三筛选标记的抗体表达载体以及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种三筛选标记的抗体表达载体，在同一载体中包括表达框一和表达框二，表达框二以顺向排列的方式紧邻表达框一，在表达框一中，嘌呤霉素抗性基因PuroR通过IRES序列偶联在抗体的轻链基因的下游，再通过E2A多肽将鼠谷氨酰胺合成酶mGS偶联在嘌呤霉素抗性基因PuroR的下游；在表达框二中，二氢叶酸还原酶基因DHFR通过IRES序列偶联在抗体的重链基因的下游。本发明专利技术的三筛选标记的抗体表达载体，在抗体的轻链上链接了PuroR基因和mGS基因，在抗体的重链上链接了DHFR基因，在筛选时，通过控制MTX和MSX的浓度，控制轻链和重链的表达平衡，既能使目标抗体的质量提高，避免产生片段化抗体或多聚体抗体，又能使目标抗体的产量提高。

【技术实现步骤摘要】
三筛选标记的抗体表达载体以及应用
本专利技术涉及生物
，特别是一种三筛选标记的抗体表达载体以及构建方法和应用。
技术介绍
抗体药物是当今生物医药发展的主流，要实现抗体药物的大规模生产，第一步必须要构建高效表达目标抗体的稳定细胞株。其中，抗体表达载体是构建高效表达目标抗体稳定细胞株的关键物质。二氢叶酸还原酶（DHFR）和谷氨酰胺合成酶（GS）是细胞生长代谢通路中的关键物质，分别为细胞的增殖提供碳源和氮源。当细胞基因组中的二氢叶酸还原酶（DHFR）缺失或失活（也可能采用基因敲除的方法使其失活），并且培养基中缺乏碳源的补救合成途径（如次黄嘌呤H和胸腺嘧啶T）时，细胞将由于缺乏碳源而死亡。与其类似，当细胞基因组中谷氨酰胺合成酶基因缺失（也可能采用基因敲除的方法使其失活）或者谷氨酰胺合成酶表达水平较低，并且培养基中缺乏氮源供应时（如谷氨酰胺），细胞将由于缺乏氮源而死亡。因此，当前基于二氢叶酸还原酶（DHFR）和谷氨酰胺合成酶（GS）基因的抗体表达载体是实现抗体高效表达的主要策略。对于二氢叶酸还原酶（DHFR）基因缺失或失活的细胞，在细胞培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在同一载体中包括表达框一和表达框二，表达框二以顺向排列的方式紧邻表达框一，在表达框一中，嘌呤霉素抗性基因PuroR通过IRES序列偶联在抗体的轻链基因的下游，再通过E2A多肽将鼠谷氨酰胺合成酶mGS偶联在嘌呤霉素抗性基因PuroR的下游；在表达框二中，二氢叶酸还原酶基因DHFR通过IRES序列偶联在抗体的重链基因的下游。/n

【技术特征摘要】
1.一种三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在同一载体中包括表达框一和表达框二，表达框二以顺向排列的方式紧邻表达框一，在表达框一中，嘌呤霉素抗性基因PuroR通过IRES序列偶联在抗体的轻链基因的下游，再通过E2A多肽将鼠谷氨酰胺合成酶mGS偶联在嘌呤霉素抗性基因PuroR的下游；在表达框二中，二氢叶酸还原酶基因DHFR通过IRES序列偶联在抗体的重链基因的下游。


2.根据权利要求1所述的三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在所述的表达框一中，CMV启动子设置在抗体的轻链基因的上游，在抗体的轻链基因的5’端和3’端分别加入若干个酶切位点。


3.根据权利要求1所述的三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在所述的表达框一中，在鼠谷氨酰胺合成酶mGS的下游为bGHpolyA基因介导的polyA加尾信号。


4.根据权利要求1所述的三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在所述的表达框二中，鸡β-actin启动子设置在抗体的重链基因的上游，在抗体的重链基因的5’端和3’端分别加入若干个酶切位点。


5.根据权利要求1所述的三筛选标记的抗体表达载体，其特征在于：在所述的表达框二中，在二氢叶酸还原酶基因DH...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡迪超，隋礼丽，孔令洁，
申请(专利权)人：苏州博腾生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32