异源串联双环肽复合物制造技术

本发明专利技术涉及异源串联双环肽复合物，其包含第一肽配体，所述第一肽配体结合至免疫细胞上存在的组分，所述第一肽配体通过接头缀合至第二肽配体，所述第二肽配体与癌细胞上存在的组分结合。本发明专利技术还涉及所述异源串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异源串联双环肽复合物
本专利技术涉及异源串联双环肽复合物，其包含与免疫细胞上存在的组分结合的第一肽配体，该第一肽配体通过接头缀合至与癌细胞上存在的组分结合的第二肽配体。本专利技术还涉及所述异源串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。
技术介绍
环肽能够以高亲和力和靶标特异性结合蛋白质靶标，因此对于开发治疗剂是有吸引力的分子类别。实际上，临床上已经成功使用了几种环肽，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂药物环孢霉素或抗癌药奥曲肽(Driggers等人(2008)，NatRevDrugDiscov7(7)，608-24)。良好的结合特性是由于肽和靶标之间形成的相对大的相互作用表面以及环结构的构象柔韧性降低。通常，大环结合至数百平方埃的表面，例如环肽CXCR4拮抗剂CVX15(Wu等人(2007)，Science330，1066-71)、具有Arg-Gly-Asp基序与整联蛋白αVb3结合的环肽(Xiong等人(2002)，Science296(5565)，151-5)或与尿激酶型纤溶酶原激活剂结合的环肽抑制剂upain-1(Zhao等人(2007)，JStructBiol160(1)，1-10)。由于其环状构型，肽大环比线性肽的柔韧性差，导致与靶标结合后熵损失较小，并导致更高的结合亲和力。与线性肽相比，降低的柔韧性还导致锁定靶标特异性构象，增加结合特异性。这种作用已通过基质金属蛋白酶8(MMP-8)的有效且选择性的抑制剂得到了例证，该抑制剂在开环时失去了对其他MMP的选择性(Cherney等人(1998)，JMedChem41(11)，1749-51)。通过大环化获得的有利的结合特性在具有多于一个肽环的多环肽中更为显著，例如在万古霉素、乳链菌肽和放线菌素中。不同的研究团队先前已将具有半胱氨酸残基的多肽附着到合成的分子结构上(Kemp和McNamara(1985)，J.Org.Chem；Timmerman等人(2005)，ChemBioChem)。Meloen及其同事已使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速定量地环化到合成的支架上，以结构模拟蛋白质表面(Timmerman等人(2005),ChemBioChem)。在WO2004/077062和WO2006/078161中公开了产生候选药物化合物的方法，其中所述化合物通过将含半胱氨酸的多肽连接至分子支架(例如三(溴甲基)苯)而产生。已经开发了基于噬菌体展示的组合方法来产生和筛选针对感兴趣靶标的双环肽的大文库(Heinis等人(2009)，NatChemBiol5(7)，502-7和WO2009/098450)。简而言之，在噬菌体上展示包含三个半胱氨酸残基和两个区域的六个随机氨基酸的线性肽(Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys)的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链共价连接至小分子(三(溴甲基)苯)而环化。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面，提供了一种异源串联联双环肽复合物，其包含：(a)与免疫细胞上存在的组分结合的第一肽配体；其通过接头缀合至(b)与癌细胞上存在的组分结合的第二肽配体；其中每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，从而在所述分子支架上形成至少两个多肽环。根据本专利技术的进一步的方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含本文定义的异源串联双环肽复合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。根据本专利技术的另一方面，提供了如本文所定义的用于预防、抑制或治疗癌症的异源串联双环肽复合物。附图说明图1：包含EphA2和CD137肽配体的异源串联双环肽复合物与免疫细胞和癌细胞结合的示意图。图2：EphA2-CD137异源串联双环肽复合物BCY7985的结构和组成。图3：在表达EphA2的HT1080细胞存在的情况下，在PromegaCD137荧光素酶报告子分析(CS196008)中分析EphA2-CD13异源串联双环肽复合物BCY7985。图4：EphA2/CD137异源串联在CD137报告子分析中具有活性，激活的诱导倍数取决于共培养所用细胞系上的肿瘤靶标表达水平。图5：EphA2/CD137异源串联在原代人T细胞和癌细胞共培养分析中诱导肿瘤细胞杀伤。通过随时间计数活的Nuclight红色阳性肿瘤细胞来评估肿瘤细胞杀伤。Caspase3/7染料用于鉴定凋亡的肿瘤细胞。图6：在CD137报告子分析中粘连蛋白-4/CD137异源串联具有活性，激活的诱导倍数取决于用于共培养的细胞系(HT1376：粘连蛋白-4高和NCI-H292：粘连蛋白-4中等)中肿瘤靶标的表达水平。图7：在PBMC-4T1共培养分析中，粘连蛋白-4/CD137异源串联诱导IL-2和IFN-γ细胞因子分泌。BCY9350和BCY9351分别是粘连蛋白-4和CD137的非结合对照。图8：粘连蛋白-4/CD137异源串联在原发性患者源性肺肿瘤的离体培养物中诱导靶标依赖性细胞因子释放。(A)在光学显微镜下10X成像中，离体患者来源的肿瘤细胞在培养4h内形成3D球体。(B)在来自3个供体的患者来源的肿瘤样品中粘连蛋白-4表达的流式分析。(C)表显示了3个供体样品中的％CD137+T细胞和粘连蛋白-4+细胞。(D)热图表明响应于对照/测试化合物的治疗，免疫标志物(相对载体标准化)的％变化。(E)响应于对照/测试化合物治疗的％CD8+ki67+T细胞(载体用虚线表示)。图9：在表达PD-L1的细胞系RKO存在下，在CD137报告子分析中PD-L1/CD137异源串联具有活性。图10：异源串联在SD大鼠中的药代动力学：BCY10572和BCY10000的剂量IV为2mg/kg(n＝3)。具体实施方式根据本专利技术的第一方面，提供了一种异源串联双环肽复合物，其包含：(a)与免疫细胞上存在的组分结合的第一肽配体；其通过接头缀合至(b)与癌细胞上存在的组分结合的第二肽配体；其中每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，从而在所述分子支架上形成至少两个多肽环。第一肽配体本文提及的术语“免疫细胞”包括免疫系统内的任何细胞。合适的例子包括白细胞，例如淋巴细胞(例如T淋巴细胞或T细胞，B细胞或自然杀伤细胞)。在一个实施方案中，T细胞是CD8或CD4。在另一个实施方案中，T细胞是CD8。免疫细胞的其他示例包括树突细胞，滤泡树突细胞和粒细胞。在一个实施方案中，免疫细胞上存在的组分是CD137。CD137是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员。它的替代名称是肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)，4-IBB，并由淋巴细胞激活(ILA)诱导。CD137可以由活化的T细胞表达，但在CD8+上的表达程度要大于CD4+T细胞。另外，在炎症部位的树突细胞、滤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异源串联双环肽复合物，其包含：/n(a)与免疫细胞上存在的组分结合的第一肽配体；所述第一肽配体通过接头缀合至/n(b)与癌细胞上存在的组分结合的第二肽配体；/n其中每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，从而在所述分子支架上形成至少两个多肽环。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180404 GB 1805492.4;20181221 GB 1820981.71.一种异源串联双环肽复合物，其包含：
(a)与免疫细胞上存在的组分结合的第一肽配体；所述第一肽配体通过接头缀合至
(b)与癌细胞上存在的组分结合的第二肽配体；
其中每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽含有被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，从而在所述分子支架上形成至少两个多肽环。


2.根据权利要求1所述的异源串联双环肽复合物，其中所述免疫细胞选自：白细胞；淋巴细胞(例如，T淋巴细胞或T细胞，B细胞或自然杀伤细胞)；CD8或CD4；CD8；树突细胞，滤泡树突细胞和粒细胞。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的异源串联双环肽复合物，其中所述免疫细胞上存在的组分是CD137。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中所述第一肽配体包含结合CD137的双环肽配体。


5.根据权利要求4所述的异源串联双环肽复合物，其中所述结合CD137的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：
CiIEEGQYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：1)；
Ci[tBuAla]PE[D-Ala]PYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：3)；
CiIEEGQYCiiF[D-Ala]DPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：4)；
Ci[tBuAla]PK[D-Ala]PYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：5)；
Ci[tBuAla]PE[D-Lys]PYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：6)；
Ci[tBuAla]P[K(PYA)][D-Ala]PYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：7)；
Ci[tBuAla]PE[D-Lys(PYA)]PYCiiFADPY[Nle]Ciii(SEQIDNO：8)；
CiIEE[D-Lys(PYA)]QYCiiFADPY(Nle)Ciii(SEQIDNO：9)；和
[dCi][dl][dE][dE][K(PYA)][dQ][dY][dCii][dF][dA][dD][dP][dY][dNle][dCiii](SEQIDNO：10)；
其中Ci、Cii和Ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，Nle代表正亮氨酸，tBuAla代表叔丁基丙氨酸，PYA代表4-戊炔酸，或其药学上可接受的盐。


6.根据权利要求5所述的异源串联双环肽复合物，其中所述结合CD137的双环肽配体包含N-和C-末端修饰并且包含：
Ac-A-(SEQIDNO：1)-Dap(以下称为BCY7732)；
Ac-A-(SEQIDNO：1)-Dap(PYA)(以下称为BCY7741)；
Ac-(SEQIDNO：3)-Dap(以下称为BCY9172)；
Ac-(SEQIDNO：3)-Dap(PYA)(以下称为BCY11014)；
Ac-A-(SEQIDNO：4)-Dap(以下称为BCY8045)；
Ac-(SEQIDNO：5)-A(以下称为BCY8919)；
Ac-(SEQIDNO：6)-A(以下称为BCY8920)；
Ac-(SEQIDNO：7)-A(以下称为BCY8927)；
Ac-(SEQIDNO：8)-A(以下称为BCY8928)；
Ac-A-(SEQIDNO：9)-A(以下称为BCY7744)；和
Ac-[dA]-(SEQIDNO：10)-[dA]-NH2(以下称为BCY11506)；
其中Ac代表乙酰基，Dap代表二氨基丙酸以及PYA代表4-戊炔酸，或其药学上可接受的盐。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中所述癌细胞选自：HT1080、SC-OV-3、PC3、H1376、NCI-H292、LnCap、MC38和RKO肿瘤细胞。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中所述癌细胞上存在的组分是EphA2。


9.根据权利要求1至8中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中所述第二肽配体包含结合EphA2的双环肽配体。


10.根据权利要求9所述的异源串联双环肽复合物，其中所述结合EphA2的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：
Ci[HyP]LVNPLCiiLHP[dD]W[HArg]Ciii(SEQIDNO：2)；和
CiLWDPTPCiiANLHL[HArg]Ciii(SEQIDNO：11)；
其中Ci、Cii和Ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，HVP代表羟基脯氨酸，dD代表D-构型的天冬氨酸，以及HAg代表高精氨酸，或其药学上可接受的盐。


11.根据权利要求10所述的异源串联双环肽复合物，其中所述结合EphA2的双环肽配体包含N-末端修饰并且包含：
A-HArg-D-(SEQIDNO：2)(以下称为BCY9594)；
[B-Ala]-[Sar10]-A-[HArg]-D-(SEQIDNO：2)(以下称为BCY6099)；
[PYA]-[B-Ala]-[Sar10]-A-[HArg]-D-(SEQIDNO：2)(以下称为BCY6169)；和
[PYA]-[B-Ala]-[Sar10]-VGP-(SEQIDNO：11)(以下称为BCY8941)；
其中HArg代表高精氨酸，PYA代表4-戊炔酸，Sar10代表10肌氨酸单元，B-Ala代表β-丙氨酸，或其药学上可接受的盐。


12.根据权利要求9至11中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中CD137/EphA2复合物选自：BCY9173、BCY7985、BCY8942、BCY8943、BCY9647、BCY9648、BCY9655、BCY9656、BCY9657、BCY9658、BCY9659、BCY9758、BCY10568、BCY10570、BCY10574、BCY10575、BCY10576和BCY10577。


13.根据权利要求1至7中任一项所述的异源串联双环肽复合物，其中所述癌细胞上存在的组分是PD-L1。


14.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·基恩，K·麦克唐奈，P·帕克，P·乌帕德亚雅，G·马德，
申请(专利权)人：拜斯科技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB