稳定表达外源蛋白CHO细胞高效表达体系及其筛选方法和在PCV2 Cap蛋白中的应用技术

本发明专利技术公开了一种CHO细胞高效表达体系，所述的CHO细胞中含有CAG启动子基因‑人干扰素‑α2信号肽基因‑Luc基因的真核表达载体。本发明专利技术还公开了一种所述的CHO细胞高效表达体系的筛选方法，所述的方法包括以下步骤：启动子的筛选和信号肽的筛选。本发明专利技术还公开了一种所述的CHO细胞高效表达体系在PCV2Cap蛋白表达中的应用，所述的应用是将PCV2Cap蛋白基因替换所述的真核表达载体中的Luc基因。本发明专利技术所述的CHO细胞高效表达体系使用时，直接将目的蛋白基因替换Luc基因，即可实现目的蛋白在CHO细胞中稳定高效分泌表达，且使用我们的体系在PCV2Cap蛋白的表达中的应用很成功。

【技术实现步骤摘要】
稳定表达外源蛋白CHO细胞高效表达体系及其筛选方法和在PCV2Cap蛋白中的应用
本专利技术涉及稳定表达外源蛋白CHO细胞高效表达体系及其筛选方法和在PCV2Cap蛋白中的应用，生物

技术介绍
在哺乳动物细胞表达系统中应用最为普遍的是中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovarycells,CHO)表达系统。CHO细胞被广泛用作表达外源蛋白的宿主细胞的优势如下：(1)其具有高效的翻译后修饰能力，CHO细胞产生的重组蛋白与天然蛋白分子更相似；(2)CHO细胞已被大量研究证明是一种安全的表达外源蛋白的宿主细胞，因此它们可能更容易从FDA之类的监管机构获得销售生产治疗蛋白质的资格和批准；(3)使用其它哺乳动物细胞生产蛋白质的主要缺点是生产力低下，但其可以被CHO细胞中的基因扩增来克服；(4)CHO细胞更易于在无血清中进行悬浮细胞培养，通过无血清悬浮培养和驯化的方式，CHO细胞可以在特定的培养基中进行高密度高水平表达外源蛋白，为工业化生产提供了便利。为了进一步提高目的蛋白在CHO细胞中的分泌表达量，转染质粒中的启动子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CHO细胞高效表达体系，其特征在于，所述的CHO细胞中含有CAG启动子基因-人干扰素-α2信号肽基因-Luc基因的真核表达载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞高效表达体系，其特征在于，所述的CHO细胞中含有CAG启动子基因-人干扰素-α2信号肽基因-Luc基因的真核表达载体。


2.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述的CAG启动子基因如SEQIDNO.7所示；所述的人干扰素-α2信号肽基因如SEQIDNO.4所示。


3.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述的Luc基因如SEQIDNO.8所示。


4.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述的CHO细胞为CHO-K1细胞；所述的真核表达载体为pcDNA3.1。


5.一种如权利要求1所述的CHO细胞高效表达体系的筛选方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
1)启动子的筛选：将启动子基因和Luc基因克隆到真核表达载体中，以得到含有启动子基因-Luc基因的重组真核表达载体；将所述的重组真核表达载体转染至CHO细胞中，通过培养CHO细胞，再使用化学发光仪和wersternblot检测Luc蛋白的表达情况，筛选Luc表达量高的启动子用于后续信号肽的筛选；
2)信号肽的筛选：将信号肽基因克隆到1)中筛选的最优的含有启动子基因-Luc基因的重组真核表达载体中，得到含有启动子基因-...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉龙，杨瑞，舒建洪，查银河，
申请(专利权)人：浙江洪晟生物科技股份有限公司，浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33