异串联双环肽复合物制造技术

本发明专利技术涉及异串联(heterotandem)双环肽复合物，其包含结合存在于癌细胞上的成分的第一肽配体，所述第一肽配体通过接头与一个或多个第二肽配体缀合，所述第二肽配体结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分。本发明专利技术还涉及所述异串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。治疗癌症中的用途。治疗癌症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异串联双环肽复合物


[0001]本专利技术涉及异串联(heterotandem)双环肽复合物，其包含结合存在于癌细胞上的成分的第一肽配体，所述第一肽配体通过接头与一个或多个第二肽配体缀合，所述第二肽配体结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分。本专利技术还涉及所述异串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。

技术介绍

[0002]环肽能够以高亲和力和靶标特异性与蛋白质靶标结合，因此是对于治疗剂开发有吸引力的分子类别。事实上，临床上已经成功使用了几种环肽，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂环孢霉素或抗癌药奥曲肽(Driggers等人(2008),Nat Rev Drug Discov 7(7),608
‑
24)。良好的结合特性是由于肽与靶标之间形成的相对较大的相互作用表面以及环状结构的构象柔韧性降低所致。通常，大环与数百平方埃的表面结合，例如环肽CXCR4拮抗剂CVX15(Wu等人(2007),Science 330,1066
‑
71)、具有与整联蛋白αVb3结合的Arg
‑
Gly
‑
Asp基序的环肽(Xiong等人(2002),Science 296(5565),151
‑
5)或结合尿激酶型纤溶酶原激活因子的环肽抑制剂upain
‑
1(Zhao等人(2007),J Struct Biol 160(1),1
‑
10)。
[0003]由于其环状构型，肽大环比线性肽柔韧性差，导致与靶标结合后熵损失较小，并导致更高的结合亲和力。与线性肽相比，降低的柔韧性还导致锁定靶标特异性构象，增加结合特异性。这种作用已通过一种基质金属蛋白酶8(MMP
‑
8)的有效的和选择性抑制剂得到了例证，该抑制剂在开环时失去相对于其他MMP的选择性(Cherney等人(1998),J Med Chem 41(11),1749
‑
51)。通过大环化获得的有利的结合性质在具有多于一个肽环的多环肽中更为显著，例如在万古霉素、乳酸链球菌肽和放线菌素中。
[0004]不同的研究团队先前已将具有半胱氨酸残基的多肽系于(tether)一个合成的分子结构上(Kemp和McNamara(1985),J.Org.Chem；Timmerman等人(2005),ChemBioChem)。Meloen和同事已使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速定量地环化到合成支架上，以结构模拟蛋白质表面(Timmerman等人(2005),ChemBioChem)。WO 2004/077062和WO 2006/078161中公开了用于生成候选药物化合物的方法，其中所述化合物是通过将包含半胱氨酸的多肽连接到分子支架上而生成的，所述分子支架例如为三(溴甲基)苯。
[0005]已经开发了基于噬菌体展示的组合方法以生成和筛选针对目标靶标的双环肽的大型文库(Heinis等人(2009),Nat Chem Biol 5(7),502
‑
7和WO 2009/098450)。简要地，在噬菌体上展示了包含三个半胱氨酸残基和两个六随机氨基酸的区域(Cys
‑
(Xaa)6‑
Cys
‑
(Xaa)6‑
Cys)的线性肽的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链共价连接至小分子(三
‑
(溴甲基)苯)而得以环化。

技术实现思路

[0006]根据本专利技术的第一方面，提供了一种异串联双环肽复合物，其包含：
[0007](a)第一肽配体，其结合存在于癌细胞上的成分；通过接头与以下缀合
[0008](b)一个或多个第二肽配体，其结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分；
[0009]其中，每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，并且所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
[0010]根据本专利技术的进一步的方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所定义的异串联双环肽复合物，与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。
[0011]根据本专利技术的进一步的方面，提供了如本文所定义的异串联双环肽复合物，其用于预防、抑制或治疗癌症。
附图说明
[0012]图1：通过CD107a上调测量的BCY15664和BCY15911对NK细胞的激活。
[0013]图2至图4：BCY15664、BCY15923和BCY17226的NK细胞毒性测定结果。
[0014]图5：BCY17226的IFNγ分泌测定结果。
[0015]图6至图10：BCY17225、BCY21686、BCY21687、BCY17231、BCY17235、BCY18731、BCY20793、BCY15924、BCY18042、BCY18049、BCY18603和BCY18604的NK细胞毒性测定结果。
[0016]图11至图12：BCY17225、BCY21686、BCY21687和BCY18048的细胞因子分泌测定结果。
具体实施方式
[0017]根据本专利技术的第一方面，提供了一种异串联双环肽复合物，其包含：
[0018](a)第一肽配体，其结合存在于癌细胞上的成分；通过接头与以下缀合
[0019](b)一个或多个第二肽配体，其结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分；
[0020]其中，每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，并且所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
[0021]第一肽配体
[0022]本文提及的术语“癌细胞”包括已知参与癌症的任何细胞。当负责调节细胞分裂的基因受损时，产生癌细胞。致癌作用(carcinogenesis)是由正常细胞遗传物质的突变和表观突变引起的，其破坏增殖和细胞死亡之间的正常平衡。这导致不受控制的细胞分裂和这些细胞在体内通过自然选择的进化。细胞增殖不受控制且通常是快速的，可以导致良性或恶性肿瘤(癌症)。良性肿瘤不会扩散到身体的其他部位或侵入其他组织。恶性肿瘤可以侵入其他器官，扩散到远处(转移)并变得危及生命。
[0023]在一个实施方案中，癌细胞选自HT1080、A549、SC
‑
OV
‑
3、PC3、HT1376、NCI
‑
H292、LnCap、MC38、MC38#13、4T1
‑
D02、H322、HT29、T47D和RKO肿瘤细胞。
[0024]在一个实施方案中，存在于癌细胞上的成分是粘连蛋白
‑
4(Nectin
‑
4)。
[0025]粘连蛋白
‑
4是表面分子，属于蛋白质的粘连蛋白家族，该家族包括4个成员。粘连
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种异串联双环肽复合物，其包含：(a)第一肽配体，其结合存在于癌细胞上的成分；通过接头与以下缀合(b)一个或多个第二肽配体，其结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分；其中，每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，并且所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。2.如权利要求1所定义的异串联双环肽复合物，其中所述反应性基团为半胱氨酸残基。3.如权利要求1或2所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分是存在于NK细胞表面的天然细胞毒性受体，如NKp30、NKp44和NKp46，特别是NKp46，如其中所述一个或多个第二肽配体包含一个或多个结合NKp46的双环肽配体。4.如权利要求3所定义的异串联双环肽复合物，其中所述一个或多个结合NKp46的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：C
i
Y[Cba]PDYLC
ii
[dA]DEYC
iii
(SEQ ID NO：5)；C
i
YLPDYLC
ii
GDEYC
iii
(SEQ ID NO：6)；C
i
DLTTHNC
ii
QWGIC
iii
(SEQ ID NO：7)；C
i
NLQAPC
ii
MQTGKVC
iii
(SEQ ID NO：8)；C
i
NLQNPC
ii
MKFPC
iii
(SEQ ID NO：9)；C
i
YLPDYLC
ii
[dK(PYA)]DEYC
iii
(SEQ ID NO：10)；和C
i
LLHDHC
ii
PNTHPKLC
iii
(SEQ ID NO：11)；或其药学上可接受的盐，其中C
i
、C
ii
和C
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，其中Cba表示β
‑
环丁基丙氨酸，dA表示D
‑
丙氨酸，PYA表示戊炔酸，特别是：其中所述分子支架是TATA，并且所述一个或多个结合NKp46的双环肽配体任选地包含N
‑
末端和/或C
‑
末端修饰，并包含：Ac
‑
(SEQ ID NO：5)
‑
[K(PYA)](在本文中称为BCY17224)；A
‑
(SEQ ID NO：6)
‑
A
‑
[dK(PYA)](在本文中称为BCY15452)；A
‑
(SEQ ID NO：7)
‑
A
‑
[K(PYA)](在本文中称为BCY15686)；A
‑
(SEQ ID NO：8)
‑
A
‑
[K(PYA)](在本文中称为BCY15687)；A
‑
(SEQ ID NO：9)
‑
A
‑
[K(PYA)](在本文中称为BCY18004)；A
‑
(SEQ ID NO：10)
‑
A(在本文中称为BCY17662)；和A
‑
(SEQ ID NO：11)
‑
A
‑
[K(PYA)](在本文中称为BCY18005)；或其药学上可接受的盐，其中PYA表示戊炔酸。5.如权利要求1或2所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分是存在于NK细胞表面的Fc受体，如低亲和力Fcγ受体(FcγR)，其选自FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIC、FcγRIIIA和FcγRIIIB，特别是FcγRIIIA(也称为CD16a)，如其中所述一个或多个第二肽配体包含一个或多个结合CD16a的双环肽配体。6.如权利要求5所定义的异串联双环肽复合物，其中所述一个或多个结合CD16a的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：C
i
VGLEELGPC
ii
SDLC
iii
(SEQ ID NO：12)；
C
i
RWHFSEPC
ii
GAWC
iii
(SEQ ID NO：13)；和C
i
RWSVEDPC
ii
GAWC
iii
(SEQ ID NO：14)；或其药学上可接受的盐，其中C
i
、C
ii
和C
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，特别是：其中所述分子支架是TBMT，并...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：拜斯科技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：