乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用，属于免疫性疾病治疗技术领域，本发明专利技术中的乌拉尔甘草醇提取物通过调节Th1/Th2的平衡和/或促进调节性T细胞的分化来治疗自身免疫性疾病。

【技术实现步骤摘要】
乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用
本专利技术属于免疫性疾病治疗
，尤其涉及乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。
技术介绍
免疫调节对于维持机体免疫系统、自身稳定极其重要，免疫功能过强会导致机体产生炎症、超敏反应等病理过程，破坏正常的免疫平衡，造成机体组织器官损伤等。免疫抑制剂是一类对机体的免疫反应具有抑制作用的药物，能抑制与免疫反应有关的细胞增殖及功能，进而降低机体的免疫反应，临床上多用于防治免疫功能异常所致的自身免疫性疾病(autoimmunediseases,AID)。多数免疫抑制剂的免疫抑制作用没有特异性和选择性，表现为既可抑制免疫病理反应，又可干扰正常的免疫应答；既可抑制体液免疫，又可抑制细胞免疫。AID是一类自身免疫耐受被打破，激活了的免疫系统攻击自身抗原，由此引起组织(器官)损害的疾病，但病因和发病机制均尚不清楚。目前，AID的治疗主要依靠糖皮质激素和免疫抑制剂。乌拉尔甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)为2010版国家药典认定的三种甘草之一，据研究报道乌拉尔甘草含有多种成分，包括三萜皂苷类、黄酮类、异黄酮类、查耳酮类以及多糖等。现有技术中还未有关于将乌拉尔甘草用于治疗自身免疫性疾病的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。优选的，所述自身免疫性疾病包括哮喘。优选的，所述乌拉尔甘草醇提取物的制备方法，包括以下步骤：1)将乌拉尔甘草与水混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到沉淀；2)将所述步骤1)得到的沉淀与无水乙醇混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到上清液，将所述上清液冷冻干燥，得到乌拉尔甘草醇提取物。优选的，所述步骤1)乌拉尔甘草的质量与水的体积比为1g:10mL。优选的，所述步骤2)沉淀的质量与无水乙醇的体积比为1g:10mL。优选的，所述步骤1)和2)离心的条件分别包括：所述离心的转速为6000rpm，所述离心的时间为10min。优选的，通过调节Th1/Th2的平衡来治疗自身免疫性疾病。优选的，通过促进调节性T细胞的分化来治疗自身免疫性疾病。本专利技术提供了乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。在本专利技术中，乌拉尔甘草醇提取物结合卵清蛋白能显著降低IgG1的水平，即降低了Th2型免疫反应，同时乌拉尔甘草醇提取物结合卵清蛋白显著增加了IgG2a的水平，即增加了Th1型免疫反应，即降低了IgG1/IgG2a的比值，调节了Th1/Th2的平衡来治疗自身免疫性疾病；另外，乌拉尔甘草醇提取物结合卵清蛋白促进了调节性T细胞的分化来治疗自身免疫性疾病。附图说明图1为不同浓度GUEE对DC细胞状态及形态的影响图；图2为GUEE对DC成熟及细胞因子表达的影响图；图3为GUEE对LPS诱导的DC成熟和细胞因子表达的影响图；图4为GUEE对体内DC成熟的影响图；图5为GUEE与OVA联用体内诱导Treg的图；图6为建立的OVA哮喘小鼠模型及抗体水平检测图；图7为GUEE+OVA治疗哮喘小鼠方案图及对哮喘小鼠抗体水平的影响图；图8为GUEE+OVA对小鼠脾脏中细胞免疫反应的影响图图9为GUEE+OVA治疗后，HE染色检测肺部炎症图；图10为GUEE+OVA治疗后，PAS染色检测粘液的图。具体实施方式本专利技术提供了乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草醇提取物的制备方法，优选包括以下步骤：1)将乌拉尔甘草与水混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到沉淀；2)将所述步骤1)得到的沉淀与无水乙醇混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到上清液，将所述上清液冷冻干燥，得到乌拉尔甘草醇提取物。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草的质量与水的体积比优选为1g:10mL。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草优选经过粉碎，得到的粉碎物与水混合，本专利技术对粉碎的条件没有特殊限定，采用常规粉碎药物的条件即可，本专利技术对所述粉碎物的粒径没有特殊限定，采用常规药物经水提取的粉碎粒径即可。在本专利技术中，所述水优选为蒸馏水。在本专利技术中，所述离心的条件优选包括：所述离心的转速优选为6000rpm，所述离心的时间优选为10min。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草优选经水提取3次，合并每次离心得到的沉淀，将合并得到的沉淀经无水乙醇提取。本专利技术将得到的沉淀与无水乙醇混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到上清液，将所述上清液冷冻干燥，得到乌拉尔甘草醇提取物。在本专利技术中，所述沉淀的质量与无水乙醇的体积比优选为1g:10mL。在本专利技术中，所述沉淀优选经无水乙醇提取3次，合并每次离心得到的上清液，将得到的上清液进行冷冻干燥。在本专利技术中，所述离心的条件优选包括：所述离心的转速优选为6000rpm，所述离心的时间优选为10min。在本专利技术中，所述上清液优选于旋转蒸发仪浓缩，体积减少到二十分之一加入少量水以便将乙醇完全蒸干，然后将浓缩液冷冻干燥，得到乌拉尔甘草醇提取物。在本专利技术中，将得到的乌拉尔甘草醇提取物用二甲基亚砜溶解，乌拉尔甘草醇提取物的浓度为50mg/ml，经AlCl3-KAc测黄酮含量，黄酮含量为4.85mg/ml。在本专利技术中，所述自身免疫性疾病优选包括哮喘。本专利技术优选将乌拉尔甘草醇提取物和卵清蛋白混合来治疗哮喘。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草醇提取物与卵清蛋白的质量比优选为1～10:1，更优选为5:1。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草醇提取物以下简称为GUEE，所述卵清蛋白以下简称为OVA。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草醇提取物具有治疗哮喘的作用，但是使用卵清蛋白不具有治疗哮喘的作用，卵清蛋白为抗原，将乌拉尔甘草醇提取物与卵清蛋白联用后具有抗原特异性治疗哮喘的作用。本专利技术通过调节Th1/Th2的平衡来治疗自身免疫性疾病，乌拉尔甘草醇提取物作为耐受佐剂结合卵清蛋白能显著降低IgG1的水平，即降低了Th2型免疫反应，同时乌拉尔甘草醇提取物结合卵清蛋白显著增加了IgG2a的水平，即增加了Th1型免疫反应，即降低了IgG1/IgG2a的比值，调节了Th1/Th2的平衡来治疗自身免疫性疾病。本专利技术通过促进调节性T细胞的分化来治疗自身免疫性疾病，所述调节性T细胞优选为天然的调节性T细胞和/或诱导型调节性T细胞。在本专利技术中，所述乌拉尔甘草醇提取物作为耐受佐剂结合卵清蛋白提高了CD4+CD25+Fox3+调节性T细胞的数量。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。...

【技术保护点】
1.乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.乌拉尔甘草醇提取物在制备治疗自身免疫性疾病的免疫耐受佐剂中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括哮喘。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述乌拉尔甘草醇提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将乌拉尔甘草与水混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到沉淀；
2)将所述步骤1)得到的沉淀与无水乙醇混合，在50～60℃下水浴2～3h，离心，得到上清液，将所述上清液冷冻干燥，得到乌拉尔甘草醇提取物。


4.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金耀，马荣斌，阿地拉·艾皮热，罗娇娇，
申请(专利权)人：新疆前进荣耀投资有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65