一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，涉及生物工程技术领域；为了解决现有技术中处理的蛋白非活性的问题；具体包括如下步骤：古法熬制植物材料制备提取液；测定提取液的RNAse核糖核酸酶活性、体积及光密度；准备提取工具；低温环境提取活性蛋白；将制备好的活性蛋白定量分装于≤

【技术实现步骤摘要】
一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法。

技术介绍

[0002]草药主要根据所含有的活性成分入药，为了充分利用资源和探索新的活性成分，其中蛋白质成分逐渐受到关注，近年来，已有许多具有生物活性的蛋白质相继在多种中草药中被发现。上世纪90年代初，研发人员在珍稀物种植物及花果果核里，通过特殊的民间传统萃取技术，提炼出“活性蛋白激酶素”，该蛋白激酶富含氨基酸、维生素、植物多糖和植物碱等人体所依赖的生命营养素，有助于健康细胞再生，提高机体免疫力。分离纯化草药中的活性蛋白质成分，以期找到一些新的具有生物活性的蛋白质源，已经成为国内外众多研究工作者的一个重要方向。
[0003]活性蛋白是指除具有一般蛋白质的营养作用外，还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗血栓等特殊生理功能的一类蛋白质，在食品、医药等领域均有重要作用。众所周知，DNA是一切生物的遗传物质的基础，DNA经过转录称为RNA，RNA经过翻译称为蛋白质。现有技术中分离及提纯的RNA(核糖核酸)非活性，应用于细胞修复等方面存在一定的局限性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，包括如下步骤：
[0007]S1：古法熬制植物材料制备提取液；
[0008]S2：测定提取液的RNAse核糖核酸酶活性、体积及光密度；
[0009]S3：准备提取工具；
[0010]S4：低温环境提取活性蛋白；
[0011]S5：将制备好的活性蛋白定量分装于≤
‑
80℃左右的无菌环境中保存；
[0012]所述植物材料为需具备完整真核细胞的植物种子、果核；
[0013]所述提取液的制备方法，包括以下内容：
[0014]A1：备料：从产地、年份、色泽、气味、味道方面把关，精选优质材料；
[0015]A2：浸泡：按根、籽、骨、茎果、花、枝、叶类，分别放入容量适当的洁净砂锅内，冷水没过植物表面5～20cm，浸泡5～24h；
[0016]A3：煎煮：将浸泡后的植物连同浸泡的水一起置入煎煮锅内，加水超过植物表面8～20公分，煎煮3～5次，收集植物汁水；
[0017]A4：沉降、过滤：单次煎煮后采用纱布过滤出植物汁水，合并数次提取液后将之沉淀5～12h，取上清液过100目筛2～5遍，得到提取液。
[0018]优选地：所述煎煮的具体操作为：用大火煮沸后转文火煎煮≈1h，最后转为微火直
至煮沸，单次煎煮时间为2～3h。
[0019]优选地：所述RNAse核糖核酸酶活性的测定方法：
[0020]B1：取0.1ml提取液放入离心管中，与0.05mol/L疏基乙醇+1ml酵母RNA+0.35mol/L且pH5的醋酸缓冲液混合均匀，在37℃水浴中保温30min，检测RNAse核糖核酸酶的A260；
[0021]B2：将离心管放入冰浴中放置3～4min，加入1.5ml低温的硝酸镧+氯化氢混合溶液，震荡混合后置于5000rpm/min冷冻离心机中离心12min，测定提取液的体积；
[0022]B3：取提取液0.5ml+4.5ml蒸馏水，在260nm下利用紫外
‑
可见分光光度计测定OD值。
[0023]优选地：所述准备提取工具的内容为将涉及工具在使用前照射≥30min的紫外线。
[0024]优选地：所述活性蛋白的提取方法，包括以下步骤：
[0025]C1：向550ul的低温蛋白提取物液中加入3ul蛋白酶抑制剂混合物和3ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用；
[0026]C2：取80ml提取液加入蛋白提取物液混合，置入低温洁净离心管中，于2～5℃温度环境中13000rpm/min条件下离心3～5min；
[0027]C3：抽取澄清液，得到活性蛋白样品。
[0028]优选地：所述澄清液需采用截留分子量为10kDa滤膜过滤2～3次。
[0029]优选地：所述活性蛋白的提取，还包括以下对于活性蛋白的纯化内容：
[0030]D1：将澄清液加入瓷土制成的离心柱中，于2～5℃温度环境中10000rpm/min条件下离心2～4min；
[0031]D2：去除离心液，在离心柱中加入500ul药液A，于2～5℃温度环境中9000rpm/min条件下二次离心2～4min；
[0032]D3：再次去除离心液，将离心柱转入试管内加入500ul药液B，于2～5℃温度环境中放置半小时；
[0033]D4：再于2～5℃温度环境中10000rpm/min条件下再次离心2～4min，得到较纯的活性蛋白。
[0034]优选地：所述药液A的质量配比为2：1：0.01的磷酸二氢钠、氯化钠和咪唑，磷酸二氢钠的PH为8。
[0035]优选地：所述药液B的质量配比为2：1：0.85的磷酸二氢钠、氯化钠和咪唑，磷酸二氢钠的PH为8。
[0036]本专利技术的有益效果为：
[0037]1.本专利技术中提取的活性蛋白具有超强的细胞修复、激活细胞作用，同时具有替代抗生素的功效，与动物或植物机体内的抗体结合，可以起到增强生物体免疫力、再生细胞等作用，可广泛应用食品、医疗、洗护用品及化妆品、畜牧业饲料等产品中，可作为有益的辅助治疗手段，应用前景较为广泛。
[0038]2.本专利技术采用古法制备提取液，保持了完整的生物活性，对人体重要的生理功能和健康有着非常神奇的修复功效。
[0039]3.本专利技术提纯活性蛋白过程较为稳定，不但可以去除不需要的DNA、RNA的污染，而且还可以清除不需要的蛋白质，操作方便，可快速提纯活性蛋白，回收量大、纯度高。
附图说明
[0040]图1为本专利技术提出的一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法的流程示意图。
具体实施方式
[0041]下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
[0042]下面详细描述本专利的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。
[0043]实施例1：
[0044]一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，如图1所示，包括如下步骤：
[0045]S1：古法熬制植物材料制备提取液；
[0046]S2：测定提取液的RNAse核糖核酸酶活性、体积及光密度；
[0047]S3：准备提取工具；
[0048]S4：低温环境提取活性蛋白；
[0049]S5：将制备好的活性蛋白定量分装于≤
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80℃左右的无菌环境中保存，使生物活性蛋白进入休眠状态，达到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：古法熬制植物材料制备提取液；S2：测定提取液的RNAse核糖核酸酶活性、体积及光密度；S3：准备提取工具；S4：低温环境提取活性蛋白；S5：将制备好的活性蛋白定量分装于≤
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80℃左右的无菌环境中保存；所述植物材料为需具备完整真核细胞的植物种子、果核；所述提取液的制备方法，包括以下内容：A1：备料：从产地、年份、色泽、气味、味道方面把关，精选优质材料；A2：浸泡：按根、籽、骨、茎果、花、枝、叶类，分别放入容量适当的洁净砂锅内，冷水没过植物表面5～20cm，浸泡5～24h；A3：煎煮：将浸泡后的植物连同浸泡的水一起置入煎煮锅内，加水超过植物表面8～20公分，煎煮3～5次，收集植物汁水；A4：沉降、过滤：单次煎煮后采用纱布过滤出植物汁水，合并数次提取液后将之沉淀5～12h，取上清液过100目筛2～5遍，得到提取液。2.根据权利要求1所述的一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，其特征在于，所述煎煮的具体操作为：用大火煮沸后转文火煎煮≈1h，最后转为微火直至煮沸，单次煎煮时间为2～3h。3.根据权利要求2所述的一种植物提取铀蓝蛋白的制备方法，其特征在于，所述RNAse核糖核酸酶活性的测定方法：B1：取0.1ml提取液放入离心管中，与0.05mol/L疏基乙醇+1ml酵母RNA+0.35mol/L且pH5的醋酸缓冲液混合均匀，在37℃水浴中保温30min，检测RNAse核糖核酸酶的A260；B2：将离心管放入冰浴中放置3～4min，加入1.5ml低温的硝酸镧+氯化氢混合溶液，震荡混合后置于5000rpm/min冷冻离心机中离心12min，测定提取液的体积；B3：取提取液0.5ml+4.5ml蒸馏水，在260nm下利用紫外
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可...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟庆国，李立星，陈晓宣，
申请(专利权)人：重庆佰东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：