【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及工业微生物发酵，具体涉及一种茂原链霉菌及其发酵产衣霉素复合物的方法。
技术介绍
1、衣霉素(tunicamycin)属于核苷类抗生素，由尿嘧啶、衣霉糖、n-乙酰葡萄糖胺及脂肪链四个单元组成。衣霉素最早由日本学者从链霉菌s.chartreusis中分离得到，但为混合物。据统计，菌株clavibacter species，s.chartreusis和corynebacterium rathayi均能生产该类抗生素。目前共分离得到37个衣霉素类单体化合物，曾以tunicamycins、streptovirudins、mycospocidins、mm 19290及corynetoxins命名。a.tigatsuki等人以证实衣霉素复合物的四个主要因子(a.takatsuki et al.,agric.biol.chem.41,2307-2309，1977)，具有如下通式结构：
2、
3、(1) tunicamycin a, n＝9
4、(2) tunicamycin b, n＝10
5、(3) tunicamycin c, n＝8
6、(4) tunicamycin d, n＝11
7、衣霉素对大多数革兰氏阳性菌及真菌均有良好的抑制作用。其中，对苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)最小抑菌浓度(mic)平均值为1.27μg/ml，优于万古霉素及卡那霉素等阳性对照。对白色念珠菌(candidaalbicans)的mic为2-32
8、akira tak atsuki等(1970)首先分离到streptomyces dysosuperificus nov.sp菌株，发酵100h后衣霉素复合物产量合计约110mg/l，其中胞内65mg/l，胞外45mg/l。
9、公开于1982年6月的美国专利us4336333a公开了一种制备衣霉素复合物的方法，其通过streptomyces chartreusis(nrrl12338)生产衣霉素复合物，合计产量约为105mg/l。
10、综上所述，针对现有技术中发酵获得衣霉素复合物存在发酵产量低，而化学合成制备工艺中存在的合成步骤长、收率低，较不安全等一系列的问题，因此，本专利技术寻求一种新的微生物，并可通过简单的发酵即可获得较高发酵产量的衣霉素复合物，从而实现衣霉素复合物较低的生产成本。
技术实现思路
1、为了解决衣霉素复合物现有制备方法不足的问题，本专利技术的第一方面在于提供一种新的衣霉素复合物生产菌，该菌为茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，中国北京，保藏编号为cgmcc no.25567，保藏日期为2022年8月20日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2、本专利技术的第二方面在于提供了一种茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224(cgmcc no.25567)在制备衣霉素复合物或者含有衣霉素复合物的药物组合物的应用。
3、本专利技术的第三方面在于提供了一种衣霉素复合物的制备方法，该方法包括采用茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224(cgmcc no.25567)在含有碳源和/或氮源的营养培养基里，进行有氧发酵的步骤。
4、在优选的实施方案中，上述碳源选自淀粉、糊精、葡萄糖、棉籽糖、山梨糖醇、甘油、麦芽糖、果糖、蔗糖、l-阿拉伯糖、d-木糖、鼠李糖、肌醇、d-甘露醇、豆油之一或者上述物质的组合；优选自淀粉、糊精、葡萄糖、山梨糖醇之一或者上述物质的组合。
5、在优选的实施方案中，上述氮源选自酵母抽提粉、酵母粉、酵母膏、大豆卵磷脂、黄豆饼粉、棉籽饼粉、花生饼粉、麸质粉、玉米浆干粉、豆粕、蛋白胨、铵盐、钾盐、尿素之一或者上述物质的组合；所述可同化的氮源优选自酵母抽提粉、黄豆饼粉、玉米浆干粉之一或者上述物质的组合。
6、在优选的实施方案中，上述营养培养基还包括无机盐，所述无机盐选自柠檬酸三钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸铜、氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锰之一或上述物质任意几种的组合，优选碳酸钙、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾或者上述物质任意几种的组合。
7、在优选的实施方案中，所述营养培养基含有玉米淀粉5-50g/l、麦芽糊精5-50g/l、葡萄糖5-60g/l、山梨醇5-50g/l、酵母抽提粉1-15g/l、黄豆饼粉5-20g/l、玉米浆干粉5-20g/l、硫酸镁1-10g/l、磷酸氢二钾2-8g/l、氯化钾1-5g/l、碳酸钙3-50g/l。
8、在优选的实施方案中，所述有氧发酵的温度为20-35℃，优选23-28℃；培养基ph为5.0-8.0，优选5.0-7.0；培养时间为24-240小时，优选180-240小时；通气量为0.1-2.0vvm，优选0.5-1.2vvm。
9、在优选的实施方案中，所述茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224(cgmcc no.25567)是通过种子液接种至所述营养培养基中进行所述发酵培养的；其中，所述种子液是将链霉菌hdcc00224在种子培养基里进行种子培养得到的。
10、在优选的实施方案中，所述的种子培养基含有含有大豆油1-10g/l，葡萄糖5-100g/l，黄豆饼粉5-50g/l，玉米浆粉5-50g/l，碳酸钙1-10g/l；优选大豆油5g/l，葡萄糖70g/l，黄豆饼粉18.5g/l，玉米浆粉5.8g/l，碳酸钙2.5g/l。
11、在优选的实施方案中，所述种子培养的条件为：种子培养的温度为20℃-30℃，优选23℃-28℃；培养基ph为5.0-8.0，优选5.0-7.0；培养时间为24-80小时，优选24-60小时。
12、本专利技术衣霉素复合物通过以下条件进行hplc检测：
13、本专利技术衣霉素复合物效价检测所用的液相检测方法条件如下：
14、色谱柱：c18(250mm×460mm,3.5μm)，流动相a：水，流动相b：乙腈，保留时间：20min，流速：1ml/min，进样量：5μl，检测波长：260nm，柱温：(25±1)℃。
15、表1：流动相a和b的洗脱程序体积比
16、 保留时间min a％ b％ 0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)HDCC00224，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.
2.根据权利要求1所述的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)HDCC00224在制备衣霉素复合物或者含有衣霉素复合物的药物组合物的应用。
3.一种衣霉素复合物的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
9.根据权利要求3-8任一项所述的方法，其特征在于：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmcc no.
2.根据权利要求1所述的茂原链霉菌(streptomyces mobaraensis)hdcc00224在制备衣霉素复合物或者含有衣霉素复合物的药物组合物的应用。
3.一种衣霉素复合物的制备方法，其特征在于：
4.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭湘屏，孙琼，余鹤娟，朱进伟，张敏，石磊，郑玲辉，
申请(专利权)人：浙江珲达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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