一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法，适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫上包被有胶体金标记的适配体探针；从样品垫到吸收垫的方向上，硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；质控线包被有链霉亲和素蛋白多抗。本申请的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸选用适配体和抗体结合检测新型冠状病毒的N蛋白，亲和力更高，反应速度更快，便于操作，易于质控和保存。

【技术实现步骤摘要】
一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种用于检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法。
技术介绍
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。针对新型冠状病毒的疫苗及特异性治疗药物还没有研发成功，早期的预防和诊断是防控疫情的重要手段。目前，用于检测新型冠状病毒的试纸采用的是抗体对检测，这个试纸的弊端在于，寻找可匹配检测的抗议对的难度较大，而且用于检测对的抗体对的亲和力可能存在较大差异，生产成本较高。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法，适配体胶体金试纸用于检测新型冠状病毒的核壳蛋白基因(nucleocapsidprotein，N)，以下简称N蛋白。根据本申请的一个方面，提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫上包被有胶体金标记的适配体探针；从样品垫到吸收垫的方向上，硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；质控线包被有链霉亲和素蛋白多抗。可选择地，适配体探针包括核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体88中的一种或两种以上；核酸适配体48的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；核酸适配体58的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；核酸适配体88的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。可选择地，适配体探针为生物素化的核酸适配体与链霉亲和素结合，共同形成的链霉亲和素-生物素-核酸适配体结构。可选择地，核酸适配体包括核酸适配体48、核酸适配体58和核酸适配体88；核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体88的比例为1:1:1。可选择地，结合物垫上包被的胶体金标记的适配体探针的工作浓度为1-10pmol/ml；检测线包被的新型冠状病毒N蛋白单抗的工作浓度为1～2mg/ml；质控线包被的链霉亲和素蛋白多抗的工作浓度为1～2mg/ml。可选择地，新型冠状病毒N蛋白单抗检测的新型冠状病毒N蛋白的序列如SEQIDNO：4所示。根据本申请的另一个方面，提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸的制备方法，包括以下步骤：(1)将生物素化的核酸适配体与胶体金标记的链霉亲和素结合，得到链霉亲和素-生物素-核酸适配体；(2)将链霉亲和素-生物素-核酸适配体喷涂到结合物垫上；(3)将新型冠状病毒N蛋白单抗在硝酸纤维素膜上划线；将链霉亲和素蛋白多抗在硝酸纤维素膜上划线；得到包被了检测线和质控线的硝酸纤维素膜；(4)将样品垫结合物垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次固定在底板上，得到用于检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸。可选择地，步骤(1)包括：(1.1)向加热至沸腾的氯金酸水溶液与柠檬酸三钠溶液混合，继续煮沸至溶液呈酒红色后，继续加热预设时长，停止加热，冷却后得到胶体金溶液，其中，氯金酸与柠檬酸三钠的质量比为1:0.9～1.2；其中，胶体金溶液中胶体金的粒径为25～35nm；(1.2)向胶体金溶液中加入碳酸钾，将胶体金溶液的pH值调节到6～6.5；(1.3)将链霉亲和素加入到胶体金溶液中，再向胶体金溶液中加入封闭液，静置第一预定时长，离心分离，向离心分离得到的沉淀物中加入胶体金重悬液使其重新溶解，胶体金重悬液的加入量为胶体金溶液的九分之一到十分之一，得到胶体金标记的链霉亲和素重悬液；(1.4)向胶体金标记的链霉亲和素溶液中加入生物素化的核酸适配体，孵育第二预定时长后，离心得到链霉亲和素-生物素-核酸适配体，向离心分离得到的沉淀物中加入胶体金重悬液使其重新溶解，胶体金重悬液的加入量为胶体金溶液的九分之一到十分之一，得到链霉亲和素-生物素-核酸适配体重悬液。可选择地，生物素化的核酸适配体包括核酸适配体48、核酸适配体58和核酸适配体88中的一种或多种；核酸适配体48的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；核酸适配体58的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；核酸适配体88的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。可选择地，步骤(3)包括：(3.1)将新型冠状病毒N蛋白单抗与磷酸盐缓冲液混合，得到新型冠状病毒N蛋白单抗浓度为1～2mg/ml的检测包被溶液，用划膜机构将检测包被溶液在硝酸纤维素膜上划膜，划膜速度为1μl/cm～2μl/cm；(3.2)将链霉亲和素蛋白多抗与磷酸盐缓冲液混合，得到链霉亲和素蛋白多抗浓度为1～2mg/ml的质控包被溶液，用划膜机构将质控包被溶液在硝酸纤维素膜上划膜；质控包被溶液在硝酸纤维素膜上划膜的速度为1μl/cm～2μl/cm；(3.3)将硝酸纤维素膜置于温度30～40℃、湿度低于30％的环境中，干燥6-8小时。本申请的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸选用适配体和抗体结合检测新型冠状病毒的N蛋白，亲和力更高，反应速度更快，便于操作，易于质控和保存。附图说明构成本专利技术的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本申请中检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸的结构示意图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征向量可以相互任意组合。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。针对新型冠状病毒的疫苗及特异性治疗药物还没有研发成功，早期的预防和诊断是防控疫情的重要手段。目前，新型冠状病毒的诊断通常需要半天到一天才能得到检测结果，而且受检测个体的影响较大，存在假阳性和假阴性的误诊问题，影响防控措施的落实。本申请提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，用于检测新型冠状病毒的N蛋白，其中，新型冠状病毒为COVID-19型新型冠状病毒。具体的，适配体胶体金试纸包括：底板、依次相互搭接设置在底板上的样品垫01、结合物垫02、硝酸纤维素膜03和吸收垫04；结合物垫02上包被有胶体金标记的适配体探针；从样品垫到吸收垫的方向上，硝酸纤维素膜03上依次设置有检测线031和质控线032，检测线031包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；质控线032包被有链霉亲和素蛋白多抗；适配体探针包括核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体88中的一种或两种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，/n所述适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫(01)、结合物垫(02)、硝酸纤维素膜(03)和吸水垫(04)；/n所述结合物垫(02)上包被有胶体金标记的适配体探针；从所述样品垫到所述吸收垫的方向上，所述硝酸纤维素膜(03)上依次设置有检测线(031)和质控线(032)，所述检测线(031)包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；所述质控线(032)包被有链霉亲和素蛋白多抗。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，
所述适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫(01)、结合物垫(02)、硝酸纤维素膜(03)和吸水垫(04)；
所述结合物垫(02)上包被有胶体金标记的适配体探针；从所述样品垫到所述吸收垫的方向上，所述硝酸纤维素膜(03)上依次设置有检测线(031)和质控线(032)，所述检测线(031)包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；所述质控线(032)包被有链霉亲和素蛋白多抗。


2.如权利要求1所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，所述适配体探针包括核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体88中的一种或两种以上；
所述核酸适配体48的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；
所述核酸适配体58的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；
所述核酸适配体88的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。


3.如权利要求2所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，所述适配体探针为生物素化的核酸适配体与链霉亲和素结合，共同形成的链霉亲和素-生物素-核酸适配体结构。


4.如权利要求3所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，所述核酸适配体包括核酸适配体48、核酸适配体58和核酸适配体88；所述核酸适配体48、所述核酸适配体58、所述核酸适配体88的比例为1:1:1。


5.如权利要求1所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，所述结合物垫(02)上包被的胶体金标记的适配体探针的工作浓度为1-10pmol/ml；
所述检测线(031)包被的新型冠状病毒N蛋白单抗的工作浓度为1～2mg/ml；
所述质控线(032)包被的链霉亲和素蛋白多抗的工作浓度为1～2mg/ml。


6.如权利要求5所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，其特征在于，所述新型冠状病毒N蛋白单抗检测的新型冠状病毒N蛋白的序列如SEQIDNO：4所示。


7.一种如权利要求1～6中任一项所述的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将生物素化的核酸适配体与胶体金标记的链霉亲和素结合，得到链霉亲和素-生物素-核酸适配体；
(2)将所述链霉亲和素-生物素-核酸适配体喷涂到结合物垫上；
(3)将新型冠状病毒N蛋白单抗在硝酸纤维素膜上划线；将链霉亲和素蛋白多抗在硝酸纤维素膜上划线...

【专利技术属性】
技术研发人员：章文羿，刘行波，程焕义，黄清瑞，郭娇娇，邵云鹏，陈欣甜，刘佳琪，
申请(专利权)人：北京安必奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11