一种产假尿苷工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种产假尿苷工程菌及其应用，所述工程菌是将来源于链霉菌Streptomyces sp.ID38640中的假尿苷合成基因pumH、pumJ和pumD基因克隆至大肠杆菌体内，转化得到可产假尿苷的工程菌，可产假尿苷达7g/L以上。本发明专利技术大肠杆菌基因构建方法简单，发酵过程中不需要添加诱导剂异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷即可获得较高产量的假尿苷，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种产假尿苷工程菌及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种产假尿苷工程菌及其应用。
技术介绍
1957年，DAVIS等在核糖体RNA(ribosomalRNA，rRNA)和转运RNA(transferRNA，tRNA)中首次发现一种与尿嘧啶核苷天然结构类似的异构体，其核糖不与尿嘧啶(Uridine，U)N1相连，而与C5相连，形成假尿嘧啶核苷(Pseudouridine，PU)。(DAVISFF，ALLENFW.Ribonucleicacidsfromyeastwhichcontainafifthnucleotide[J].JBiolChem，1957，227(2)：907-915.)尿苷通过假尿苷合酶从核糖糖碱基裂解并重新连接生成C-C糖苷键，异构化成假尿苷。尿嘧啶核苷与假尿嘧啶核苷化学结构式如式1所示。作为核苷尿苷的一种异构体，假尿苷存在于除信使RNA外的许多类RNA中，包括tRNA和rRNA。假尿苷是非编码RNA中含量最多的修饰核苷，通过稳定RNA结构来增强转移RNA和核糖体RNA的功能。假尿苷是由假尿苷合酶催化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产假尿苷工程菌，其特征在于，利用基因工程技术在宿主菌中表达假尿苷合成相关的基因，得到可产假尿苷的基因工程菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种产假尿苷工程菌，其特征在于，利用基因工程技术在宿主菌中表达假尿苷合成相关的基因，得到可产假尿苷的基因工程菌。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌选自细菌、藻和真菌，优选为大肠杆菌，进一步，优选为大肠杆菌DH5α。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述假尿苷合成相关的基因为：腺苷酸激酶编码基因pumH、tRNA假尿苷合酶编码基因pumJ和HAD(卤代酸脱卤酶)蛋白家族水解酶编码基因pumD。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的编码基因pumH蛋白序列、编码基因pumJ蛋白序列和编码基因pumD蛋白序列均来源于链霉菌Streptomycessp.ID38640，分别为SEQIDNo.1所示的基因pumH蛋白序列、SEQIDNo.2所示的基因pumJ蛋白序列和SEQIDNo.3所示的基因pumD蛋白序列。


5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的基因pumH、pumJ和pumD，其DNA序列均来源于链霉菌Streptomycessp.ID38640，序列分别如SEQIDNo.4所示的核苷酸序列、SEQIDNo.5所示的核苷酸序列和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因pumH、pumJ和pumD，其DNA序列按照大肠杆菌密码子偏好性进行优化，优化后的序列分别如SEQIDNo.7所示的核苷酸序列、SEQIDNo.8所示的核苷酸序列和SEQIDNo.9所示的核苷酸序列。


7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括对所述的密码子偏好性优化后的基因pumH、pumJ和pumD进行修饰，具体为pumH密码子优化后的核酸序列在起始密码子前连接启动子Ptrp序列，pumJ和pumD密码子优化后的核酸序列在起始密码子前连接RBS序列aaaggaggatatacat，修饰后序列分别如SEQIDNo.10所示的核苷酸序列、SEQIDNo.11所示的核苷酸序列和SEQIDNo.12所示的核苷酸序列。


8.根据权利要求1～7之一所述的产假尿苷工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)pu...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，郑玲辉，廖云娥，周敏，王雪峰，朱进伟，高祥，陈世敏，彭湘屏，石磊，
申请(专利权)人：浙江珲达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33