的酶的基因，其特征在于，具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
[0018]SEQ ID NO.5所示的酶在高效合成竹节参皂苷IVa和/或人参皂Ro方面的用途。
[0019]一种高效合成竹节参皂苷IVa和/或人参皂Ro的酶的基因，其特征在于，具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。
[0020]本专利技术一方面提供一株工程化酵母菌CE
‑
P1，其解决了酿酒酵母自身对于UDP
‑
GlcA(尿苷二磷酸
‑
葡萄糖醛酸)供应不足的问题。本专利技术提供的工程化酵母菌CE
‑
P1，相比已报道的现有方法通过来源于甘草和大豆的类纤维素合酶催化齐墩果酸生成金盏花苷E但是活性较低从而造成合成途径的瓶颈现状，本专利技术的菌株CE
‑
P1解决了齐墩果酸到金盏花苷E的合成瓶颈，可高效合成金盏花苷E。
[0021]本专利技术第二个方面提供一株工程化酵母菌IVA
‑
P1，该工程化酵母菌株实现了竹节参皂苷Ⅳa的合成。
[0022]本专利技术第三个方面提供一株工程化酵母菌R1
‑
P1，实现了利用工程化酵母高效合成姜状三七苷R1。
[0023]本专利技术第四个方面提供一株工程化酵母菌Ro
‑
P1，解决了第三个糖基修饰效率低下的问题，实现了利用工程化酵母高效合成人参皂苷Ro。
[0024]本专利技术达到的效果是：无需异源添加人参皂苷Ro合成途径中任何一个环节合成所需的底物或前体物，仅使用普通YPD(葡萄糖作为碳源输入)培养基对上述各工程化酵母进行培养，5
‑
7天之后对培养液进行分离纯化，即可高效获得人参皂苷Ro合成途径上各环节中间产物和终产物：包括金盏花苷E、人参皂苷Ro及其前体化合物竹节参皂苷Ⅳa、姜状三七苷
R1等齐墩果烷型稀有人参皂苷。由于本专利技术使用的宿主稳定，生长周期短，培养条件温和，培养成本低，实现了目标化合物的高效从头合成。
[0025]菌种保藏名称：CE
‑
P1
[0026]保藏号：CGMCC No.23731
[0027]分类命名：酿酒酵母
[0028]拉丁名：Saccharomyces cerevisiae
[0029]保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0030]保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0031]保藏日期：2021年11月5日
[0032]菌种保藏名称：IVA
‑
P1
[0033]保藏号：CGMCC No.23732
[0034]分类命名：酿酒酵母
[0035]拉丁名：Saccharomyces cerevisiae
[0036]保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0037]保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0038]保藏日期：2021年11月5日
[0039]菌种保藏名称：R1
‑
P1
[0040]保藏号：CGMCC No.23733
[0041]分类命名：酿酒酵母
[0042]拉丁名：Saccharomyces cerevisiae
[0043]保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0044]保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0045]保藏日期：2021年11月5日
[0046]菌种保藏名称：Ro
‑
P1
[0047]保藏号：CGMCC No.23734
[0048]分类命名：酿酒酵母
[0049]拉丁名：Saccharomyces cerevisiae
[0050]保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0051]保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0052]保藏日期：2021年11月5日
附图说明
[0053]图1为工程化酵母CE
‑
P1合成金盏花苷E的液相色谱
‑
质谱联用检测结果。
[0054]图2为工程化酵母CE
‑
P1与人源UGDH、已报道纤维素合酶关于合成金盏花苷E的液相色谱检测结果对比。
[0055]图3为工程化酵母IVA
‑
P1合成竹节参皂苷Ⅳa的液相色谱
‑
质谱联用检测结果。
[0056]图4为工程化酵母R1
‑
P1合成竹姜状三七苷R1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株可高效合成金盏花苷E的工程酵母菌CE
‑
P1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.23731。2.一种高效合成金盏花苷E的方法，其特征在于，培养保藏号为CGMCC No.23731的工程酵母菌CE
‑
P1；优选地，所述培养指将工程酵母菌CE
‑
P1接种YPD培养基培养3
‑
7天优选5天；优选地，所述接种指将OD
600
为2
‑
5的工程酵母菌CE
‑
P1的种子液按体积比5％
‑
15％优选10％接种至YPD培养基中；优选地，培养条件为28
‑
30℃。3.一株可高效合成竹节参皂苷Ⅳa的工程酵母菌IVA
‑
P1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.23732。4.一种可高效合成竹节参皂苷Ⅳa的方法，其特征在于，培养保藏号为CGMCC No.23732的工程酵母菌IVA
‑
P1；优选地，所述培养指将工程酵母菌IVA
‑
P1接种YPD培养3
‑
7天优选5天；优选地，所述接种指将OD
600
为2
‑
5的工程酵母菌IVA
‑
P1的种子液按体积比5％
‑
15％优选10％接种至YPD培养基中；优选地，培养条件为28
‑
30℃。5.一株可高效合成姜状三七苷R1的工程酵母菌R1
‑
P1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.23733。6.一种可高效合成姜状三七苷R1的方法，其特征在于，培养保藏号为CGMCC No.23733的工程酵母菌R1
‑
P1；优选地，所述培养指将工程酵母菌R1
【专利技术属性】
技术研发人员：冯旭东，任师超，李春，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。