一种异淀粉酶的基因工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种异淀粉酶的基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术以E.coli BW25113为宿主菌，构建了异淀粉酶的基因工程菌E.coli BW25113(A0A147KK56/pBAD HisB）。本发明专利技术基因工程菌表达异淀粉酶蛋白活性高，其酶活可达3936 U/g，生产成本低。本发明专利技术基因工程菌能够广泛应用于α‑环糊精工业生产。

【技术实现步骤摘要】
一种异淀粉酶的基因工程菌及其应用
本专利技术属于基因工程
，更具体地说，它涉及一种异淀粉酶的基因工程菌及其在合成α-环糊精中的应用。
技术介绍
异淀粉酶是淀粉酶家族的重要成员，属于淀粉脱支酶的一种。异淀粉酶是一种内切型淀粉酶，能专一性地切开支链淀粉分支点的α-1，6-糖苷键，可以剪下整个侧支，形成直链淀粉，且不能水解直链分子中的α-1，6-糖苷键。由于异淀粉酶对底物中α-1，6-糖苷键位置的特异性强，因而被广泛应用于酶制剂或食品加工业的加工助剂。异淀粉酶单独使用可使支链淀粉变为直链淀粉，也可与糖化酶、β-淀粉酶、环糊精葡萄糖基转移酶、4-α-葡聚糖转移酶等淀粉酶配合使用生产葡萄糖、麦芽糖、环糊精、抗性淀粉等产品，缩短反应时间，提高淀粉的转化率，降低其他糖化酶制剂的使用量，从而达到增加产量、提高设备利用率、降低生产成本的目的。目前虽然国内在异淀粉酶研究上有相关报道，但现在市场上的商业化产品仍主要为进口酶制剂。目前仍急需研究可以商业化应用的异淀粉酶来扩大异淀粉酶库。现有技术有报道异淀粉酶TfIA，来源于嗜热裂孢菌（Thermobifi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以E.coli BW25113为宿主菌，表达异淀粉酶基因A0A147KK56，所述异淀粉酶基因A0A147KK56的核苷酸序列如SEQNo.1所示，所述基因工程菌构建方法为：将异淀粉酶基因A0A147KK56连接到表达载体pBADHisB上，得到合成质粒A0A147KK56/pBAD HisB；将合成质粒A0A147KK56/pBAD HisB转化到大肠杆菌E.coli BW25113宿主菌中，得到基因工程菌E.coli BW25113(A0A147KK56/pBADHisB）。/n

【技术特征摘要】
1.一种异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以E.coliBW25113为宿主菌，表达异淀粉酶基因A0A147KK56，所述异淀粉酶基因A0A147KK56的核苷酸序列如SEQNo.1所示，所述基因工程菌构建方法为：将异淀粉酶基因A0A147KK56连接到表达载体pBADHisB上，得到合成质粒A0A147KK56/pBADHisB；将合成质粒A0A147KK56/pBADHisB转化到大肠杆菌E.coliBW25113宿主菌中，得到基因工程菌E.coliBW25113(A0A147KK56/pBADHisB）。


2.根据权利要求1所述的异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于所述合成质粒A0A147KK56/pBADHisB转化到大肠杆菌E.coliBW25113宿主菌的具体步骤为：
（1）取一支储存于-80℃含有50~200μL的E.coliBW25113感受态细胞在冰上解冻20~30min；
（2）在合成质粒固体粉末中加入40μL的ddH2O，充分混匀；
（3）取2~3μL的步骤（2）合成质粒溶液加入步骤（1）解冻后的感受态细胞中，加入过程中用手指轻轻拨弹；
（4）将步骤（3）产物在冰上放置20~30min，再将其放置在42℃水浴锅中水浴120s进行热击，热击完成后立即取出放回冰上静置2~5min；
（5）加入800μL的2YT液体培养基，并在振荡频率为200rpm的37℃振荡培养箱培养40min；
（6）取步骤（5）的转化菌液50μL涂布于2YT固体培养基平板上，于37℃培养10~12h；
（...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔树梅，史鲁秋，薛虹宇，汪昌国，苏桂珍，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：南京盛德生物科技研究院有限公司，南京美荣生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32