重组质粒、重组基因VII型新城疫病毒及其培养方法技术

本发明专利技术属于生物领域，公开了一种重组质粒pBR322‑FDHN3‑S1，其序列如序列表SEQ ID NO：1所示。该重组质粒采用强毒性的VII亚型NDV毒株DHN3株为基础，用Lasota弱毒株的F基因替换了DHN3株的F基因，插入S1基因，针对II型、VII型新城疫和IBV具有免疫源性。同时，本发明专利技术还公开了一种重组病毒以及针对该病毒的高滴度培养方法。

【技术实现步骤摘要】
重组质粒、重组基因VII型新城疫病毒及其培养方法
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种重组质粒、重组基因VII型新城疫病毒及其培养方法。
技术介绍
鸡新城疫(ND)、鸡传染性支气管炎(IB)分别是由新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染引起的的鸡急性、高度传染性病毒疾病，两种病毒对不同年龄段、性别和品种的鸡均易感，均能导致鸡群出现呼吸系统、消化系统、生殖系统等疾病，甚至死亡。在养禽生产中，两种病毒混合感染常有发生，能进一步加重疫病情况，严重影响鸡群健康及生产效益。对于上述疫病必须严防死守，目前疫苗防控是最主要手段。随着我国养禽业的快速发展，规模越发加大，对于家禽疫病的防控不仅有利于产业发展，提升经济效益，还有食品安全及人类健康息息相关，因此制备安全有效疫苗有着重要意义。为提高免疫效率，基于基因VII型新城疫病毒及传染性支气管炎病毒S1蛋白，利用反向遗传方式，构建了rFDHN3-S1重组新城疫弱毒疫苗候选株。目前，新城疫疫苗主要应用全病毒灭活疫苗和全病毒弱毒疫苗，其制备方式主要采用鸡胚接种和原代细胞转瓶培养。上述工艺生产本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组质粒pBR322-FDHN3-S1，其特征在于，其序列如序列表SEQ ID NO：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组质粒pBR322-FDHN3-S1，其特征在于，其序列如序列表SEQIDNO：1所示。


2.一种如权利要求1所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，将F1片段、F2片段、F3片段、S1片段同源重组得到重组质粒pBR322-FDHN3-S1；
所述S1片段的序列分别如SEQIDNO：2所示；
所述F1片段、F2片段的制备方法为：以pBR322-FDHN3载体为模板用分别用引物，FDHN3-F1/FDHN3-SmaI-R1；FDHN3-SmaI-F2/FDHN3-R2扩增长度为1463bp的F1，和长度为4845bp的F2PCR片段；
所述pBR322-FDHN3载体、引物FDHN3-F1、FDHN3-SmaI-R1、FDHN3-SmaI-F2、FDHN3-R2的序列如序列表SEQIDNO：3～7所示；
所述F3片段的制备方法为：
用SmaI酶切pBR322-FDHN3载体，并通过胶纯化大小为13996bp的DNA片段F3。


3.根据权利要求2所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述S1片段的制备方法为：
步骤1：取含IBV病毒的鸡胚尿囊液，按核酸提取试剂盒步骤，提取总RNA；
步骤2：使用反转录试剂盒，获取病毒cDNA；
步骤3：S1片段扩增与纯化，取病毒cDNA为模板，加入酶、引物、无菌水，扩增S1片段，PCR产物鉴定正确后，使用胶回收试剂盒，纯化回收S1基因片段；
所述引物为S1-F和S1-R；
引物S1-F和S1-R的序列如序列表SEQIDNO：8～9所示。


4.一种重组基因VII型新城疫病毒，其特征在于，将如权利要求1所述的重组质粒pBR322-FDHN3-S1转染BHK-21细胞，得到重组基因VII型新城疫病...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶俊贤，方倪冉，郑航辉，陈杏桃，杨小云，董楠，
申请(专利权)人：华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44