增强正调控蛋白基因表达以提高阿卡波糖发酵水平的方法技术

本发明专利技术公开了一种增强正调控蛋白基因表达以提高阿卡波糖发酵水平的方法。通过在游动放线菌中，利用强启动子kasOp*分别强化表达正调控蛋白基因ACPL_1889、ACPL_4236、ACPL_7303、ACPL_6479和ACPL_8104，得到阿卡波糖高产突变菌株。增强正调控蛋白基因的表达，可以促进阿卡波糖生物合成基因的表达，最终明显提高阿卡波糖产量。与出发菌株相比，本发明专利技术所得到的高产菌株发酵产量分别提高了25％、18％、26％、22％、15％，实验室摇瓶发酵水平分别达到3.29g/L、3.11g/L、3.32g/L、3.21g/L、3.03g/L。

【技术实现步骤摘要】
增强正调控蛋白基因表达以提高阿卡波糖发酵水平的方法
本专利技术涉及的是生物工程领域，具体说是涉及一种增强正调控蛋白基因表达以提高阿卡波糖发酵水平的方法；通过在游动放线菌QQ-2中分别强化表达正调控蛋白基因ACPL_1889、ACPL_4236、ACPL_7303、ACPL_6479和ACPL_8104，可以提高阿卡波糖生物合成基因转录水平，从而可提高阿卡波糖产量。
技术介绍
糖尿病是一种代谢性疾病，其突出特点就是高血糖。目前，2型糖尿病是最常见的糖尿病，约占糖尿病患者总数的90％以上。许多的临床研究证明，餐后血糖的合理控制能够有效减缓或减少部分心脑血管慢性并发症的发生，口服降糖药物并结合饮食结构控制与适量运动是行之有效的干预方法。阿卡波糖被列为治疗2型糖尿病的一线用药，其主要是通过竞争性抑制，降低小肠内的葡萄糖苷酶、蔗糖酶、淀粉酶等的活性，减缓多糖类物质分解形成葡萄糖的过程，从而有效降低餐后血糖。单独服用本类药物通常不会发生低血糖等副作用，同时由于阿卡波糖不仅可以降低血糖水平，还具有减小血糖波动、调节体脂代谢和预防心血管疾病等功效，因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，在游动放线菌中强化表达阿卡波糖生物合成基因簇转录控调相关的正调控蛋白基因，获得阿卡波糖高产菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，在游动放线菌中强化表达阿卡波糖生物合成基因簇转录控调相关的正调控蛋白基因，获得阿卡波糖高产菌株。


2.如权利要求1所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述正调控蛋白基因为正调控蛋白基因ACPL_1889、正调控蛋白基因ACPL_4236、正调控蛋白基因ACPL_7303、正调控蛋白基因ACPL_6479或正调控蛋白基因ACPL_8104，其序列依次如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5所示。


3.如权利要求1所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述游动放线菌包括游动放线菌QQ-2。


4.如权利要求1所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，在游动放线菌中强化表达正调控蛋白基因具体包括如下步骤：
S1，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_1889的整合型质粒I；
S2，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_4236的整合型质粒II；
S3，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_7303的整合型质粒Ш；
S4，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_6479的整合型质粒IV；
S5，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_8104的整合型质粒V；
S6，通过接合转移将整合型质粒I、II、Ш、IV、V分别导入受体菌株中，然后对突变株进行安普霉素抗性验证，并提取基因组通过PCR产物片段大小的差异，筛选得到基因强化表达突变株。


5.如权利要求4所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述整合型质粒I的具体构建方法是，通过PCR扩增的方式分别从游动放线菌SE50/110基因组中获取228bp的ACPL_1889基因片段以及pDR3质粒中获取126bp的强启动子kasOp*基因片段，在质粒pSET152的XbaI/BamHI位点插入126bp的kasOp*基因片段和228bp的ACPL_1889基因片段。


6.如权利要求4所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述整合型质粒II的具体构建方法是，通过PCR扩增的...

【专利技术属性】
技术研发人员：白林泉，汪雪梅，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31