Lsa25711转运肽在叶绿体遗传转化中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Lsa25711转运肽在叶绿体遗传转化中的应用。本发明专利技术提供的Lsa25711转运肽为a1）或a2）所示的蛋白质：a1）氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；a2）在序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。通过实验证明：本发明专利技术的Lsa25711转运肽可引导目的蛋白至叶绿体，为叶绿体遗传转化提供了一种新的思路。思路。

【技术实现步骤摘要】
Lsa25711转运肽在叶绿体遗传转化中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及Lsa25711转运肽在叶绿体遗传转化中的应用。

技术介绍

[0002]植物细胞含有多种不同的亚细胞细胞器，它们被统称为“质体”，由特征性的膜系统限定边界并在细胞内执行专化的功能。根据所含有的色素不同可以分为黄色、红色和橙色的有色体，无色的白色体，绿色的叶绿体以及黄花幼苗中的黄化质体等。
[0003]在高等植物中，最让人关注的质体是叶绿体。叶绿体最基本的功能是实施光驱动的光合作用反应。同时叶绿体还参与农用化学品工业中的特别重要的过程。例如，已知许多除草剂通过阻断在叶绿体内运作的功能来发挥作用。
[0004]运往叶绿体表达的前体蛋白含有称作叶绿体转运肽（CTP）的N端延伸（extension）。转运肽在叶绿体表面的特异性识别中起作用，并参与介导前体蛋白穿过叶绿体膜并被运送至叶绿体内的各个亚室（sub
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compartment），如基质、类囊体和类囊体膜。叶绿体转运肽对于前体蛋白进入叶绿体中至关重要。
[0005]但由于转运肽结构的高度多样性且缺少共同或共有序列基序，如何支持精确的蛋白质输入到叶绿体以及如何确定转运肽的输入特异性仍然是亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种可将目的蛋白引导至叶绿体的转运肽。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了一种转运肽。
[0008]本专利技术提供的转运肽来源于生菜，名称为Lsa25711，所述Lsa25711转运肽为a1）或a2）所示的蛋白质：a1）氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；a2）在序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。
[0009]上述a2）所述的蛋白质中，所述标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。
[0010]上述a1）或a2）所述的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术又提供了与Lsa25711转运肽相关的生物材料。
[0012]本专利技术提供的与Lsa25711转运肽相关的生物材料为下述A1）至A8）中的任一种：A1）编码Lsa25711转运肽的核酸分子；A2）含有A1）所述核酸分子的表达盒；A3）含有A1）所述核酸分子的重组载体；A4）含有A2）所述表达盒的重组载体；
A5）含有A1）所述核酸分子的重组微生物；A6）含有A2）所述表达盒的重组微生物；A7）含有A3）所述重组载体的重组微生物；A8）含有A4）所述重组载体的重组微生物。
[0013]上述生物材料中，A1）所述核酸分子为如下1）或2）所示的基因：1）其编码序列是序列1所示的DNA分子；2）与1）限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码Lsa25711转运肽的DNA分子。
[0014]本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术的编码Lsa25711转运肽的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有编码Lsa25711转运肽的核苷酸序列75%或者更高同一性的核苷酸，只要编码Lsa25711转运肽且具有相同功能，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。
[0015]这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75%或更高，或85%或更高，或90%或更高，或95%或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比（%）表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
[0016]上述75%或75%以上同一性，可为80%、85%、90%或95%以上的同一性。
[0017]为了实现上述目的，本专利技术还提供了上述Lsa25711转运肽或与其相关的生物材料的新用途。
[0018]本专利技术提供了上述Lsa25711转运肽或与其相关的生物材料在将目的蛋白定位于叶绿体中的应用。
[0019]本专利技术还提供了上述Lsa25711转运肽或与其相关的生物材料在将目的蛋白引导至叶绿体中的应用。
[0020]本专利技术还提供了上述Lsa25711转运肽或与其相关的生物材料在叶绿体遗传转化中的应用。
[0021]为了实现上述目的，本专利技术还提供了一种将目的蛋白定位于叶绿体的方法。
[0022]本专利技术提供的将目的蛋白定位于叶绿体的方法包括如下步骤：在受体植物中将Lsa25711转运肽和目的蛋白进行融合表达，进而使所述目的蛋白定位于所述受体植物的叶绿体中。
[0023]上述方法中，所述Lsa25711转运肽融合在所述目的蛋白的氨基端。
[0024]进一步的，所述在受体植物中将Lsa25711转运肽和目的蛋白进行融合表达的方法为将由Lsa25711转运肽和目的蛋白融合而成的融合蛋白的编码基因导入受体植物。
[0025]更进一步的，所述融合蛋白的编码基因通过重组表达载体导入受体植物。
[0026]所述重组表达载体含有依次由编码Lsa25711转运肽的核酸分子和编码目的蛋白的核酸分子组成的DNA片段。
[0027]所述融合蛋白的编码基因通过重组表达载体导入受体植物的方法包括如下步骤：将所述重组表达载体导入农杆菌中，得到重组菌；用所述重组菌侵染受体植物，实现受体植物瞬时转化。
[0028]所述重组菌侵染受体植物的方法可为注射法。
[0029]所述编码Lsa25711转运肽的核酸分子为序列1所示的DNA分子。
[0030]在本专利技术的具体实施例中，所述重组载体为pYBA1132
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Lsa25711
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GFP，所述重组载体pYBA1132
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Lsa25711
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GFP为将载体pYBA1132（该载体包括184 bp NOS promoter，795 bp NeoR/KanR，253 bp NOS terminator和346 bp CaMV 35S promoter）的XbaI和SalI酶切位点间的DNA分子替换为序列1所示的DNA分子，且保持载体pYBA1132的其他序列不变后得到的载体。
[0031]为了实现上述目的，本专利技术最后提供了一种融合蛋白或其相关生物材料；所述融合蛋白为由Lsa25711转运肽和目的蛋白融合而成的融合蛋白；所述生物材料为编码所述融合蛋白的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒或重组载体或重组微生物。
[0032]上述方法或上述融合蛋白或编码所述融合蛋白的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物在叶绿体遗传转化中的应用也属于本专利技术的保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转运肽，为a1）或a2）所示的蛋白质：a1）氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；a2）在序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。2.与权利要求1所述转运肽相关的生物材料，为下述A1）至A8）中的任一种：A1）编码权利要求1所述转运肽的核酸分子；A2）含有A1）所述核酸分子的表达盒；A3）含有A1）所述核酸分子的重组载体；A4）含有A2）所述表达盒的重组载体；A5）含有A1）所述核酸分子的重组微生物；A6）含有A2）所述表达盒的重组微生物；A7）含有A3）所述重组载体的重组微生物；A8）含有A4）所述重组载体的重组微生物。3.根据权利要求2所述的相关生物材料，其特征在于：A1）所述核酸分子为如下1）或2）所示的基因：1）其编码序列是序列1所示的DNA分子；2）与1）限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码权利要求1所述转运肽的DNA分子。4.权利要求1所述的转运肽或权利要求2或3所述的生物材料在将目的蛋白定位于叶绿体中的应用；或，权利要求1所述的转运肽或权利要求2或...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨效曾，杨靖，王向峰，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：