preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法技术

本发明专利技术公开了一种preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法。其中，本申请中的酶免检测试剂盒包括：preS1抗原包被酶标反应板、样品稀释液、m×浓缩洗涤液、HRP酶标抗人二抗、TMB底物反应液、终止液以及preS1抗体系列梯度标准品；preS1抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区，preS1抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请的乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒，基于定量检测preS1抗体的技术，来检测人体血清、血浆中preS1抗体的含量，用于发现早期乙肝感染者，同时还能用于评估患者感染后的预后能力和用药的治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法
本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体免检测试剂盒、制备方法、使用方法。
技术介绍
乙型肝炎病毒前S1存在于乙肝病毒表面抗原的大蛋白中，是乙肝早期诊断和病毒复制的重要指标，前S1抗体可以阻止病毒进入肝细胞，干扰病毒的复制，急性乙肝顺利康复的患者一般都有preS1抗体，而慢性化发展的急性乙肝前S1抗体的检出率较低，乙型肝炎病毒前S1抗体可以作为乙肝早期诊断和判断患者治疗及预后的标记物。但是，现阶段乙肝的诊断主要依靠血清标志物(两对半)检测，preS1抗体检测试剂缺乏，至今国内没有preS1抗体定量检测的试剂盒，乙肝预后判断主要依据患者的DNA载量来判定。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法。根据本专利技术的第一个方面，提供了一种preS1抗体，preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区，preS1抗体的轻本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种preS1抗体，其特征在于，所述preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述preS1抗体的轻链可变区的编码氨基酸的核酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述preS1抗体的重链可变区的编码氨基酸的核酸序列如SEQ ID NO：2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种preS1抗体，其特征在于，所述preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述preS1抗体的轻链可变区的编码氨基酸的核酸序列如SEQIDNO：1所示，所述preS1抗体的重链可变区的编码氨基酸的核酸序列如SEQIDNO：2所示。


2.一种制备如权利要求1所述的preS1抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：
(A)选择preS1抗体片段，所述preS1抗体片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示，所述preS1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；
(B)将步骤A中的preS1抗体片段的氨基酸序列转译为密码子优化得到的编码preS1抗体的核酸序列；
(C)将优化后的编码preS1抗体的核酸序列进行基因合成，在优化后的编码preS1抗体的核酸序列两端分别连接限制性酶切位点EcoRI和HindIII，合成得到轻链可变区如SEQIDNO:1所示、重链可变区如SEQIDNO:2所示的核酸序列；
(D)将步骤C得到的核酸序列分别连入pcDNA3.1真核表达载体上，将pcDNA3.1真核表达载体转染到人胚肾细胞细胞中培养，收集细胞上清液，将细胞上清液proteinA纯化后得到获得所述preS1抗体。


3.一种乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒，其特征在于，包括：preS1抗原包被酶标反应板、样品稀释液、m×浓缩洗涤液、HRP酶标抗人二抗、TMB底物反应液、终止液以及preS1抗体系列梯度标准品；
所述preS1抗原的核酸序列如SEQIDNO:3所示；所述preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区；所述preS1抗体的轻链可变区的核酸序列如SEQIDNO:1所示；所述preS1抗体的重链可变区的核酸序列如SEQIDNO:2所示。


4.如权利要求3所述的乙型肝炎病毒前S1抗体定量酶免检测试剂盒，其特征在于，所述preS1抗原包被酶标反应板的每个反应孔中封闭包被有第一预定体积的preS1蛋白抗原包被液；
所述preS1蛋白抗原包被液为磷酸换缓冲液稀释preS1蛋白抗原得到的第一预定浓度的preS1蛋白抗原溶液；
所述封闭液为含有羊血清、Tween-20、Proclin300的磷酸盐缓冲液。


5.如权利要求3所述的乙型肝炎病毒前S1抗体定量酶免检测试剂盒，其特征在于，所述preS1抗体系列梯度标准品是以preS1抗体缓冲液为溶剂，配制的不同浓度梯度的preS1抗体标准品；
其中，preS1抗体缓冲液按体积分数计包括7％～12％羊血清、0.1％～0.4％Tween-20、0.05％～0.3％Proclin300、余量为磷酸盐缓冲液。


6.如权利要求3所述的乙型肝炎病毒前S1抗体定量酶免检测试剂盒，其特征在于，
所述样品稀释液按体积分数包括7％～12％羊血清、1％-8％NaCl、
0.1％～0.4％Tween-20、0.05％～0.3％Proclin300的磷酸盐缓冲液；
所述m×浓缩洗涤液为按体积分数包括m×0.1％～0.5％Tween-20的磷酸盐缓冲液；
所述底物反应液为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺溶液；
所述终止液为浓度为1～3mol/L的硫酸溶液。


7.一种如权利要求3～6任一项所述的乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1用磷酸盐缓冲液稀释preS1抗原得到preS1抗原包被液，将preS1抗原包被液注入到酶标反应板的反应孔中包被，包被完毕后用封闭液封闭酶标反应板的反应孔；
S2将羊血清、NaCl、Tween-20、Proclin300加入到磷酸盐缓冲液中配制成样品稀释液，装瓶贴标签，按体积分数计样品稀释液包括7％～12％羊血清、1％-8％NaCl、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：章文羿，刘镇宁，程焕义，黄清瑞，郭娇娇，李玉敏，
申请(专利权)人：北京安必奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11