具有α-淀粉酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽制造技术

本申请提供了三种具有α

【技术实现步骤摘要】
具有
α
‑
淀粉酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽


[0001]本申请属于生物
和糖尿病治疗领域。具体地，本申请提供了三种具有α
‑
淀粉酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽，其在制备糖尿病患者适用的食品、保健品、药物中的应用以及相应产品。

技术介绍

[0002]淀粉是人体饮食中最重要的碳水化合物来源之一，约占人类饮食能量的40
‑
60％。然而，体内淀粉的快速消化会导致餐后血糖快速升高，这与2型糖尿病呈正相关。因此，如何减缓淀粉消化受到了广泛关注。目前有两种方法可以调节淀粉消化。一是改变淀粉的理化性质，如物理改性、化学改性或生物改性，二是降低与淀粉水解相关的消化酶的活性，如α
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淀粉酶。通常，淀粉会被α
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淀粉酶消化成麦芽糖和糊精，随后进一步转化为葡萄糖，从而增加血糖水平。因此，抑制α
‑
淀粉酶是缓解餐后血糖的有效方法。
[0003]目前应用于临床上用来控制糖尿病餐后血糖的α
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淀粉酶抑制剂会引起许多不良反应，如腹泻、腹部不适、气胀和肠胃胀气。因此，有必要寻找能够治疗2型糖尿病且无副作用或副作用风险低的新型α
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淀粉酶抑制剂。近些年来，食物蛋白质作为功能肽的主要来源被广泛研究。许多食源性肽已被证明具有抗菌特性、降血压作用、降低胆固醇、抗血栓形成和抗氧化活性等。小米中的醇溶蛋白能够发挥较好的降糖功效。目前已从小米蛋白中分离出了抗氧化、抗炎以及脂肪酶抑制肽，尚未有关于小米蛋白降糖肽的相关研究。小米醇溶蛋白在通过灌胃被给予糖尿病小鼠后，经过胃肠道消化被水解为氨基酸和肽，进入血液循环发挥包括降糖等生理作用。因此，小米醇溶蛋白水解得到的小分子肽可以作为潜在的功能性降糖物质。但目前对小米中具有改善血糖作用的机制的活性组分不清。

技术实现思路

[0004]一方面，本申请提供了具有α
‑
淀粉酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽，其由小米醇溶蛋白消化而成。
[0005]进一步地，所述小米醇溶蛋白肽氨基酸序列为:
[0006]PFQQCH，SEQ ID NO.1；
[0007]TPNFF，SEQ ID NO.2；
[0008]或者FMLPQ，SEQ ID NO.3。
[0009]进一步地，所述小米醇溶蛋白肽氨基酸序列为:TPNFF，SEQ ID NO.2。
[0010]另一方面，本申请提供了上述小米醇溶蛋白肽作为α
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淀粉酶抑制剂的应用。
[0011]另一方面，本申请提供了上述小米醇溶蛋白肽在制备治疗糖尿病的药物，或者糖尿病或者适用的食品或保健品中的应用。
[0012]另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含上述小米醇溶蛋白肽。
[0013]进一步地，所述药物组合物为口服剂型。
[0014]进一步地，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
[0015]另一方面，本申请提供了一种食品或保健品，其包含上述小米醇溶蛋白肽。
[0016]本申请中的药物、保健品或食品中除本申请的小米醇溶蛋白肽之外还可以包含药品、食品、保健品中可以接受的各种辅料或者赋形剂，所述辅料或者赋形剂包括但不限于填充剂、矫味剂、pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、抗氧化剂等。
[0017]本申请的小米醇溶蛋白肽可以与其他本领域已知或研究中的有α
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淀粉酶抑制活性或者糖尿病治疗作用/辅助治疗的中西药物或保健品联合使用，这些中西药物或保健品可以与本申请的药物、食品、保健品混合、处于一个包装中或者在独立的包装中。
[0018]本申请中的糖尿病包括但不限于1型和2型糖尿病。
[0019]有益效果为：
[0020]本申请首次从小米醇溶蛋白中筛选得到了能够有效抑制α
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淀粉酶活性的三条未经报道的小肽PFQQCH、TPNFF和FMLPQ，并明确了小肽PFQQCH、TPNFF和FMLPQ的结构；同时PFQQCH、TPNFF和FMLPQ具有安全无毒副作用和良好的人体肠道吸收特性等优点，因此作为功能成分用于食品、保健品以及降糖药品中，具有良好的潜力和应用前景。
附图说明
[0021]图1为PFQQCH与α
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淀粉酶的对接结果的3d图；
[0022]图2为TPNFF与α
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淀粉酶的对接结果的3d图；
[0023]图3为FMLPQ与α
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淀粉酶的对接结果的3d图；
[0024]图4为三种多肽的α
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淀粉酶抑制率柱状图。
具体实施方式
[0025]实施例1蛋白的体外模拟消化酶解及虚拟筛选
[0026]本专利技术采用体外模拟消化的方法对小米醇溶蛋白进行酶解，将酶切后产生的小米醇溶蛋白水解物进行超滤处理，得到小于3kDa,大于3kDa且小于10kDa,和大于10kDa的肽组分，通过质谱对小于3kDa的肽组分测序，得到置信度较高的肽段序列。然后采用殷赋云平台(http://cloud.yinfotek.com/)中的Dock 6.9对得到的肽段序列进行虚拟筛选，根据肽段的格点打分(<
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70kcal/mol)以及内部排斥能(<20kcal/mol)筛选得到与α
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淀粉酶对接效果较好的肽段。具体的：
[0027]小米醇溶蛋白的提取：
[0028]采用盐析法提取小米醇溶蛋白。取脱脂小米粉，加入70％乙醇(v/v)，料液比为1：7，在50℃条件下水浴振荡2小时，在7000rpm下离心20min并收集上清液，加入0～4℃的冷盐水稀释至原体积的3倍，缓慢加入并搅拌，使得最终溶液中氯化钠浓度为0.3％，在0
‑
4℃条件下静置1d使蛋白沉淀。然后在7000rpm下离心20min并收集沉淀，冷冻干燥后即为小米醇溶蛋白，蛋白纯度为90％
[0029]小米醇溶蛋白的体外模拟消化：
[0030]将小米蛋白样品与蒸馏水以1：5的比例混合，调节pH至3,加入2000U/mL的胃蛋白酶，反应2h后调节pH到7，再加入胰酶使得消化液中胰酶活力为100U胰蛋白酶/mL消化液，继续反应2h，反应结束后沸水浴灭酶10min以终止反应。最后在7000rpm下离心10min收集沉淀,得到蛋白消化后的水解产物。
[0031]小米醇溶蛋白体外模拟消化产物的超滤：
[0032]用超纯水预清洗Ultra
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15离心过滤器，洗后甩干。然后选取分离分子量为3kDa的离心过滤器，向过滤器内加入不超过15mL的样本，将盖好盖子的过滤装置放入离心转子中，转速为5000
×
g，旋转约30min。离心结束后，取下盖子和过滤器，将离心管中的液体收集并冻干，即为小于3kDa的蛋白水解物超滤样本。
[0033]小米醇溶蛋白体外模拟消化产物的质谱测序及筛选：<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有α
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淀粉酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽，其特征在于，其由小米醇溶蛋白消化而成。2.根据权利要求1所述的小米醇溶蛋白肽，所述小米醇溶蛋白肽氨基酸序列为:PFQQCH，SEQ ID NO.1；TPNFF，SEQ ID NO.2；或者FMLPQ，SEQ ID NO.3。3.根据权利要求2所述的小米醇溶蛋白肽，其中所述小米醇溶蛋白肽氨基酸序列为:TPNFF，SEQ ID NO.2。4.根据权利要求1
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3任一项所述的小米醇溶蛋白肽作为α
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淀粉酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈群，付永霞，薛勇，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：