用于高效外源蛋白表达和高密度培养的工程枯草芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术属于生物工程领域，具体涉及用于高效外源蛋白表达和高密度培养的基因工程枯草芽孢杆菌。通过对组氨酸缺陷型枯草芽孢杆菌进行遗传改造，通过基因操作恢复其

【技术实现步骤摘要】
用于高效外源蛋白表达和高密度培养的工程枯草芽孢杆菌
本专利技术属于生物工程领域，具体涉及用于高效外源蛋白表达和高密度培养的基因工程枯草芽孢杆菌。
技术介绍
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）广泛应用于工业酶制剂的生产和代谢产物的合成，具有以下优点：第一，它具备安全的表达系统。B.subtilis是国际公认的安全微生物（GRAS），可用于食品的生产，没有大肠杆菌（Escherichiacoli）等革兰氏阴性细菌产生的内毒素，也不会产生引起人类和哺乳动物发热的热源性脂多糖（LPS）和致热致敏性蛋白质。第二，繁殖迅速，培养周期短，发酵技术相对成熟。第三，B.Subtilis具有多种蛋白分泌途径，本身能分泌多种蛋白酶和淀粉酶，且只有单层的细胞膜，胞内蛋白不易形成包涵体。第四，遗传背景清晰，超过70种枯草芽孢杆菌完成全基因组测序，基因组学、转录组学、蛋白质组学和分子生物学等领域的研究也得到迅速发展；存在一批丰富的质粒表达系统、基因组编辑工具和基因表达调控工具。第五，密码子没有明显的偏爱性。B.subtilis168及其衍生体，由于其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于高效外源蛋白表达和高密度培养的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于：通过基因工程方法在组氨酸缺陷型枯草芽孢杆菌胞内表达由hisC基因编码的具有活性的组氨醇磷酸氨基转移酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于高效外源蛋白表达和高密度培养的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于：通过基因工程方法在组氨酸缺陷型枯草芽孢杆菌胞内表达由hisC基因编码的具有活性的组氨醇磷酸氨基转移酶。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述基因工程方法是通过在所述枯草芽孢杆菌导入游离质粒表达，和/或在其基因组上原位突变，和/或在其基因组上引入单个或多个拷贝的具有功能的hisC基因。


3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述hisC基因编码的氨基酸序列如NCBI-ProteinID：NP_390143所示，NCBI-ProteinID:NP_601300所示，NCBI-ProteinID:AAV89045所示，NCBI-ProteinID:NP_416525所示，或者NCBI-ProteinID:NP_461018所示。


4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌选自：组氨酸缺陷型菌株SCK6，其芽孢杆菌遗传保藏中心（BacillusGeneticStockCenter，BGSC）的保藏编号为1A976；MW10，其芽孢杆菌遗传保藏中心（BacillusGeneticStockCenter，BGSC）的保藏编号为1A751；DB104，其BGSC的保存编号为1E75，1E76或1E77。


5.如权利要求1至4任一项所述的构建方法，其特征在于，进一步对所述枯草芽孢杆菌中的基因spoIIAC和/或srfAC进行失活、敲除、或者降低其表达。


6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，构建所述重组枯草芽孢杆菌时首先失活、敲除其基因upp以获得能够进行高效无痕遗传操作的复筛选标记。


7.如权利要求1至6...

【专利技术属性】
技术研发人员：马延和，石婷，李运杰，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12