【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗非综合征性感觉神经性听力损失的方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年7月13日提交的序列号为62/697,652的美国临时专利申请的优先权；所述美国临时专利申请的全部内容通过引用并入本文。
本公开总体上涉及核酸用以治疗人受试者的听力损失的用途。
技术介绍
与综合征性耳聋不同，非综合征性耳聋是不伴有其他征象和症状的听力损失。百分之七十至百分之八十的遗传性耳聋病例是非综合征性的。尽管非综合征性耳聋的原因是复杂的，但研究者已鉴定超过30种在改变时与非综合征性耳聋相关联的基因(例如硬纤毛蛋白(stereocilin，STRC))。当前治疗主要由针对轻度至重度听力损失的听力放大以及针对重度至深度听力损失的耳蜗植入物组成；然而，对于用于预防或逆转非综合征性耳聋的药剂和方法，仍存在长期的需要。听力损失可为传导性的(由耳道或中耳引起)，感觉神经性的(由内耳或听神经引起)，或混合性的。大多数形式的非综合征性耳聋与由对内耳中的结构的损害引起的永久听力损失(感觉神经性耳聋)相关，但一些形式可涉及中耳中的变化(传导性...
【技术保护点】
1.一种组合物，所述组合物包含至少两种不同核酸载体，其中：/n所述至少两种不同载体中的每一者包含编码硬纤毛蛋白的不同部分的编码序列，所编码部分中的每一者的长度是至少30个氨基酸残基，其中所编码部分中的每一者的氨基酸序列可任选地与所编码部分中的不同者的氨基酸序列部分重叠；/n所述至少两种不同载体中没有单一载体编码全长硬纤毛蛋白；/n所述编码序列中的至少一者包含跨越硬纤毛蛋白基因组DNA的两个连续外显子的核苷酸序列，并且缺乏所述两个连续外显子之间的内含子序列；并且/n当引入哺乳动物细胞中时，所述至少两种不同载体经受彼此同源性重组，由此形成编码全长硬纤毛蛋白的重组核酸。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180713 US 62/697,6521.一种组合物，所述组合物包含至少两种不同核酸载体，其中：
所述至少两种不同载体中的每一者包含编码硬纤毛蛋白的不同部分的编码序列，所编码部分中的每一者的长度是至少30个氨基酸残基，其中所编码部分中的每一者的氨基酸序列可任选地与所编码部分中的不同者的氨基酸序列部分重叠；
所述至少两种不同载体中没有单一载体编码全长硬纤毛蛋白；
所述编码序列中的至少一者包含跨越硬纤毛蛋白基因组DNA的两个连续外显子的核苷酸序列，并且缺乏所述两个连续外显子之间的内含子序列；并且
当引入哺乳动物细胞中时，所述至少两种不同载体经受彼此同源性重组，由此形成编码全长硬纤毛蛋白的重组核酸。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每一者是质粒、转座子、粘粒、人工染色体或病毒载体。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每一者是人类人工染色体(HAC)、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)、或P1源性人工染色体(PAC)。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每一者是选自腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体的病毒载体。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述病毒载体是AAV载体。
6.如权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所编码部分中没有一者的氨基酸序列与所编码部分中的不同者的氨基酸序列重叠。
7.如权利要求7所述的组合物，其中所编码部分中的每一者的氨基酸序列与所编码部分中的不同者的氨基酸序列部分重叠。
8.如权利要求7所述的组合物，其中重叠氨基酸序列的长度在约30个氨基酸残基至约1000个氨基酸残基之间。
9.如权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述载体包括两种不同载体，其中每一者包含内含子的不同区段，其中所述内含子包含存在于硬纤毛蛋白基因组DNA中的内含子的核苷酸序列，并且其中两个不同区段在序列方面重叠至少100个核苷酸。
10.如权利要求9所述的组合物，其中两个不同区段在序列方面重叠约100个核苷酸至约800个核苷酸。
11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每一者的核苷酸序列的长度在约500个核苷酸至约10,000个核苷酸之间。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述至少两种不同载体中的每一者的核苷酸序列的长度在500个核苷酸至5,000个核苷酸之间。
13.如权利要求1-12中任一项所述的组合物，其中所述组合物中不同载体的种数是两种。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述两种不同载体中的第一载体包含编码所述硬纤毛蛋白的N末端部分的编码序列。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述硬纤毛蛋白的所述N末端部分的长度在30个氨基酸至1600个氨基酸之间。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述硬纤毛蛋白的所述N末端部分的长度在200个氨基酸至1500个氨基酸之间。
17.如权利要求14-16中任一项所述的组合物，其中所述第一载体还包含启动子和Kozak序列中的一者或两者。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述第一载体包含是诱导型启动子、组成型启动子、或组织特异性启动子的启动子。
19.如权利要求14-18中任一项所述的组合物，其中所述两种不同载体中的第二者包含编码所述硬纤毛蛋白的C末端部分的编码序列。
20.如权利要求19所述的组合物，其中所述硬纤毛蛋白的所述C末端部分的长度在30个氨基酸至1600个氨基酸之间。
21.如权利要求20所述的组合物，其中所述硬纤毛蛋白的所述C末端部分的长度在200个氨基酸至1500个氨基酸之间。
22.如权利要求19-21中任一项所述的组合物，其中所述第二载体还包含多聚(dA)序列。
23.如权利要求1-22中任一项所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
24.一种药盒，所述药盒包括权利要求1-23中任一项所述的组合物。
25.如权利要求24所述的药盒，所述药盒还包括包含所述组合物的预装载注射器。
26.一种方法，所述方法包括：
向哺乳动物的耳蜗中引入治疗有效量的权利要求1-23中任一项所述的组合物。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
28.如权利要求26或27所述的方法，其中所述哺乳动物先前已被鉴定为具有缺陷性硬纤毛蛋白基因。
29.一种使哺乳动物细胞中全长硬纤毛蛋白的表达增加的方法，所述方法包括将权利要求1-23中任一项所述的组合物引入所述哺乳动物细胞中。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是耳蜗外毛细胞。
31.如权利要求29或30所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。
32.如权利要求29-31中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞先前已被确定为具有缺陷性硬纤毛蛋白基因。
33.一种使哺乳动物的耳蜗中的外毛细胞中的全长硬纤毛蛋白的表达增加的方法，所述方法包括：
向所述哺乳动物的所述耳蜗中引入治疗有效量的权利要求1-23中任一项所述的组合物。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述哺乳动物先前已被鉴定为具有缺陷性硬纤毛蛋白基因。
35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
36.一种治疗被鉴定为具有缺陷性硬纤毛蛋白基因的受试者的非症状性感觉神经性听力损失的方法，所述方法包括：
向所述受试者的耳蜗中施用治疗有效量的权利要求1-23中任一项所述的组合物。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述受试者是人。
38.如权利要求36或37所述的方法，所述方法还包括在施用步骤之前确定所述受试者具有缺陷性硬纤毛蛋白基因。
39.一种组合物，所述组合物包含两种不同核酸载体，其中：
所述两种不同核酸载体中的第一核酸载体包含启动子、位于所述启动子的3’的编码硬纤毛蛋白的N末端部分的第一编码序列、以及位于所述第一编码序列的3’末端的剪接供体信号序列；并且
所述两种不同核酸载体中的第二核酸载体包含剪接接受体信号序列、位于所述剪接接受体信号序列的3’末端的编码硬纤毛蛋白的C末端部...
【专利技术属性】
技术研发人员：EJ西蒙斯，R恩格，
申请(专利权)人：阿库斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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